Transformation efficiency and regen

Transformation efficiency and regeneration of Parthenium argentatum Gray (guayule) from leaf discs is problematical due to genotype-specific regeneration efficiency, browning and tissue culture growth response after Agrobacterium infection of leaf explants. To address this issue, we have developed a callus transformation system using lustrous green nodular callus, termed highly regenerating callus (HRC), which is immensely prolific at shoot regeneration. Agrobacterium tumefaciens strain EHA105 harboring the binary vector pCAMBIA2300 was used to transform the HRC. Primary transformation events and transgenic plants recovered were identified by PCR. Transgene integration and translation of nptII into transgenic plants was confirmed with Southern and western blot analysis. The plant transformation frequency from callus tissues was about 48%. This alternative method is fast and free of undesirable browning and it should facilitate a rapid improvement of guayule germplasm via genetic engineering, which has been slow compared to some other industrial crops.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงและฟื้นฟู Parthenium argentatum สีเทา (guayule) จากใบดิสก์ได้ problematical เนื่องจากลักษณะทางพันธุกรรมเฉพาะฟื้นฟูประสิทธิภาพ browning เนื้อเยื่อเติบโตตอบสนอง และหลังจากติดเชื้ออโกรแบคทีเรียมของ explants ใบ ปัญหานี้ เราได้พัฒนาระบบการแปลงให้ใช้ษะเขียว nodular ให้ เรียกว่าสร้างใหม่สูงแคลลัส (เอชอาร์ซี), ซึ่งเป็นอย่างกว้างขวางลูกที่ยิงฟื้นฟู อโกรแบคทีเรียม tumefaciens ต้องใช้ EHA105 harboring pCAMBIA2300 เวกเตอร์ฐานที่ใช้ในการแปลงเอชอาร์ซี เหตุการณ์การเปลี่ยนแปลงหลักและพืชถั่วเหลืองกู้ได้ระบุ โดย PCR รวม Transgene และแปลของ nptII เป็นพืชถั่วเหลืองถูกยืนยัน ด้วยการวิเคราะห์คืนในตะวันตก และใต้ตา ความถี่การแปลงพืชจากเนื้อเยื่อแคลลัสมีประมาณ 48% วิธีนี้ทางเลือกมีความเร็ว และฟรีระวัง browning และมันควรช่วยในการปรับปรุงอย่างรวดเร็วของ guayule germplasm ทางพันธุวิศวกรรม ซึ่งได้รับช้าเมื่อเทียบกับพืชอื่น ๆ ที่อุตสาหกรรม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ประสิทธิภาพการเปลี่ยนแปลงและการฟื้นฟูของ Parthenium argentatum สีเทา (guayule) จากแผ่นใบเป็นปริศนาเนื่องจากประสิทธิภาพการฟื้นฟูพันธุ์เฉพาะการเกิดสีน้ำตาลและการตอบสนองการเจริญเติบโตของการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อหลังจากการติดเชื้อ Agrobacterium ของชิ้นใบ เพื่อแก้ไขปัญหานี้เราได้มีการพัฒนาระบบการเปลี่ยนแปลงการใช้แคลลัสแคลลัสเป็นก้อนกลมแวววาวสีเขียวเรียกว่าปฏิรูปสูงแคลลัส (HRC) ซึ่งเป็นที่อุดมสมบูรณ์อย่างมากในการฟื้นฟูยิง Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ EHA105 เก็บงำ pCAMBIA2300 เวกเตอร์ไบนารีถูกใช้ในการเปลี่ยนเหล็กแผ่นรีดร้อน เหตุการณ์การเปลี่ยนแปลงหลักและพืชดัดแปรพันธุกรรมกู้คืนที่ถูกระบุโดยวิธี PCR บูรณาการของยีนและการแปลของ nptII เข้าไปในพืชดัดแปรพันธุกรรมได้รับการยืนยันที่มีการวิเคราะห์ blot ภาคใต้และตะวันตก ความถี่ในการเปลี่ยนแปลงพืชจากเนื้อเยื่อแคลลัสเป็นประมาณ 48% วิธีนี้เป็นทางเลือกที่รวดเร็วและเสียการเกิดสีน้ำตาลที่ไม่พึงประสงค์และมันควรจะอำนวยความสะดวกในการพัฒนาอย่างรวดเร็วของเชื้อพันธุกรรม guayule ผ่านทางพันธุวิศวกรรมซึ่งได้รับการเทียบช้าบางพืชอุตสาหกรรมอื่น ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ประสิทธิภาพการแปลงและสร้าง parthenium argentatum สีเทา ( guayule ) จากแผ่นใบเป็นปัญหาเนื่องจากพันธุกรรม ประสิทธิภาพโดยเฉพาะสีน้ำตาล และการตอบสนองการเจริญเติบโตเนื้อเยื่อหลังจาก Agrobacterium การติดเชื้อเนื้อเยื่อใบ เพื่อแก้ไขปัญหานี้ , เราได้มีการพัฒนาระบบการเพาะเลี้ยงแคลลัสสีเขียวใช้เป็นเงากลม ,เรียกว่าขอ regenerating ลัส ( HRC ) ซึ่งเป็นที่อุดมสมบูรณ์อย่างมหาศาลในการยิง Agrobacterium tumefaciens สายพันธุ์ถ่ายยีนพบในสายพันธุ์ EHA105 กรมเจ้าท่า pcambia2300 เวกเตอร์เลขฐานสองที่ใช้แปลง HRC . เหตุการณ์การเปลี่ยนแปลงหลักและพืชข้ามพันธุ์ได้ถูกระบุโดย PCRการรวมยีนและการแปลของ nptii เป็นพืชข้ามพันธุ์ก็ยืนยันกับการวิเคราะห์ทางใต้และ Western blot โรงงานการแปลงความถี่จากเนื้อเยื่อแคลลัสได้ประมาณ 48 % วิธีนี้จะรวดเร็วและฟรีของไม่พึงประสงค์ สีน้ำตาล และมันควรจะอำนวยความสะดวกในการปรับปรุงอย่างรวดเร็วของ guayule พันธุกรรมทางพันธุวิศวกรรมซึ่งได้ช้าเมื่อเทียบกับพืชบางชนิดในอุตสาหกรรมอื่น ๆ