. Cloning of the PCR productsPurifi

. Cloning of the PCR products
Purification of the amplified hexon gene product was carried
out using Pure LinkTM gel extraction kit (Invitrogen, USA) as per
manufacturer’s protocol. The purified PCR products were cloned
directionally into the bacterial expression vector pRSET B (Invitrogen,
USA)plasmid(Fig.1). For transformation, E. coli strainBL21 DE3
pLys S (Invitrogen, USA) was used. The recombinant clones were
initially identified by colony PCR using hexon gene specific primer
(Fig. 2) and verified by plasmid isolation and restriction enzyme
digestion for the release of the insert (Fig. 3). PCR amplified product
was sequenced to observe correct orientation and submitted to
GenBank (Accession No. EU 747350)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

. โคลนของผลิตภัณฑ์ PCRดำเนินการทำให้บริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ยีน hexon ขยายโดยการใช้ LinkTM เพียวเจลชุดสกัด (Invitrogen, USA) ตามโพรโทคอลของผู้ผลิต ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ถูกโคลนสืบพันธุ์ลงใน pRSET เวกเตอร์นิพจน์แบคทีเรีย B (InvitrogenUSA)plasmid(Fig.1) สำหรับการเปลี่ยนแปลง DE3 strainBL21 E. coliใช้ pLys S (Invitrogen สหรัฐอเมริกา) ถูกโคลน recombinantเริ่มโดยอาณานิคม PCR โดยใช้ไพรเมอร์เฉพาะยีน hexon(รูป 2) และตรวจสอบ โดยแยก plasmid และเอนไซม์จำกัดย่อยอาหารสำหรับการเปิดตัวของการแทรก (3 รูป) PCR ขยายผลิตภัณฑ์เรียงลำดับตามแนวถูกต้อง และส่งมาที่GenBank (ทะเบียนเลข EU 747350)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

. โคลนของผลิตภัณฑ์ PCR
บริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์ยีน hexon ขยายได้ดำเนิน
การโดยใช้ชุดการสกัดเจล LinkTM เพียว (Invitrogen, สหรัฐอเมริกา) ตาม
โปรโตคอลของผู้ผลิต ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์ถูกโคลน
ทิศทางเข้าไปในแบคทีเรียแสดงออกเวกเตอร์ pRSET B (Invitrogen,
USA) พลาสมิด (รูปที่ 1) สำหรับการเปลี่ยนแปลง, E. coli strainBL21 DE3
plys S (Invitrogen, สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้ โคลน recombinant ถูก
ระบุในขั้นแรกโดยอาณานิคม PCR โดยใช้ hexon ยีนไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจง
(รูปที่. 2) และตรวจสอบโดยการแยกพลาสมิดและข้อ จำกัด ของเอนไซม์
ย่อยอาหารสำหรับการเปิดตัวของการแทรก (รูปที่. 3) PCR สินค้าขยาย
ถูกติดใจที่จะสังเกตเห็นทิศทางที่ถูกต้องและส่งไปยัง
GenBank (เลขสหภาพยุโรป 747,350)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

. การโคลนยีนของผลิตภัณฑ์ของบริสุทธิ์ของผลิตภัณฑ์การขยาย Hexon ยีนใช้เจลสกัดบริสุทธิ์ linktm Kit ( Invitrogen , USA ) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต โดยทำการโคลนบริสุทธิ์ผลิตภัณฑ์directionally ในการแสดงออก prset B ( Invitrogen เวกเตอร์แบคทีเรีย ,สหรัฐอเมริกา ) พลาสมิด ( ” ) สำหรับการแปลง , E . coli strainbl21 DE3plys S ( Invitrogen , USA ) คือใช้ การโคลนยีนคือตอนแรกใช้ไพรเมอร์จำเพาะระบุยีนยีน Hexon อาณานิคม( รูปที่ 2 ) และตรวจสอบความถูกต้องโดยการแยกและเอนไซม์ พลาสมิดการย่อยอาหาร เพื่อออกแทรก ( รูปที่ 3 ) เพื่อขยายผลิตภัณฑ์ได้ทำการสังเกตถูกต้องปฐมนิเทศและส่งขนาด ( หนังสือไม่ EU 747350 )