Watermelon plants (Crimson Sweet)we

Watermelon plants (Crimson Sweet)
were cultivated under greenhouse conditions in 15-liter pots as
described above. At anthesis, female blossoms were hand pollinated
and stigmas were immediately inoculated with 10 μl of a
suspension of AAC00-1ΔhrcC or AAC00-1 at approximately 1 ×
108 CFU/ml as described above. Inoculated blossoms were allowed
to develop to harvest maturity (approximately 35 days after anthesis).
For each treatment, five mature fruit were harvested and seed
were extracted and stored at 4°C. The level of seed infestation was
determined by extracting total microbial DNA from seed and conducting
quantitative real-time PCR as follows. Seed (n = 50) were
macerated for 5 min using a homogenizer (Bioreba Homex 6; Bioreba,
Gilroy, CA) and suspended in 10 ml of PBS. The suspension
(1 ml) was pelleted by centrifugation at 13,000 rpm for 3 min. The
PBS was decanted and total microbial DNA was extracted from the
pellet using a Mobio Ultraclean Microbial DNA isolation kit (Mobio
Laboratories Inc., Carlsbad, CA), according to the manufacturer’s
instructions. Extracted DNA was dissolved in 20 μl of water
and 5 μl was used for real-time PCR. For real-time PCR, the master-
mix comprised 12.5 μl of Bio-Rad real-time PCR mastermix
(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA), 7.5 pM BOXAACF and
BOXAACR2 primers, and 5 pM TaqMan probe (11). Thermal cycling
conditions included denaturation at 95°C for 2 min., 35 cycles
of denaturation at 95°C for 15 s, and annealing and extension
at 55°C for 45 s. The experiment was conducted twice and mean
cycle threshold (Ct) values were recorded. A standard curve was
generated using 10-fold serial dilutions of A. citrulli cell suspensions
(1 × 108 to 1 × 100 CFU/ml). An amplification threshold
value of 30 fluorescence units was routinely used, and the standard
curve was based on four independent replicates. The standard
curve was constructed by plotting mean Ct values against log10 A.
700 Plant Disease / Vol. 95 No. 6
citrulli cell dilutions and it was used to estimate A. citrulli populations
in seed. The effect of the T3SS on colonization of watermelon
seed tissue via blossoms was determined using the Student’s
t test.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แตงโมพืช (สีแดงเข้มหวาน)มี cultivated สภาวะเรือนกระจกในกระถาง 15 ลิตรเป็นอธิบายไว้ข้างต้น Anthesis บลอสซั่มหญิงถูกมือ pollinatedและ stigmas ได้ทันที inoculated กับ μl 10 ของการระงับการ AAC00-1ΔhrcC หรือ AAC00-1 ที่ประมาณ 1 ราย108 CFU/ml ที่อธิบายข้างต้น บลอสซัม inoculated ได้รับอนุญาตเพื่อพัฒนาให้ครบกำหนด (ประมาณ 35 วันหลัง anthesis)สำหรับทรีตเมนท์ ผลไม้ 5 ผู้ใหญ่ถูกเก็บเกี่ยว และเมล็ดพันธุ์แยก และจัดเก็บที่ 4 องศาเซลเซียส ระดับของการทำลายเมล็ดพันธุ์ได้กำหนด โดยแยกรวมจุลินทรีย์ดีเอ็นเอจากเมล็ด และทำการเชิงปริมาณ PCR แบบเรียลไทม์เป็นดังนี้ เมล็ด (n = 50) ได้macerated ใน 5 นาทีใช้ homogenizer (Bioreba Homex 6 BiorebaGilroy, CA) และหยุดชั่วคราวใน 10 ml ของ PBS การระงับ(1 ml) ได้ pelleted โดย centrifugation ที่ 13000 rpm สำหรับ 3 นาทีPBS ถูก decanted และ DNA รวมจุลินทรีย์ถูกแยกจากเม็ดใช้ชุดแยก DNA จุลินทรีย์ Ultraclean Mobio (MobioLaboratories Inc. คาร์ลส CA), ตามของผู้ผลิตคำแนะนำ แยกดีเอ็นเอไม่ละลายใน 20 μl น้ำและ 5 μl ใช้สำหรับ PCR แบบเรียลไทม์ สำหรับเรียลไทม์ PCR หลัก-ผสมประกอบด้วย μl 12.5 ของ Bio Rad mastermix PCR แบบเรียลไทม์(ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Rad เฮอร์คิวลิส แคลิฟอร์เนีย), BOXAACF 17.00 น. และไพรเมอร์ BOXAACR2, 17.00 นและโพรบ TaqMan (11) ขี่จักรยานความร้อนเงื่อนไขรวม denaturation ที่ 95° C สำหรับ 2 นาที 35 รอบของ denaturation ที่ 95° C 15 s การอบเหนียว และส่วนขยายที่ 55° C สำหรับ 45 s ทดลองถูกดำเนินการสองครั้ง และหมายถึงได้รับการบันทึกค่าขีดจำกัด (Ct) ของวงจร มีเส้นโค้งมาตรฐานโดย dilutions 10-fold ประจำของ A. citrulli เซลล์บริการ(1 × 108 1 × 100 CFU/ml) ขีดจำกัดการขยายใช้ค่าของหน่วย fluorescence 30 เป็นประจำ และมาตรฐานโค้งขึ้นบนเหมือนกับเป็นอิสระ 4 มาตรฐานเส้นโค้งถูกสร้างขึ้นตามค่า Ct หมายถึงพล็อตกับ log10 อ.โรคพืช 700 / ปี 95 ฉบับที่ 6citrulli เซลล์ dilutions และใช้ประเมินประชากร A. citrulliในเมล็ด ผลของ T3SS สนามแตงโมเนื้อเยื่อเมล็ดผ่านบลอสซั่มกำหนดใช้ของนักเรียนการทดสอบ t

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พืชแตงโม (สีแดงเข้มหวาน)
ได้รับการปลูกฝังเรือนกระจกภายใต้เงื่อนไขในกระถาง 15
ลิตรขณะที่อธิบายไว้ข้างต้น ที่ดอกบานดอกหญิงมือเรณูและ stigmas ถูกเชื้อทันทีที่มี 10 ไมโครลิตรของการระงับการAAC00-1ΔhrcCหรือAAC00-1 ที่ประมาณ 1 × 108 CFU / ml ที่อธิบายข้างต้น ดอกเชื้อที่ได้รับอนุญาตในการพัฒนาจนครบกำหนดเก็บเกี่ยว (ประมาณ 35 วันหลังดอกบาน). สำหรับการรักษาแต่ละห้าผลไม้ผู้ใหญ่เก็บเกี่ยวเมล็ดพันธุ์และถูกสกัดและเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียส ระดับของการทำลายเมล็ดถูกกำหนดโดยการสกัดดีเอ็นเอของเชื้อจุลินทรีย์รวมจากเมล็ดและการดำเนินการแบบreal-time PCR เชิงปริมาณดังต่อไปนี้ เมล็ดพันธุ์ (n = 50) ได้รับการหมักเป็นเวลา5 นาทีโดยใช้ homogenizer (Bioreba Homex 6; Bioreba, กิลรอย, CA) และระงับใน 10 มิลลิลิตรพีบีเอส ระงับ(1 มล.) ได้รับเม็ดโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 3 นาที พีบีเอสได้รับการ decanted และ DNA ของเชื้อจุลินทรีย์รวมถูกสกัดจากเม็ดใช้Mobio ultraclean ชุดแยกดีเอ็นเอจุลินทรีย์ (Mobio Laboratories Inc. , Carlsbad, CA) ตามของผู้ผลิตคำแนะนำ ดีเอ็นเอที่สกัดถูกละลายใน 20 ไมโครลิตรน้ำและ5 ไมโครลิตรที่ใช้สำหรับ PCR แบบ real-time สำหรับวิธี PCR แบบ real-time ที่ master- ผสมประกอบด้วย 12.5 ไมโครลิตรของ Bio-Rad แบบ real-time PCR mastermix (ห้องปฏิบัติการ Bio-Rad ดาว, CA) 07:05 BOXAACF และไพรเมอร์BOXAACR2 และ 05:00 สอบสวน TaqMan (11) การขี่จักรยานร้อนเงื่อนไขรวม denaturation ที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที. 35 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่95 ° C เป็นเวลา 15 วินาทีและการอบและการขยายที่55 ° C เป็นเวลา 45 วินาที การทดลองที่ได้ดำเนินการสองครั้งและหมายถึงเกณฑ์วงจร (CT) ค่าที่ถูกบันทึกไว้ เส้นโค้งมาตรฐานถูกสร้างขึ้นโดยใช้อนุกรมเจือจาง 10 เท่าของเอแขวนลอยเซลล์ citrulli (1 × 108-1 × 100 CFU / ml) เกณฑ์การขยายมูลค่าของ 30 หน่วยเรืองแสงถูกนำมาใช้เป็นประจำและมาตรฐานโค้งอยู่บนพื้นฐานของสี่ซ้ำอิสระ มาตรฐานเส้นโค้งที่ถูกสร้างขึ้นโดยการวางแผนค่าเฉลี่ยกะรัตกับ log10 เอ 700 โรคพืช / ฉบับที่ 95 ฉบับที่ 6 เจือจาง citrulli มือถือและมันถูกใช้ในการประมาณการประชากร citrulli A. ในเมล็ด ผลของ T3SS ในการล่าอาณานิคมของแตงโมเนื้อเยื่อเมล็ดผ่านดอกถูกกำหนดโดยใช้ของนักศึกษาการทดสอบค่าที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แตงโมพืช ( สีแดงเข้มหวาน )
ปลูกภายใต้สภาพโรงเรือนหม้อ 15 ลิตร ตามที่
ที่อธิบายข้างต้น ที่ดอกบาน , ดอกเพศเมียพันธุ์และมือ
Stigmas ได้ทันทีใส่ 10 μ L ของ
ระงับ hrcc Δ aac00-1 หรือ aac00-1 ประมาณ 1 ×
108 CFU / ml ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ปลูกดอกไม้ให้
เพื่อพัฒนาผลเก็บเกี่ยว ( ประมาณ 35 วัน หลังดอกบาน ) .
สำหรับการรักษาแต่ละห้าผู้ใหญ่และผลเก็บเกี่ยวเมล็ดพันธุ์
ถูกสกัดและเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา ระดับของการทำลายเมล็ด
กำหนดโดยการสกัดดีเอ็นเอจากเมล็ด และปริมาณจุลินทรีย์ทั้งหมดดำเนินการ
ปริมาณ PCR แบบเรียลไทม์ ดังนี้ เมล็ด ( n = 50 )
macerated เป็นเวลา 5 นาทีโดยใช้เครื่องปั่น ( bioreba homex 6 ; bioreba
,กิลรอย , CA ) และแขวนลอยใน 10 ml ของ PBS การระงับ
( 1 มล. ) คือเม็ดที่ 13 , 000 รอบต่อนาที โดยปั่น 3 นาที
PBS เป็น decanted จุลินทรีย์ทั้งหมดและดีเอ็นเอจาก
เม็ดใช้ mobio สะอาดปราศจากเชื้อโรคจุลินทรีย์ดีเอ็นเอแยกชุด ( mobio
ห้องปฏิบัติการอิงค์ , Carlsbad , CA ) ตามคำแนะนำของ
ผู้ผลิต สกัดดีเอ็นเอถูกละลายในน้ำ 20 ลิตรμ
และ 5 μผมใช้ PCR แบบเรียลไทม์ สำหรับ PCR แบบเรียลไทม์ มาสเตอร์ -
ผสมประกอบด้วย 12.5 μ L ของไบโอ ราดแบบ PCR mastermix
( ไบโอ ราดห้องปฏิบัติการ , Hercules , CA ) 7.5 น. boxaacf และ
boxaacr2 ไพรเมอร์ และ 5 โมงเย็น taqman โพรบ ( 11 ) เงื่อนไขการขี่จักรยาน
ความร้อนรวม ( ที่ 95 องศา C 2 นาที 35 รอบ
ของ 95 องศา C ( 15 , และการอบและส่วนขยาย
55 ° C เป็นเวลา 45 วินาทีโดยทำการทดลองสองครั้ง และหมายถึง
วัฏจักรธรณี ( CT ) มีการบันทึก เส้นโค้งมาตรฐานถูกสร้างขึ้นโดยใช้ซีเรียลเจือจาง 10 เท่า
. citrulli เซลล์แขวนลอย
( 1 × 108 1 × 100 CFU / ml ) การขยายเกณฑ์
มูลค่า 30 หน่วยเรืองแสงอยู่เป็นประจำ และการใช้เส้นโค้งมาตรฐาน
ขึ้นอยู่กับสี่แบบอิสระ มาตรฐาน
โค้งถูกสร้างขึ้นโดยวางแผนหมายถึงค่า CT กับ LN .
700 โรคพืช / ฉบับที่ 95 ฉบับที่ 6
citrulli เซลล์เจือจางและมันก็ใช้ในการประมาณการประชากร citrulli A .
ในเมล็ด ผลของการ t3ss บนเนื้อเยื่อเมล็ดแตงโม
ผ่านบานใช้วิเคราะห์ทดสอบ t ของ
นักเรียน