RAPD analysis Total DNA was extract

RAPD analysis
Total DNA was extracted from
germinating embryos (figure 3-F) according
to Benito et al. (1993) with some
modifications. RAPD analysis was carried
out according to Williams et al. (1990) with
a few modifications. A total of 12 random
decamer primers (Operon Technologies
Inc., Alameda, California, USA) were used
for RAPD amplification. PCR reactions
were carried out in 25 µl volume containing
25 ng of total genomic DNA from each
sample, 0.2 µl of a single primer, 100 mM of
each dNTPs, 1X PCR buffer (10 mM Tris-
HCl pH 8.3, 50 mM KCl, 2 mM MgCl2) and
1 unit DNA Taq polymerase (Roch,
Mannheim, Germany, 1999). Amplification
was performed using a thermocycler (PE
9600) programmed for RAPD: 1 cycle at
94ºC for 4 min, and 35 cycles with the
following cycle profile: 1 min DNA
denaturation step at 94 ºC, 2 min annealing
step at 36 ºC, 2 min extension step at 72 ºC
and last cycle at 72 ºC for 7 min, and an
optional soak period at 4 ºC. Amplification
products were loaded on 1% agarose gel
and stained with ethidium bromide (0.5
mg/ml).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์อาร์เอพีดี รวมดีเอ็นเอที่สกัดจาก germinating โคลน (รูป 3-F) ตาม การเบนิโต้ et al. (1993) กับ ปรับเปลี่ยน ทำการวิเคราะห์การอาร์เอพีดี ออกตามวิลเลียมส์และ al. (1990) ด้วย แก้ไขไม่ จำนวน 12 ตัวอย่าง decamer ไพรเมอร์ (Operon เทคโนโลยี ใช้ Inc. อเมริกัน แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) สำหรับขยายอาร์เอพีดี ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการ 25 µl ไดรฟ์ข้อมูลที่ประกอบด้วย 25 ng เอ็น genomic รวมจาก ตัวอย่าง 0.2 µl พื้นเดียว 100 มม.ของ แต่ละ dNTPs, 1 X PCR มีบัฟเฟอร์ (10 mM - ตรีHCl pH 8.3, 50 mM KCl, MgCl2 2 มม.) และ หน่วยที่ 1 DNA Taq พอลิเมอเรส (Roch มันน์ไฮม์ ประเทศเยอรมนี 1999) ขยาย ทำใช้ thermocycler (PE 9600) โปรแกรมสำหรับอาร์เอพีดี: 1 รอบที่ 94ºC สำหรับ 4 นาที 35 รอบกับการ วงจรโพรไฟล์ต่อไปนี้: 1 นาทีดีเอ็นเอ ขั้นตอน denaturation ที่ 94 ºC การอบเหนียว 2 นาที ขั้นตอนที่ 36 ºC ขั้นตอนการขยาย 2 นาทีที่ 72 ºC และรอบสุดท้ายที่ 72 ºC ในนาทีที่ 7 และ ระยะเวลาแช่ตัวเลือกที่ 4 ºC ขยาย ผลิตภัณฑ์ถูกโหลดในเจ 1% agarose และทิ้งคราบกับโบรไมด์ ethidium (0.5 mg/ml)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ดีเอ็นเอรวมดีเอ็นเอที่สกัดจากงอกตัวอ่อน(รูปที่ 3-F) ตามที่จะBenito, et al (1993) กับการปรับเปลี่ยน การวิเคราะห์ดีเอ็นเอได้ดำเนินการตามวิลเลียมส์และอัล (1990) ที่มีการปรับเปลี่ยนไม่กี่ รวม 12 แบบสุ่มไพรเมอร์decamer (operon เทคโนโลยีอิงค์เดินเล่นแคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้สำหรับการขยาย RAPD ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการในปริมาณ 25 ไมโครลิตรมี25 มณฑลของดีเอ็นเอรวมจากแต่ละตัวอย่าง0.2 ไมโครลิตรของไพรเมอร์ซิงเกิ้ล 100 มิลลิของแต่ละdNTPs บัฟเฟอร์ 1X PCR (10 มิลลิ Tris- HCl pH 8.3, 50 มิลลิ KCl 2 มิลลิ MgCl2) และ1 หน่วยโพลิเมอร์ Taq DNA (โรชไฮม์, เยอรมนี, 1999) ขยายได้รับการดำเนินการโดยใช้ thermocycler (PE 9600) โปรแกรมสำหรับอาร์เอพี: 1 รอบที่94ºC 4 นาทีและ 35 รอบที่มีรายละเอียดรอบต่อไปนี้: 1 นาทีดีเอ็นเอขั้นตอนdenaturation ที่ 94 องศาเซลเซียส, 2 นาทีหลอมขั้นตอนที่36 องศาเซลเซียส, 2 นาที ขั้นตอนการขยายที่ 72 องศาเซลเซียสและรอบที่ผ่านมาที่72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาทีและระยะเวลาการแช่ตัวเลือกที่4 องศาเซลเซียส การขยายผลิตภัณฑ์ที่ถูกโหลดในเจล agarose 1% และย้อมด้วย ethidium bromide (0.5 mg / ml)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รวมการวิเคราะห์ RAPD ดีเอ็นเอจาก
งอกเอ็มบริโอ ( รูป 3-f ) ตาม
ไป Benito et al . ( 1993 ) กับบาง
การปรับเปลี่ยน การวิเคราะห์ RAPD ได้ด
ตามวิลเลียม et al . ( 1990 )
การปรับเปลี่ยนไม่กี่ . รวม 12 แบบ PCR ( โอเปอรอนเทคโนโลยี

decamer อิงค์เดินเล่น แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ที่ใช้สำหรับการสื่อสารด้วย
. เทคนิคปฏิกิริยา
ได้ดำเนินการใน 25 µ L ปริมาณบรรจุ
25 นาโนดีเอ็นเอทั้งหมดจากแต่ละ
ตัวอย่างµ 0.2 ลิตรรองพื้นเดี่ยว 100 mm
แต่ละ dntps , 1x PCR buffer ( 10 มม. นอกจากนี้ -
กรดไฮโดรคลอริก pH 8.3 , 50 mm . , 2 มม. และ MgCl2 )
1 หน่วยใช้ดีเอ็นเอ ทัค ( โรช
Mannheim , เยอรมัน , 1999 ) (
การใช้เทอร์โมไซเคล ์ ( PE
9600 ) สร้างเพียง 1 รอบที่
94 º C เป็นเวลา 4 นาทีและ 35 รอบกับ
ต่อไปนี้ : 1 นาทีรอบโปรไฟล์ดีเอ็นเอ
( ขั้นตอนที่ 94 º C 2 นาทีที่ 36 ºขั้นตอน annealing
C 2 นาทีที่ 72 ºส่วนขยายขั้นตอน C
สุดท้ายรอบที่ 72 ºองศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 นาที และเลือกช่วงเวลาที่แช่
4 C (
ºผลิตภัณฑ์ มีโหลดใน 1% เจล
และเปื้อนกับทิเดียมโบรไมด์ ( 0.5
มิลลิกรัม / มิลลิลิตร )