containing shrimp shell (2%). After

containing shrimp shell (2%). After 6 days of incubation at 26
C
the culture was centrifuged at 10,000 rpm at 4
C. The culture
medium (2 l) was precipitated using ammonium sulfate to 85%
saturation. The protein deposit was obtained by centrifugation
(16,000  g, 30 min) and dissolved in 50 mM sodium phosphate
buffer (pH 7.0) and dialyzed against the same buffer overnight.
The second step was chitin affinity chromatography according to
the modified method of Escott et al. (1998). The same volume of
1% (w/v) colloidal chitin in 50 mM sodium phosphate buffer (pH
7.0) was added to the desalted enzyme solution and incubated for
2 h at 4
C. This solution was centrifuged (10,000  g, 15 min), the
supernatant was discarded and the deposit was washed twice
with 50 mM sodium phosphate buffer (pH 7.0). The bound
proteins were eluted with 50 mM acetate buffer, pH 4.0 and
dialyzed overnight. After each purification phase the activity of
chitinases and protein content were determined. The highly
purified enzyme preparation (50 mg/ml) was sent to the Mass
Spectrometry Laboratory at IBB PAN Poland. A protein sample
previously digested using trypsin was separated on a nanoAcquity
UPLC (Ultra Performance LC) system and analyzed with an
Orbitrap-based mass spectrometer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ประกอบด้วยเปลือกกุ้ง (2%) หลังจากวันที่ 6 ของคณะทันตแพทยศาสตร์ที่ 26 C
วัฒนธรรมถูก centrifuged ที่ 10000 รอบต่อนาทีที่ 4 ค วัฒนธรรม
กลาง (2 ลิตร) ตกตะกอนโดยใช้แอมโมเนียมซัลเฟต 85%
ความเข้ม ฝากโปรตีนกล่าว โดย centrifugation
(16000 g, 30 นาที) และละลายในฟอสเฟตโซเดียม 50 mM
บัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ dialyzed กับบัฟเฟอร์เดียวค้างคืน
ขั้นตอนสองถูก chromatography ความสัมพันธ์ไคทินตาม
วิธีแก้ไขของ Escott et al. (1998) ระดับเดียวกัน
ไคทิน colloidal 1% (w/v) ใน 50 mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH
7.0) ถูกเพิ่มลงในโซลูชัน desalted เอนไซม์ และ incubated สำหรับ
h 2 ที่ค. 4 วิธีนี้ถูก centrifuged (10000 กรัม 15 นาที) , การ
supernatant ถูกปฏิเสธ และถูกล้างฝากสอง
มี 50 mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) ผูก
โปรตีนถูก eluted กับบัฟเฟอร์ acetate 50 มม. pH 4.0 และ
dialyzed ค้างคืน หลังจากฟอกแต่ละระยะการ
chitinases และโปรตีนเนื้อหาถูกกำหนด สูง
เตรียมเอนไซม์บริสุทธิ์ (50 mg/ml) ถูกส่งไปยังมวล
ปฏิบัติ Spectrometry ในมินสก์แพนโปแลนด์ ตัวอย่างโปรตีน
ก่อนหน้านี้ต้องใช้ทริปซินถูกแยกจากกันใน nanoAcquity
UPLC (Ultra ประสิทธิภาพ LC) ระบบ และวิเคราะห์ด้วยการ
Orbitrap ตามสเปกโตรมิเตอร์โดยรวม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่มีเปลือกกุ้ง (2%) หลังจาก 6 วันของการบ่มที่ 26 องศาเซลเซียส
วัฒนธรรมถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีที่ 4? C. วัฒนธรรม
กลาง (2 ลิตร) ได้รับการตกตะกอนโดยใช้แอมโมเนียมซัลเฟต 85%
ความอิ่มตัว เงินฝากโปรตีนที่ได้รับโดยการหมุนเหวี่ยง
(16,000? กรัม, 30 นาที) และละลายใน 50 มิลลิโซเดียมฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ dialyzed กับบัฟเฟอร์แบบเดิมในชั่วข้ามคืน
ขั้นตอนที่สองคือโคสัมพันธ์ไคตินไปตาม
วิธีการแก้ไข Escott และรหัส อัล (1998) ปริมาณเดียวกันของ
1% (w / v) ไคตินคอลลอยด์ใน 50 มิลลิโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH
7.0) ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อแก้ปัญหาเอนไซม์ desalted และบ่ม
2 ชั่วโมงที่ 4? C. การแก้ปัญหานี้ได้รับการหมุนเหวี่ยง (10,000? กรัม, 15 นาที),
ใสทิ้งและเงินฝากได้รับการล้างครั้งที่สอง
กับ 50 มิลลิโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) ผูกพัน
โปรตีนถูกชะกับ 50 มิลลิบัฟเฟอร์น้ำนมค่า pH 4.0 และ
dialyzed ในชั่วข้ามคืน หลังจากขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ของแต่ละกิจกรรม
chitinases และปริมาณโปรตีนได้รับการพิจารณา สูง
การเตรียมเอนไซม์ (50 mg / ml) ถูกส่งไปยังมวล
สเปกโทรเมตรีที่ห้องปฏิบัติการ IBB PAN โปแลนด์ ตัวอย่างโปรตีน
ย่อยก่อนหน้านี้ใช้ trypsin ถูกแยกออกใน nanoAcquity
UPLC (ผลการดำเนินงานอัลตร้า LC) และระบบวิเคราะห์ด้วย
สเปกโตรมิเตอร์มวล orbitrap ตาม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ที่มีเปลือกกุ้ง ( 2% ) หลังจาก 5 วันของการบ่มที่ 26
C
วัฒนธรรมคือระดับที่ 10 , 000 RPM ที่ 4
C
ขนาดกลาง ( 2 ลิตร ) วัฒนธรรมมาตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟตอิ่มตัว 85 %
. โปรตีนที่ได้รับจากการฝาก 3
( 16 , 000  กรัม , 30 นาที ) และละลายใน 50 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7
) และผ่านกับเดียวกัน
บัฟเฟอร์ในชั่วข้ามคืนขั้นตอนที่สอง คือ ไคตินขี้รังแคตาม
ดัดแปลงวิธีเอสก็อตต์ et al . ( 1998 ) ปริมาณเดียวกันของ
1 % ( w / v ) colloidal chitin ใน 50 mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH
7.0 ) ถูกเพิ่มลงในสารละลายเอนไซม์ desalted บ่มสำหรับ
2 H ที่ 4
ซี. โซลูชั่นนี้อยู่ที่ระดับ ( 10 , 000  G , 15 นาที ) ,
น่านถูกทิ้งและเงินฝาก คือ ล้างสองครั้ง
กับ 50 มม. โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) มีตัวอย่างโปรตีนผูกพัน
บัฟเฟอร์อะซิเตท 50 มม. , pH 4.0
ผ่านข้ามคืน หลังจากแต่ละขั้นตอนของกิจกรรมของเอนไซม์ไคติเนสบริสุทธิ์
และโปรตีนตัวอย่าง การเตรียมเอนไซม์สูง
( 50 mg / ml ) ถูกส่งไปยังมวล
รีห้องปฏิบัติการใน IBB แพนโปแลนด์ โปรตีนตัวอย่าง
ก่อนหน้านี้ใช้เอนไซม์ย่อยแยกบน nanoacquity
uplc ( LC ) และวิเคราะห์ข้อมูลด้วยระบบอัลตร้า )
orbitrap แมสสเปกโทรมิเตอร์ตาม