High cell-surface GnRH receptor (Gn

High cell-surface GnRH receptor (GnRH-R) levels have been shown to have a major influence on the extent of GnRH agonist-mediated tumor growth inhibition. The ability of the GnRH agonist leuprorelin acetate (LA) to induce a post-transcriptional upregulation of GnRH-R at the plasma membrane of androgen-sensitive (LNCaP) and -insensitive (PC-3) prostate cancer (PCa) cells has been previously demonstrated by Western blotting. Here we performed single molecule force spectroscopy by using Atomic Force Microscopy (AFM), which has proven to be a powerful tool allowing for investigation of living cell surface biological features, such as the so far unclear GnRH agonist/receptor interaction. Thus, in the hormone-insensitive PC-3 cells, we characterized the strength of the LA-receptor binding, and the amount and distribution of the functional receptor molecules on the cell surface. The effect of a long and continuous treatment (up to 30 days) with the agonist (10−11 and 10−6 M) on the same parameters was also investigated. A GnRH-R increase was observed, reaching the maximum (~80%) after 30 days of treatment with the highest dose of LA (10−6 M). The analogue-induced increase in GnRH-R was also demonstrated by Western blotting. In addition, two different receptor bound strengths were detected by AFM, which suggests the existence of two GnRH-R classes. A homogeneous distribution of the unbinding events has been found on untreated and treated PC-3 cell surfaces. The persistence of high receptor levels at the membrane of these living cells may warrant the maintenance of the response to LA also in androgen-unresponsive PCa. Moreover, the determination of ligand/receptor bond strength could shed light on the poorly understood event of LA/GnRH-R interaction and/or address structural/chemical agonist optimizations.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ได้รับการแสดงระดับสูงพื้นผิวเซลล์บางส่วน (บางส่วน-R) ตัวรับมีอิทธิพลสำคัญในขอบเขตการยับยั้งการเจริญเติบโตของเนื้องอก mediated อะโกนิสต์บางส่วน แสดงความสามารถของ acetate leuprorelin อะโกนิสต์บางส่วน (LA) เพื่อก่อให้เกิด upregulation post-transcriptional R บางส่วนที่เมมเบรนของพลาสม่าของ androgen ลับ (LNCaP) และ - เซลล์มะเร็งต่อมลูกหมาก (PCa) (PC-3) ซ้อน โดย blotting วิธีตะวันตกก่อนหน้านี้ ที่นี่เราทำโมเลกุลเดียวแรงกโดยอะตอมบังคับ Microscopy (AFM), ซึ่งได้ถูกพิสูจน์ว่า มีประสิทธิภาพเครื่องมือที่ช่วยให้การตรวจสอบของชีวิตเซลล์ผิวคุณสมบัติชีวภาพ เช่นการโต้ตอบอะโกนิสต์/ตัวรับบางส่วนไม่ชัดเจนจน ดังนั้น ใน PC 3 เซลล์ฮอร์โมนซ้อน เราลักษณะแรง รวมตัวรับลา และจำนวนและการกระจายของโมเลกุลตัวรับที่ทำงานบนพื้นผิวเซลล์ ผลยาว และต่อเนื่องรักษา (สูงสุด 30 วัน) กับอะโกนิสต์ที่ (10−11 และ 10−6 M) ในพารามิเตอร์เดียวกันยังตรวจสอบ การเพิ่มขึ้นบางส่วน R ถูกสังเกต ถึงสูงสุด (~ 80%) หลังจาก 30 วันของการรักษาด้วยปริมาณรังสีสูงสุดของลา (10−6 M) เพิ่มขึ้นเกิดจากอนาล็อกในบางส่วน R ถูกแสดง โดย blotting วิธีตะวันตก นอกจากนี้ สองตัวรับอื่นผูกแข็งพบ โดย AFM การดำรงอยู่ของบางส่วน R 2 ชั้น กระจายเหมือนเหตุการณ์ unbinding พบบนผิวเซลล์ PC 3 ไม่ถูกรักษา และบำบัด มีอยู่ระดับสูงตัวรับที่เยื่อเซลล์เหล่านี้อยู่อาจรับประกันการบำรุงรักษาของการตอบสนองไปยังใน PCa androgen ไม่ตอบสนอง นอกจากนี้ กำหนดความแข็งแรงพันธะของลิแกนด์/ตัวรับสามารถหลั่งน้ำตาแสงในเหตุการณ์เข้าใจงานของโต้ลาบางส่วน-R หรือเพิ่มประสิทธิภาพโครงสร้าง/เคมีอะโกนิสต์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์ผิวรับ GnRH สูง (GnRH-R) ระดับได้รับการแสดงที่จะมีอิทธิพลสำคัญในขอบเขตของ GnRH ตัวเอกพึ่งการยับยั้งการเจริญเติบโตของเนื้องอก ความสามารถของอะซิเตท leuprorelin ตัวเอก GnRH (LA) ที่จะทำให้เกิดการโพสต์การถอดรหัส upregulation ของ GnRH-R ที่เยื่อหุ้มของแอนโดรเจนที่มีความอ่อนไหว (LNCaP) และ -insensitive (PC-3) มะเร็งต่อมลูกหมาก (PCA) เซลล์ที่ได้รับก่อนหน้านี้ แสดงให้เห็นถึงวิธี western blotting ที่นี่เราทำสเปคโทรแรงโมเลกุลเดียวโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม (AFM) ซึ่งได้พิสูจน์แล้วว่าเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพที่ช่วยให้การตรวจสอบข้อเท็จจริงของพื้นผิวเซลล์ที่มีชีวิตคุณสมบัติทางชีวภาพเช่นเพื่อให้ห่างไกลไม่ชัดเจนตัวเอก GnRH / ปฏิสัมพันธ์รับ ดังนั้นใน PC-3 ฮอร์โมนตาย​​เซลล์เราลักษณะความแข็งแรงของ LA-รับผลผูกพันและปริมาณและการกระจายของโมเลกุลรับการทำงานบนผิวเซลล์ ผลของการรักษาที่ยาวนานและต่อเนื่อง (ไม่เกิน 30 วัน) ที่มีตัวเอก (วันที่ 10-11 และ 10-6 M) ในพารามิเตอร์เดียวกันยังถูกตรวจสอบ เพิ่มขึ้น GnRH-R ก็สังเกตเห็นถึงสูงสุด (~ 80%) หลังจาก 30 วันของการรักษาด้วยยาที่สูงที่สุดของหลุยเซีย (10-6 M) การเพิ่มขึ้นของอะนาล็อกที่เกิดขึ้นใน GnRH-R ได้แสดงให้เห็นโดยซับตะวันตก นอกจากนี้สองรับที่แตกต่างกันจุดแข็งผูกไว้ถูกตรวจพบโดย AFM ซึ่งแสดงให้เห็นการดำรงอยู่ของสองชั้น GnRH-R กระจายเป็นเนื้อเดียวกันในกิจกรรม unbinding ได้ถูกพบบนได้รับการรักษาและรับการรักษา PC-3 พื้นผิวเซลล์ คงอยู่ในระดับสูงที่รับเมมเบรนของเซลล์สิ่งมีชีวิตเหล่านี้อาจรับประกันการซ่อมบำรุงของการตอบสนองไป LA ยังอยู่ในแอนโดรเจน-PCA ไม่ตอบสนอง นอกจากนี้การตัดสินใจของแกนด์ / รับแรงยึดอาจหลั่งน้ำตาแสงในกรณีที่ความเข้าใจของ LA / ปฏิสัมพันธ์ GnRH-R และ / หรืออยู่ที่โครงสร้าง / สารเคมีเพิ่มประสิทธิภาพตัวเอก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เก็บโอโอไซต์ตัวรับของเซลล์ผิวสูง ( gnrh-r ) ระดับได้ แสดงให้เห็นอิทธิพลหลักในขอบเขตของเวลาเก็บโอโอไซต์โดยการยับยั้งการเจริญเติบโตของเนื้องอก .ความสามารถของกล้องจุลทรรศน์อะโกนิสต์ลิวโพรรีลินเทต ( LA ) ชวนโพสต์ particle ของ gnrh-r ระหว่างที่เยื่อหุ้มเซลล์ของ androgen ที่สําคัญ ( lncap ) และความรู้สึก ( pc-3 ) มะเร็งต่อมลูกหมาก ( PCA ) เซลล์ที่ได้รับก่อนหน้านี้ที่แสดงโดย Western blotting . ที่นี่เราแสดงโมเลกุลสเปกโทรสโกปีแรงเดียวโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แรงอะตอม ( AFM )ซึ่งได้พิสูจน์แล้วว่าเป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพที่ช่วยให้สำหรับการตรวจสอบของชีวิตของเซลล์ผิวคุณสมบัติทางชีวภาพ เช่น เก็บโอโอไซต์ตัวรับจนถึงไม่ชัดเจนเวลา / ปฏิสัมพันธ์ ดังนั้น ในความรู้สึก pc-3 ฮอร์โมนที่เซลล์เราลักษณะความแข็งแรงของ La ตัวรับผูกพันและปริมาณและการกระจายของโมเลกุลตัวรับหน้าที่บนพื้นผิวเซลล์ผลของการรักษาที่ยาวนานและต่อเนื่องถึง 30 วัน ) กับกล้ามเนื้อทำการ ( 10 − 11 และ 10 − 6 M ) พารามิเตอร์เดียวกันมีลักษณะ เป็น gnrh-r เพิ่มสังเกต ถึงสูงสุด ( ~ 80 % ) หลังจาก 30 วันของการรักษาด้วยยาสูงสุดของลา ( 10 − 6 M ) อนาล็อกและเพิ่ม gnrh-r ยังแสดงให้เห็นโดย Western blotting . นอกจากนี้ที่แตกต่างกันสองตัวรับผูกพันพร้อมทั้งถูกตรวจพบโดย AFM , ซึ่งแสดงให้เห็นการดำรงอยู่ของทั้งสอง gnrh-r ชั้นเรียน การกระจายเป็นเนื้อเดียวกันของ unbinding เหตุการณ์ได้รับการพบในดิบและรักษาพื้นผิวเซลล์ pc-3 . ความคงอยู่ของระดับยาสูงในเมมเบรนของสิ่งมีชีวิตเหล่านี้เซลล์อาจรับประกันดูแลการลาในประเทศโครเอเชียไม่ตอบสนอง PCA . นอกจากนี้ความมุ่งมั่นของลิแกนด์ / ตัวรับแรงยึดเหนี่ยวสามารถหลั่งไฟบนไม่ค่อยเข้าใจเหตุการณ์ของลา / gnrh-r ปฏิสัมพันธ์และ / หรือแก้ไขโครงสร้าง / เคมีเพิ่มประสิทธิภาพเวลา .