ImmunohistochemistryImmunohistochem

Immunohistochemistry

Immunohistochemical detection of MMPs and TIMPs was carried out on 5 μm tissue sections mounted on siliconized slides. Briefly, paraffin sections were dewaxed with xylene substitute (Polysciences, PA, USA) and rehydrated in a graded series of ethanol. Antigen retrieval was performed by heating at 95 °C in 10 mM sodium citrate (pH 6.0). Endogenous peroxidases were quenched with 0.3 % H2O2 in methanol for 5 min at room temperature. After 3 washes in PBS, the slides were incubated in a blocking buffer containing 1 % (v/v) goat serum and 3 % (v/v) horse serum in PBS for 1 h at room temperature. Sections were incubated overnight at 4 °C with antibodies (diluted 1:150 in blocking buffer) against MMP-2 (Abcam), MMP-9 (Santa Cruz), TIMP-2, and TIMP-3. Sections were washed in PBS and incubated with secondary anti-rabbit, (Santa Cruz), anti-mouse (Santa Cruz), anti-goat, or anti-FITC HRP-conjugated (Takara, Osaka, Japan) antibodies (diluted 1:300 in blocking buffer) for 1 h at room temperature, rinsed, and developed for 10 min using the ABC detection kit (Vector, CA, USA); diaminobenzidine (Vector) was used as a substrate for HRP. Sections were counterstained with periodic acid–Schiff reagent and Harris hematoxylin solution containing 4 % (v/v) acetic acid. Tissues were dehydrated, cleared, and covered with Permount solution (Fisher, NJ, USA).

Statistical analysis

Data were analysed with t test and general linear m

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Immunohistochemistryตรวจ MMPs และ TIMPs Immunohistochemical ถูกดำเนินในส่วนเนื้อเยื่อ μm 5 ติดบนภาพนิ่ง siliconized สั้น ๆ พาราฟินส่วนถูก dewaxed กับไซทดแทน (Polysciences, PA สหรัฐอเมริกา) และ rehydrated ในชุดมีการจัดระดับของเอทานอล เรียกตรวจหาที่ดำเนินการ โดยความร้อนที่ 95 ° C ใน 10 มม.โซเดียมซิเตรต (pH 6.0) Endogenous peroxidases ถูก quenched 0.3% H2O2 ในเมทานอลใน 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก washes 3 ใน PBS ภาพนิ่งถูก incubated ในบัฟเฟอร์บล็อก 1% (v/v) ซีรั่มครีมและซีรั่มม้า 3% (v/v) ใน PBS สำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้อง ส่วนที่ incubated ค้างคืนที่ 4 ° C มีแอนตี้ (1:150 แตกออกในบัฟเฟอร์บล็อก) กับ MMP-2 (Abcam), MMP-9 (ซานตาครูซ), TIMP-2 และ TIMP-3 ส่วนที่ล้างใน PBS และ incubated กับรองป้องกันกระต่าย, (ซานตาครูซ), ป้องกันเมาส์ (ซานตาครูซ), แพะป้องกัน หรือต่อต้าน-FITC HRP-กลวง (Takara โอซาก้า ญี่ปุ่น) แอนตี้ (1:300 แตกออกในบัฟเฟอร์บล็อก) สำหรับ h 1 ที่อุณหภูมิห้อง rinsed และพัฒนาใน 10 นาทีโดยใช้ชุดตรวจสอบของ ABC (เวกเตอร์ CA, USA); diaminobenzidine (แบบเวกเตอร์) ถูกใช้เป็นพื้นผิวแบบสำหรับ HRP ส่วนที่ counterstained กับรีเอเจนต์ธาตุกรด – องท์ชิฟฟ์และแฮ hematoxylin โซลูชันที่ประกอบด้วยกรดอะซิติก 4% (v/v) เนื้อเยื่อ อบแห้ง ล้าง และปกคลุม ด้วย Permount โซลูชัน (Fisher, NJ สหรัฐอเมริกา)วิเคราะห์ทางสถิติมี analysed ข้อมูลทดสอบ t และ m เส้นทั่วไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

immunohistochemistry Immunohistochemical การตรวจสอบของ MMPs และ TIMPs ได้ดำเนินการในวันที่ 5 ไมครอนส่วนเนื้อเยื่อติดตั้งอยู่บนสไลด์ siliconized สั้น ๆ ส่วนพาราฟินถูก dewaxed กับแทนไซลีน (Polysciences, PA, สหรัฐอเมริกา) และคืนรูปในชุดช้าเอทานอล ดึง Antigen ได้ดำเนินการโดยความร้อนที่ 95 องศาเซลเซียสในโซเดียมซิเตรทมิลลิ 10 (pH 6.0) peroxidases ภายนอกถูกดับ 0.3% H2O2 ในเมทานอลเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก 3 ล้างในพีบีเอสภาพนิ่งถูกบ่มในบัฟเฟอร์ที่มีการปิดกั้น 1% (v / v) ซีรั่มแพะและ 3% (v / v) ซีรั่มม้าในพีบีเอสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ส่วนถูกบ่มค้างคืนที่ 4 ° C ที่มีแอนติบอดี้ (ปรับลด 1: 150 ในการปิดกั้นกันชน) กับ MMP-2 (Abcam) MMP-9 (Santa Cruz), TIMP-2 และ TIMP-3 ส่วนถูกล้างในพีบีเอสและบ่มที่มีการป้องกันกระต่ายรอง (Santa Cruz), ป้องกันเมาส์ (Santa Cruz), ป้องกันแพะหรือต่อต้าน FITC HRP-ผัน (Takara โอซาก้าประเทศญี่ปุ่น) แอนติบอดี (ปรับลด 1: 300 ในการปิดกั้นกันชน) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องล้างและพัฒนาเป็นเวลา 10 นาทีโดยใช้ชุดการตรวจสอบเบื้องต้น (เวกเตอร์, CA, USA); diaminobenzidine (เวกเตอร์) ถูกใช้เป็นสารตั้งต้นสำหรับ HRP ส่วนที่ถูก counterstained กับสารกรดชิฟฟ์เป็นระยะ ๆ และการแก้ไขปัญหาที่มีแฮร์ริส hematoxylin 4% (v / v) กรดอะซิติก เนื้อเยื่อก็คายน้ำล้างและปกคลุมไปด้วยวิธีการแก้ปัญหา Permount (ฟิชเชอร์, NJ, สหรัฐอเมริกา). การวิเคราะห์ทางสถิติวิเคราะห์ข้อมูลด้วยการทดสอบค่าทีและ m เชิงเส้นทั่วไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลอด

สำหรับการตรวจหาและ mmps timps ได้ดําเนินการใน 5 μ M เนื้อเยื่อส่วนติดบนสไลด์ siliconized . สั้น ๆ , ส่วนพาราฟินเป็น dewaxed กับไซแทน ( polysciences , PA , USA ) และได้ทำการ รีไฮเดรทมในระดับชุดของเอทานอล ค้นแอนติเจนโดยใช้ความร้อนที่อุณหภูมิ 95 องศา C ในซิเตรตโซเดียม 10 มม. ( pH 6.0 )โครงสร้างเพอร์ กซิเดสถูกดับ 0.3% H2O2 ในเมทานอลเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิห้อง 3 หลังถล่มใน PBS , ภาพนิ่งที่ถูกบ่มในบล็อกบัฟเฟอร์ที่มี 1% ( v / v ) เซรั่มเนื้อแพะ และ 3 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ม้า เซรั่มใน PBS 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ส่วนที่ถูกบ่มค้างคืนที่ 4 ° C กับแอนติบอดี ( เจือจาง 1:150 ในบล็อกบัฟเฟอร์ ) กับการทำงานเอนไซม์ ( ABCAM ) mmp-9 ( Santa Cruz )timp-2 และ timp-3 . บางส่วนถูกล้างใน PBS บ่มกับรองป้องกันกระต่าย ( Santa Cruz ) , ป้องกันเมาส์ ( Santa Cruz ) , ป้องกันแพะหรือ HRP ต่อต้าน fitc conjugated ( Takara , โอซาก้า , ญี่ปุ่น ) แอนติบอดี ( เจือจาง 1:300 ในบล็อกบัฟเฟอร์ ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ ห้องล้าง และพัฒนาสำหรับ 10 นาทีใช้ ABC ชุดตรวจ ( เวกเตอร์ , CA , USA )diaminobenzidine ( เวกเตอร์ ) ใช้เป็นสารตั้งต้นสำหรับช . ส่วนที่เป็น counterstained กับ Periodic acid Schiff และรีเอเจนต์แฮร์ริสย้อมและสารละลายที่มี 4 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดอะซิติก เนื้อเยื่อถูก dehydrated ล้างและปกคลุมด้วย permount โซลูชั่น ( Fisher , NJ , USA ) .



ในการวิเคราะห์ทางสถิติวิเคราะห์ข้อมูลด้วยการทดสอบและเชิงเส้นทั่วไป M T