from rubber industry in order to de

from rubber industry in order to deal with the environmental
problems addressed. Studies have shown that natural rubber can be
degraded by some microorganisms [6e9]. The substrates that can
be degraded and mineralized by these rubber-degrading microorganisms
are not only limited to natural rubber, even vulcanized
rubber (chemically cross-linked rubber) can be the substrates of
biodegradation [10e12]. These studies have shown that the rubberdegrading
microorganisms could provide a biotechnological solution
to the problem of waste rubbers. These microorganisms have
been divided into two groups, which are the clear zone formers and
the non-clear zone formers. Clear zone formers are able to grow
and produce clearing zones on latex overlay agar. The second group
of rubber-degrading microorganisms do not produce clearing zones
on latex overlay agar. Instead, they grow adhesively on rubber
substrates [13,14].
To date, the molecular mechanism of rubber biodegradation is
not fully understood. Thus far, only two key enzymes named rubber
oxygenase A (RoxA) and latex clearing protein (Lcp) responsible for
rubber degradation have been reported [15,16]. More enzymes
associated with the rubber degradation are yet to be identified in
order to understand its mechanism. In this study, we successfully
identified one rubber-degrading bacterial strain and two potential
rubber-degrading bacterial strains from aged latex based on the lcphomologous
sequences from their genomes. Among these, two
bacterial strains were postulated as new potential rubberdegrading
bacteria.
2. Materials and methods
2.1. Latex samples
Latex samples were collected from Bukit Jambul hiking site
(N520ʹ35.80ʺ; E10017ʹ0.31ʺ) in Penang island, Malaysia. Bukit
Jambul hiking site has a small rubber plantation with trees in the
productive phase. Various latex samples were collected from the
tree trunk, ground and a container found near to the rubber tree, as
listed in Table 1. The samples were collected using sterile forceps/
spatula and were kept in sterile 50 mL centrifuge tubes. Surface of
the coagulated aged latex in the container was swabbed by a sterile
cotton bud and then immersed in 1 mL sterile distilled water in a
test tube. All the samples were transported to laboratory and processed
immediately.
2.2. Isolation of rubber-degrading bacteria
Approximately 1 g of each dry latex samples was suspended in
9 mL of sterile distilled water and serially diluted. Approximately
100 mL of each dilution samples was spread on a latex overlay agar.
Water of the aged coagulated latex in container and the test tube
containing cotton bud swabbed with aged coagulated latex surface
were serially diluted and 100 mL of each samples was spread on a
latex overlay agar. All the plates were incubated at 30 C for 7 days.
Bacterial colonies with different colony morphology were picked
and streaked on a fresh purification agar plate such as Nutrient Agar
(NA), International Streptomyces Project (ISP2) agar and Glucose
Yeast Extract Agar (GYEA) separately until pure cultures were
obtained.
Latex overlay agar was prepared by the overlay technique
described by Braaz and colleagues [15]. During the agar preparation,
a bottom layer of mineral salts agar was allowed to solidify in a
petri dish, and thenwas overlaid with the same agar supplemented
with 0.2% (v/v) purified latex. The composition of mineral salts
medium used in latex overlay agar was followed the recipe
described by Heisey and Papadatos [6]: 8.00 g/L K2HPO4, 1.00 g/L
KH2PO4, 0.50 g/L (NH4)2SO4, 0.20 g/L MgSO4$7H2O, 0.10 g/L NaCl,
0.10 g/L Ca(NO3)2, 0.02 g/L CaCl2$2H2O, 0.02 g/L FeSO4$7H2O,
0.50 mg/L Na2MoO4$H2O and 0.50 mg/L MnSO4. For agar preparation,
15 g/L of bacteriological agar powder was added into the
medium before sterilization by autoclaving.
Purified latex was prepared by washing freshly tapped crude
latex three times with 0.002% Tween 80 (in ratio of one to one) at
19,320  g for 10 min at 4 C. The top layer, which is a layer of latex
cream, from each centrifugationwas collected and was used for the
next centrifugation. The final latex cream was mixed with
approximately equal volume of 0.002% Tween 80 and was sterilized
by autoclaving before added into sterile molten mineral salts agar.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จากอุตสาหกรรมยางเพื่อจัดการกับการสิ่งแวดล้อมปัญหาที่อยู่ ศึกษาแสดงให้เห็นว่า ยางธรรมชาติสามารถเสื่อมโทรม โดยจุลินทรีย์บางอย่าง [6e9] พื้นผิวที่สามารถเสื่อมโทรม และ mineralized โดยจุลินทรีย์เหล่านี้ลดยางไม่เพียงจำกัดธรรมชาติยาง แม้ vulcanized รองเท้าถ(cross-linked สารเคมียาง) เป็นพื้นผิวของbiodegradation [10e12] การศึกษานี้ได้แสดงที่ rubberdegradingจุลินทรีย์สามารถให้โซลูชั่น biotechnologicalปัญหาของยางเสีย จุลินทรีย์เหล่านี้ได้การแบ่ง ซึ่ง formers โซนชัดเจน และformers โซนล้างไม่ โซนล้าง formers จะเติบโตและผลิตล้างโซนบนซ้อนทับยาง agar กลุ่มที่สองจุลินทรีย์ลดยางไม่ผลิตเขตหักบัญชีบนซ้อนทับยาง agar แทน พวกเขาเติบโต adhesively บนยางพื้นผิว [13,14]วันที่ เป็นกลไกระดับโมเลกุลของยาง biodegradationเข้าใจไม่เต็ม ฉะนี้ เอนไซม์สำคัญเพียงสองชื่อยางoxygenase (RoxA) และยางล้างโปรตีน (Lcp) รับผิดชอบยางลดได้รายงาน [15,16] เอนไซม์เพิ่มเติมเกี่ยวข้องกับยางที่ ย่อยสลายยังจะต้องระบุในสั่งการเข้าใจกลไกของมัน ในการศึกษานี้ เราเรียบร้อยแล้วระบุหนึ่งยางลดแบคทีเรียต้องใช้และศักยภาพ 2ลดยางสายพันธุ์แบคทีเรียที่จากยางอายุตาม lcphomologousลำดับจาก genomes ของพวกเขา ระหว่างสองเหล่านี้สายพันธุ์แบคทีเรียได้ postulated เป็น rubberdegrading เกิดใหม่แบคทีเรีย2. วัสดุและวิธีการ2.1 การตัวอย่างยางตัวอย่างยางถูกเก็บรวบรวมจากเว็บไซต์ไต่เขาบูกิต Jambul(N5 20ʹ35.80ʺ E100 17ʹ0.31ʺ) ในเกาะปีนัง มาเลเซีย บูกิตJambul ไซต์ไต่เขามีสวนยางขนาดเล็ก มีต้นไม้ในขั้นตอนการผลิต ตัวอย่างยางต่าง ๆ ถูกเก็บรวบรวมจากการต้นไม้ ดิน และภาชนะที่พบใกล้ต้นยาง เป็นแสดงในตารางที่ 1 ตัวอย่างถูกเก็บรวบรวมใช้คีมกระบอก /พาย และถูกเก็บไว้ในท่อเครื่องหมุนเหวี่ยงใส่ 50 mL พื้นผิวของยางอายุ coagulated ในคอนเทนเนอร์ที่ swabbed โดยการฆ่าเชื้อฝ้ายดอกตูมแล้ว แช่อยู่ในน้ำกลั่นฆ่าเชื้อ 1 mL ในการหลอดทดสอบ ตัวอย่างทั้งหมดถูกขนส่งไปห้องปฏิบัติการ และประมวลผลทันที2.2 การแยกยางลดแบคทีเรียแต่ละตัวอย่างยางที่แห้งประมาณ 1 g ถูกหยุดชั่วคราวใน9 mL ของกอซกลั่นน้ำ และ serially diluted ประมาณ100 mL ของแต่ละตัวอย่างเจือจางได้แพร่กระจายไปใน agar ซ้อนทับยางน้ำยาง coagulated อายุในคอนเทนเนอร์และหลอดทดสอบสำลีมีที่ swabbed กับอายุผิวยาง coagulatedได้แตกออก serially และ 100 mL ของแต่ละตัวอย่างกระจายไปในตัวยางวางทับ agar แผ่นทั้งหมดถูก incubated ที่ 30 C 7 วันรับของอาณานิคมแบคทีเรีย ด้วยสัณฐานวิทยาของโคโลนีแตกต่างกันและลายบนจานเช่นสาร Agar agar สดฟอก(นา), โครงการ Streptomyces นานาชาติ (ISP2) agar และกลูโคสยีสต์สกัด Agar (GYEA) แยกต่างหากจนกว่าวัฒนธรรมบริสุทธิ์ได้ได้รับการAgar ซ้อนทับยางถูกเตรียม โดยเทคนิคการซ้อนทับอธิบาย โดย Braaz และเพื่อนร่วมงาน [15] ระหว่างเตรียม agarชั้นล่างของ agar เกลือแร่ได้รับอนุญาตให้เข้าในการจานเพาะเชื้อ และ thenwas overlaid กับ agar เดียวเสริมมียาง 0.2% (v/v) บริสุทธิ์ ส่วนประกอบของเกลือแร่สื่อที่ใช้ในการซ้อนทับยาง agar ได้ตามสูตรโดย Heisey และ Papadatos [6]: 8.00 บัญชี K2HPO4, 1.00 g/LKH2PO4, 0.50 g/L (NH4) 2SO4, 0.20 g/L MgSO4 7H2O$, 0.10 g/L NaCl0.10 g/L Ca (NO3) 2, 0.02 g/L CaCl2 2H2O$, 0.02 g/L FeSO4 7H2O$0.50 mg/L Na2MoO4$ H2O และ MnSO4 0.50 mg/L สำหรับการเตรียม agar15 g/L ของ bacteriological agar ผงถูกเพิ่มเข้าไปในตัวปานกลางก่อนการฆ่าเชื้อโดย autoclavingยางบริสุทธิ์ถูกเตรียม โดยการซักผ้าดิบสดเคาะยาง 3 เท่ากับ 0.002% Tween 80 (ในอัตราส่วนหนึ่ง) ที่g 19,320 ใน 10 นาทีที่ 4 ค ชั้นสูงสุด ซึ่งเป็นชั้นของยางครีม จาก centrifugationwas รวบรวม และใช้สำหรับการcentrifugation ถัดไป ครีมยางสุดท้ายถูกผสมกับประมาณเท่ากับปริมาณ 0.002% Tween 80 และถูก sterilizedโดย autoclaving ก่อนเข้า กระบอกหลอมละลายแร่ salts agar

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จากอุตสาหกรรมยางในการที่จะจัดการกับสิ่งแวดล้อม
ปัญหาที่ การศึกษาพบว่ายางธรรมชาติสามารถ
สลายตัวโดยจุลินทรีย์บาง [6E9] พื้นผิวที่สามารถ
สลายตัวและแร่ธาตุเหล่านี้จุลินทรีย์ยางย่อยสลาย
ไม่ได้ จำกัด อยู่เพียงในยางธรรมชาติแม้วัลคาไน
ยาง (เคมียาง cross-linked) อาจเป็นสารตั้งต้นของ
การย่อยสลาย [10e12] การศึกษาเหล่านี้แสดงให้เห็นว่า rubberdegrading
จุลินทรีย์ที่สามารถให้บริการโซลูชั่นทางเทคโนโลยีชีวภาพ
ในการแก้ไขปัญหาของยางเสีย จุลินทรีย์เหล่านี้ได้
ถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่มซึ่งเป็น formers โซนที่ชัดเจนและ
formers โซนที่ไม่ชัดเจน formers โซนที่ชัดเจนมีความสามารถที่จะเติบโต
และผลิตในโซนล้างวุ้นซ้อนทับน้ำยาง กลุ่มที่สอง
ของจุลินทรีย์ยางย่อยสลายไม่ได้ผลิตโซนล้าง
บนวุ้นซ้อนทับน้ำยาง แต่พวกเขาเติบโตยึดติดด้วยกาวยาง
พื้นผิว [13,14].
วันที่กลไกการย่อยสลายโมเลกุลของยาง
ไม่เข้าใจอย่างเต็มที่ ป่านนี้เพียงสองเอนไซม์ที่สำคัญยางชื่อ
oxygenase (Roxa) และโปรตีนล้างน้ำยางข้น (LCP) รับผิดชอบในการ
ย่อยสลายยางได้รับรายงาน [15,16] เอนไซม์อื่น ๆ
ที่เกี่ยวข้องกับการย่อยสลายยางจะยังไม่ได้ระบุไว้ใน
เพื่อให้เข้าใจกลไกของมัน ในการศึกษานี้เราประสบความสำเร็จใน
การระบุหนึ่งยางย่อยสลายแบคทีเรียสายพันธุ์ที่มีศักยภาพและสอง
สายพันธุ์แบคทีเรียย่อยสลายยางจากน้ำยางอายุขึ้นอยู่กับ lcphomologous
ลำดับจากจีโนมของพวกเขา กลุ่มคนเหล่านี้ทั้งสอง
สายพันธุ์แบคทีเรียที่ถูกกล่าวอ้างเป็น rubberdegrading ใหม่ที่มีศักยภาพ
แบคทีเรีย.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 ตัวอย่างน้ำยางข้น
ตัวอย่างน้ำยางถูกเก็บรวบรวมจากเว็บไซต์ของการเดินป่า Bukit Jambul
(N5 20'35.80"; E100 17'0.31"?) ในเกาะปีนังประเทศมาเลเซีย Bukit
Jambul เว็บไซต์เดินป่ามีสวนยางขนาดเล็กที่มีต้นไม้อยู่ใน
ขั้นตอนการผลิต ตัวอย่างน้ำยางต่างๆที่ถูกเก็บรวบรวมจาก
ลำต้นของต้นไม้พื้นดินและภาชนะที่พบใกล้กับต้นยางที่เป็น
ที่ระบุไว้ในตารางที่ 1 ตัวอย่างที่เก็บรวบรวมโดยใช้คีมหมัน /
ไม้พายและถูกเก็บไว้ในการฆ่าเชื้อ 50 มลหลอด centrifuge พื้นผิวของ
น้ำยางอายุแข็งตัวในภาชนะที่ถูก swabbed โดยผ่านการฆ่าเชื้อ
ตาฝ้ายและแช่แล้วใน 1 มิลลิลิตรน้ำกลั่นปลอดเชื้อใน
หลอดทดลอง ทั้งหมดตัวอย่างถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการและประมวลผล
ได้ทันที.
2.2 การแยกเชื้อแบคทีเรียย่อยสลายยาง
ประมาณ 1 กรัมของแต่ละตัวอย่างน้ำยางแห้งถูกระงับใน
9 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและปรับลดเป็นลำดับ ประมาณ
100 มิลลิลิตรของแต่ละตัวอย่างการลดสัดส่วนที่ถูกแพร่กระจายบนวุ้นซ้อนทับน้ำยาง.
น้ำของน้ำยางแข็งตัวของอายุในภาชนะและหลอดทดลอง
ที่มีตาฝ้าย swabbed น้ำยางที่มีพื้นผิวแห้งกรังอายุ
ถูกเจือจางลำดับและ 100 มิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่างแต่ละคนถูกแพร่กระจายใน
น้ำยาง วุ้นซ้อนทับ แผ่นทั้งหมดถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 วัน.
อาณานิคมของแบคทีเรียที่มีสัณฐานโลกที่แตกต่างกันได้รับเลือก
และลายบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อบริสุทธิ์สดเช่น Nutrient Agar
(NA), โครงการ Streptomyces อินเตอร์เนชั่นแนล (ISP2) วุ้นและกลูโคส
ยีสต์สกัดวุ้น ( GYEA) แยกเชื้อบริสุทธิ์จนกว่าจะได้รับการ
ได้รับ.
วุ้นซ้อนทับน้ำยางได้จัดทำขึ้นโดยใช้เทคนิคการซ้อนทับ
อธิบายโดย Braaz และเพื่อนร่วมงาน [15] ในระหว่างการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ,
ชั้นล่างของแร่วุ้นเกลือได้รับอนุญาตให้แข็งใน
จาน Petri และ thenwas บุด้วยวุ้นเดียวกันเสริม
กับ 0.2% (v / v) น้ำยางบริสุทธิ์ องค์ประกอบของเกลือแร่
ที่ใช้ขนาดกลางในอาหารเลี้ยงเชื้อซ้อนทับน้ำยางตามสูตร
การอธิบายโดย Heisey และ Papadatos [6]: 8.00 กรัม / ลิตร K2HPO4, 1.00 กรัม / ลิตร
KH2PO4, 0.50 กรัม / ลิตร (NH4) 2SO4, 0.20 กรัม / ลิตร MgSO4 $ 7H2O 0.10 กรัม / ลิตรโซเดียมคลอไรด์,
0.10 กรัม / ลิตร Ca (NO3) 2, 0.02 กรัม / ลิตร CaCl2 $ 2H2O 0.02 กรัม / ลิตร $ FeSO4 7H2O,
0.50 มิลลิกรัม / ลิตร Na2MoO4 $ H2O และ 0.50 มิลลิกรัม / ลิตร MnSO4 สำหรับการเตรียมอาหารเลี้ยงเชื้อ,
15 กรัม / ลิตรของผงวุ้นแบคทีเรียถูกเพิ่มเข้าไปใน
กลางก่อนที่จะฆ่าเชื้อโดยการนึ่งฆ่าเชื้อ.
น้ำยางบริสุทธิ์ถูกจัดทำขึ้นโดยการล้างเคาะสดดิบ
น้ำยางสามครั้งกับ Tween 80 0.002% (ในอัตราส่วน 00:59) ที่
19,320? กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส ชั้นบนสุดซึ่งเป็นชั้นของน้ำยางข้น
ครีมจาก centrifugationwas แต่ละรวบรวมและถูกนำมาใช้สำหรับ
การหมุนเหวี่ยงต่อไป ครีมน้ำยางสุดท้ายก็ผสมกับ
ปริมาณเท่ากับประมาณ 0.002% Tween 80 และได้รับการฆ่าเชื้อ
โดยการนึ่งฆ่าเชื้อก่อนที่จะเพิ่มเป็นเกลือแร่ที่หลอมละลายฆ่าเชื้อวุ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จากอุตสาหกรรมยางพารา ในการจัดการกับปัญหาสิ่งแวดล้อม
จ่าหน้า มีการศึกษาแสดงให้เห็นว่ายางธรรมชาติที่สามารถย่อยสลายด้วยจุลินทรีย์ 6e9
[ บางส่วน ] สารอาหารที่ถูกย่อยสลายโดยเหล่านี้และ
mineralized ยางสลายจุลินทรีย์
ไม่เพียง แต่ จำกัด ให้ยางธรรมชาติวัลคาไนซ์ยาง ( แม้
เคมีทำให้เกิดยาง ) สามารถพื้นผิวของ
การย่อยสลาย [ 10e12 ] การศึกษาเหล่านี้แสดงให้เห็นว่า rubberdegrading
จุลินทรีย์ชีวภาพสามารถให้โซลูชั่น
กับปัญหายางเสีย จุลินทรีย์เหล่านี้มี
ถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่ม ซึ่งเป็นภาพที่ชัดเจนและโซน
ไม่เคลียร์โซนภาพ . ภาพใสสามารถปลูกและผลิตล้างโซน
บนอาหารวุ้นหุ้มยาง
กลุ่มที่สองจุลินทรีย์ย่อยสลายไม่ผลิตยางล้างโซน
บนอาหารวุ้นหุ้มยาง แทน พวกเขาเติบโต adhesively บนพื้นผิวยาง
[ 13,14 ] .
วันที่กลไกระดับโมเลกุลของการย่อยสลายยาง
ไม่เข้าใจ ป่านนี้ สองคีย์เอนไซม์ที่ชื่อ oxygenase ยาง
( roxa ) และโปรตีนล้างน้ำยาง ( LCP ) รับผิดชอบ
การย่อยสลายยางได้รับรายงาน [ 15,16 ]เอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการย่อยสลายของยางมากกว่า

ยังไม่ได้ถูกระบุไว้ในเพื่อให้เข้าใจกลไกของมัน . ในการศึกษานี้เราสามารถทำให้แบคทีเรียสายพันธุ์ยาง
ระบุอย่างใดอย่างหนึ่งและสองศักยภาพ
ยางสลายแบคทีเรียจากอายุยางตามลำดับ lcphomologous
จากจีโนมของพวกเขา ระหว่างนี้สอง
สายพันธุ์แบคทีเรียเป็นวิธีใหม่ที่มีศักยภาพ rubberdegrading แบคทีเรีย
.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . น้ำยางข้นยางตัวอย่าง
โดยเก็บตัวอย่างจากบูกิต กล้ายไต่เขาเว็บไซต์
( 5  20 ʹ < ʺ ; e100  17 ʹ 0.31 ʺ ) ในเกาะปีนัง มาเลเซีย บูกิต
หว้าไต่เขาเว็บไซต์มีสวนยางเล็กๆ กับต้นไม้ใน
ขั้นตอนการผลิต . ตัวอย่างยางต่าง ๆเก็บมาจาก
ต้นไม้ลำต้น ,พื้นดิน และ ภาชนะที่พบอยู่ใกล้กับต้นยาง ตามที่ระบุไว้ในตารางที่ 1
. จำนวนการใช้คีมปลอดเชื้อ /
ไม้พายและถูกเก็บไว้ในเครื่องฆ่าเชื้อ 50 กรัมหลอด พื้นผิวของ
อายุยางแข็งตัวในภาชนะถูกทำความสะอาดโดยเพื่อนฝ้ายเป็นหมัน
แล้วแช่ในน้ำกลั่น 1 มิลลิลิตรปลอดเชื้อใน
หลอดทดสอบตัวอย่างทั้งหมดถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการและประมวลผลทันที
.
2.2 . การคัดแยกแบคทีเรียย่อยสลายยาง
ประมาณ 1 กรัมของแต่ละบริการยางตัวอย่างที่ถูกระงับใน
9 มล. น้ำกลั่นเป็นหมันและเจือจาง ประมาณ
100 ml ของแต่ละ dilution ตัวอย่างถูกกระจายในน้ำยางหุ้มวุ้น .
น้ำของผู้สูงอายุกันน้ำยางในภาชนะและหลอดทดลอง
บรรจุคอตตอนบัดทำความสะอาดเตรียมผิวและอายุยาง
เป็นเจือจาง และ 100 ml ของแต่ละตัวอย่างถูกแพร่กระจายบน
ยางหุ้มวุ้น จานทั้งหมดถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 7 วัน  .
โคโลนีแบคทีเรียที่แตกต่างกันลักษณะของโคโลนีได้
ลายบนสดและบริสุทธิ์เช่น nutrient agar plate วุ้น
( na )โครงการนานาชาติ ( Streptomyces isp2 ) วุ้นและกลูโคส
extract agar ( gyea ) แยกจนกว่าเชื้อบริสุทธิ์ได้ถูก
.
วุ้นหุ้มยางถูกเตรียมโดยเทคนิคการซ้อนทับ
อธิบายโดย braaz และเพื่อนร่วมงาน [ 15 ] ในระหว่างการเตรียมวุ้น
ชั้น , ด้านล่างของเกลือแร่ให้วุ้นแข็งตัวใน
จานเพาะเชื้อและ thenwas ซ้อนทับกับวุ้นเดียวกันเสริมด้วย
02% ( v / v ) น้ำยางบริสุทธิ์ ส่วนประกอบของแร่เกลือ
ขนาดกลาง ใช้วุ้นหุ้มยางตามสูตร
และอธิบายโดย Heisey papadatos [ 6 ] : 8.00 กรัม / ลิตร k2hpo4 1.00 กรัม / ลิตร
kh2po4 0.50 กรัม / ลิตร ( NH4 ) 2so4 0.20 กรัมต่อลิตร 7h2o MgSO4 ใ $ 0.10 กรัม / ลิตร
0.10 เกลือ , กรัม / ลิตร CA ( 3 ) 2 , 0.02 กรัม / ลิตร CaCl2 $ 2H2O-dx , 0.02 g / l $
7h2o feso4 , 0.50 mg / l na2moo4 $ H2O และ 0.50 mg / l mnso4 . สำหรับการเตรียมวุ้น
15 กรัมต่อลิตร ผงวุ้นแบคทีเรียเพิ่มเข้ามากลาง ก่อนการฆ่าเชื้อด้วยอัตราส่วนโฟกัส
.
บริสุทธิ์น้ำยางล้างใหม่ๆ เตรียมเคาะสามครั้งกับน้ำยางดิบ
Tween 80 ( ร้อยละ 0.002 ในอัตราส่วนหนึ่งต่อหนึ่ง )
19320  G สำหรับ 10 นาทีที่ 4  C ชั้นบนสุด ซึ่งเป็น ชั้นของครีมยางพารา
, จากแต่ละ centrifugationwas รวบรวมและใช้
ต่อไป 3 .ครีมยางพาราสุดท้ายผสมกับ
ปริมาณเท่ากับนร้อยละ 0.002 และฆ่าเชื้อ
โดยอัตราส่วนโฟกัสก่อนเพิ่มเป็นหมันละลาย เกลือ แร่ วุ้น