PLA2 subtypes activities by radioen

PLA2 subtypes activities by radioenzymatic assay
The substrate used was L-a-1-palmitoyl-2-arachidonyl-phosphatidyl-choline
labeled with [l-14C] in the
arachidonyl tail at position sn-2 (14C-PC) (48 mCi/mmol
specific activity, Perkin-Elmer, Boston, MA, USA)
previously diluted 1:10 (v/v) in a 0.14 g/ml solution of
the buthylated hydroxytoluene prepared in toluol–ethanol
(1:1, v/v). Prior to reaction, 14C-PC solution was
nitrogen evaporated (0.075 mCi/sample), resuspended in
ARTICLE IN PRESS
HO
HO
CH2OH
Me Me
Me
CO2-Glu-Glu-Rhm
Me
Me
Me
Fig. 1. Structural formula of asiaticoside. Glu ¼ glucose;
Rhm ¼ rhamnose; and Me ¼ methyl.
N.R. Barbosa et al. / Phytomedicine 15 (2008) 896–900 897
0.3 mg/ml human albumin solution and homogenized by
sonication.
Total homogenates of brain tissue were diluted to a
protein concentration of 1.5 mg/ml with 50 mM
Tris–HCl (pH 8.5 for sPLA2 and cPLA2 or pH 7.5 for
iPLA2). The assay samples containing 100 mM
Tris–HCl buffer (pH 8.5 or 7.5), 1 mM CaCl2 (for cPLA2
and iPLA2) or 2 mM for sPLA2, 100 mM BEL (Biomol,
Plymouth Meeting, PA), 300 mg of protein from diluted
homogenates, C. asiatica extract (0–500 mg/ml) and
0.075 mCi arachidonyl-1-14C-PC. After an incubation
time of 15 min at 37 1C, the reaction was stopped by
adding a mixture of HCl–isopropanol (1:12, v/v). The
liberated [l-14C] AA was then extracted. Finally, the
radioactivity of 14C-AA was measured in a liquid
scintillation counter (Tri-Carb 2100 TR; Packard,
Meriden, CT, USA) and used for calculating the PLA2
activities, which are expressed in pmol mg protein min1
.
All experiments were performed in triplicate.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PLA2 subtypes กิจกรรม โดยทดสอบ radioenzymaticพื้นผิวที่ใช้ได้ L-a-1-palmitoyl-2-arachidonyl-phosphatidyl-cholineป้ายกับ [l - 14C] ในการหาง arachidonyl ตำแหน่ง sn-2 (14C-PC) (48 mCi/mmolกิจกรรม เพอร์เอลเมอ Boston, MA สหรัฐอเมริกา)ก่อนหน้านี้แตกออก 1:10 (v/v) ในโซลูชัน 0.14 g/ml ของhydroxytoluene buthylated ที่เตรียมไว้ใน toluol-เอทานอล(1:1, v/v) ก่อนปฏิกิริยา 14 ซีพีซีโซลูชั่นได้ไนโตรเจนที่หายไป (0.075 mCi/ตัว อย่าง), resuspended ในบทความในวารสารโฮโฮCH2OHฉันฉันฉันCO2-Glu-Glu-RhmฉันฉันฉันFig. 1 สูตรโครงสร้างของ asiaticoside Glu ¼กลูโคสRhm ¼ rhamnose และฉัน¼ methylN.R. Barbosa et al. / Phytomedicine 15 (2008) 896-900 897แก้ปัญหามนุษย์ albumin 0.3 mg/ml และ homogenized เป็นกลุ่มโดยsonicationรวม homogenates ของเนื้อเยื่อสมองถูกทำให้เจือจางเพื่อเป็นโปรตีนเข้มข้น 1.5 mg/ml กับ 50 มม.ทริสเรทติ้ง – HCl (pH 8.5 สำหรับ sPLA2 และ cPLA2 หรือ pH 7.5 สำหรับiPLA2) ตัวอย่างทดสอบที่ประกอบด้วย 100 มม.ทริสเรทติ้ง – HCl บัฟเฟอร์ (pH 8.5 หรือ 7.5), 1 mM CaCl2 (สำหรับ cPLA2และ iPLA2) หรือ 2 มม.สำหรับ sPLA2 เบล (Biomol, 100 มม.ประชุมพลีมัธ PA), ยกเว้นโปรตีนจาก 300 มก.homogenates สารสกัดซีตัล (0-500 mg/ml) และ0.075 mCi arachidonyl 1-14C-PC หลังจากการฟักตัวเวลา 15 นาทีที่ 37 1C หยุดปฏิกิริยาโดยเพิ่มส่วนผสมของ HCl – isopropanol (1:12, v/v) ที่แล้วมีสกัด AA liberated [l - 14C] ในที่สุด การradioactivity AA 14C ถูกวัดในน้ำยาเคาน์เตอร์ scintillation (Tri-คาร์โบไฮเดรต 2100 TR Packardเดน CT สหรัฐอเมริกา) และใช้สำหรับการคำนวณ PLA2กิจกรรม ที่แสดงใน min1 pmol มิลลิกรัมโปรตีน.มีดำเนินการทดลองทั้งหมดใน triplicate

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PLA2 ชนิดย่อยกิจกรรมด้วยวิธี radioenzymatic
สารตั้งต้นที่ใช้เป็น
La-1-palmitoyl-2-arachidonyl-Phosphatidyl-โคลีกำกับด้วย[l-14C]
ในหางarachidonyl ที่ตำแหน่ง SN-2 (14C-PC) (48 มิลลิ /
มิลลิโมลที่เฉพาะเจาะจงกิจกรรมเพอร์กินเอลเมอ, บอสตัน, สหรัฐอเมริกา)
ปรับลดก่อนหน้านี้ 01:10 (v / v) ใน 0.14 g / ml แก้ปัญหาของ
hydroxytoluene buthylated จัดทำขึ้น toluol เอทานอล
(1: 1, v / v) ก่อนที่จะมีปฏิกิริยาตอบสนองการแก้ปัญหา 14C-PC
เป็นไนโตรเจนระเหย(0.075 มิลลิ / ตัวอย่าง) resuspended
ในบทความในPRESS
HO
HO
CH2OH ฉันฉันฉันCO2-Glu-Glu-Rhm ฉันฉันฉันรูป 1. สูตรโครงสร้างของ Asiaticoside Glu ¼กลูโคส; Rhm ¼แรมโนส; และฉัน¼เมธิล. NR แป et al, / phytomedicine 15 (2008) 896-900 897 0.3 mg / ml วิธีการแก้ปัญหาของมนุษย์และอัลบูมิหดหายโดยsonication. รวม homogenates ของเนื้อเยื่อสมองถูกปรับลดไปเป็นโปรตีนเข้มข้น1.5 mg / ml 50 มิลลิTris-HCl (pH 8.5 สำหรับ sPLA2 และ cPLA2 หรือค่า pH 7.5 สำหรับiPLA2) กลุ่มตัวอย่างที่ใช้ทดสอบมี 100 มิลลิบัฟเฟอร์Tris-HCl (pH 8.5 หรือ 7.5) 1 มิลลิ CaCl2 (สำหรับ cPLA2 และ iPLA2) หรือ 2 มิลลิสำหรับ sPLA2 100 มิลลิ BEL (Biomol, ประชุมพลีมั ธ , PA) 300 มก. ของโปรตีนจากเจือจางhomogenates ซีสารสกัดบัวบก (0-500 mg / ml) และ0.075 มิลลิ arachidonyl-1-14C พีซี หลังจากบ่มเวลา 15 นาทีที่ 37 1C ปฏิกิริยาหยุดการเพิ่มส่วนผสมของHCl-isopropanol (ที่ 01:12, v / v) ปลดปล่อย [l-14C] AA ถูกสกัดแล้ว ในที่สุดกัมมันตภาพรังสีของ 14C-AA วัดในของเหลวประกายเคาน์เตอร์(Tri-Carb 2100 TR; Packard, เมริเดน, CT, USA) และใช้สำหรับการคำนวณ PLA2 กิจกรรมซึ่งจะแสดงใน min1 โปรตีน pmol มก. ทดลองทุกคน ดำเนินการในการเพิ่มขึ้นสามเท่า

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

pla2 ชนิดย่อยต่างๆ radioenzymatic )
( ใช้ชื่อกับ l-a-1-palmitoyl-2-arachidonyl-phosphatidyl-choline
[ ]
l-14c ใน arachidonyl หางที่ตำแหน่ง sn-2 ( 14c-pc ) ( 48 มิลลิคูรี / mmol
เฉพาะกิจกรรม เพอร์กินเอลเมอร์ , Boston , MA , USA )
ก่อนหน้านี้เจือจาง 1 : 10 ( v / v ) ใน 0.14 กรัมต่อมิลลิลิตรสารละลาย
buthylated เรตไฮดรอกซีโทลูอีนเปรียบเทียบที่เตรียมไว้ใน toluol เอทานอล
( 1 : 1 โดยปริมาตร )ก่อนที่จะเกิด 14c-pc สารละลาย
ไนโตรเจนระเหย ( 0.075 มิลลิคูรี / ตัวอย่าง ) , resuspended ในบทความกด




ch2oh โฮโฮ ฉัน ฉัน ฉัน



rhm CO2 ซึ่งรวมถึงฉันฉันฉัน

รูปที่ 1 สูตรโครงสร้างของสารอะเซียติโคไซด์ . ซึ่ง¼กลูโคส ;
rhm ¼ rhamnose ; และฉัน¼เมทิล .
n.r. บาโบซ่า et al . ยาสมุนไพร / 15 ( 2551 ) เรา– 900 897
0.3 มก. / มล. และโซลูชั่นของมนุษย์โฮโมนด้วย

sonication .homogenates ทั้งหมดของเนื้อเยื่อสมองลดให้
โปรตีน 1.5 มก. / มล. กับ 50 mm
ทริส– HCl ( pH 8.5 และ spla2 cpla2 หรือ pH 7.5 สำหรับ
ipla2 ) วิเคราะห์ตัวอย่าง ( 100 mm
ทริส– HCl บัฟเฟอร์ pH 8.5 หรือ 7.5 ) , 1 มม. ผลิต ( และ cpla2
ipla2 ) หรือ 2 มิลลิเมตร spla2 , เบล 100 มม. ( biomol
พลีมัธ , ห้องประชุม , PA ) 300 มิลลิกรัมของโปรตีนจาก homogenates เจือจาง
, C .ใช้สารสกัด ( 1 ) 500 mg / ml ) 0.075 มิลลิคูรีและ
arachidonyl-1-14c-pc. หลังจากบ่ม
เวลา 15 นาทีที่ 37 1C , ปฏิกิริยาถูกหยุดโดย
เพิ่มส่วนผสมของ HCl และไอโซโพรพานอล ( 1 : 12 V / V )
อิสระ [ l-14c ] AA ถูกสกัด ในที่สุด การ 14c-aa วัด

เทคแคร์ในของเหลวที่เคาน์เตอร์ ( TRI carb 2100 TR ; Packard ,
Meriden , CT ,สหรัฐอเมริกา ) และใช้สำหรับการคำนวณกิจกรรม pla2
ซึ่งแสดงไว้ใน pmol มิลลิกรัมโปรตีน min1
.
ทั้งหมดทดลองทั้งสามใบ