2. Materials and methods2.1. Biolog

2. Materials and methods
2.1. Biological samples
Fairy shrimp, Streptocephlaus dichotomus
(Poondi, Chennai) and water fleas, Moina micrura
(near Tambaram, Chennai) were collected from
temporary ponds and brought to the laboratory.
The animals were separated, cleaned with distilled
water, freeze-dried and stored until chromatographic
analyses.
2.2. Sample preparation
The animals (1 g dry mass) were homogenised
separately in 1 ml of acetone, centrifuged at
4500=g for 5 min at 4 8C and suspended in
EDTV solution (40 mM EDTA, 10% NaCl, pH
7.0) . The carotenoprotein complexes were precipitated
with ammonium sulfate as outlined by
Zagalsky et al. (1970). The precipitate was again
centrifuged and dissolved in 0.05 M phosphate
buffer (pH 7.0). In the presence of phosphate
buffer, dialysis was performed overnight in a
refrigerator. Absorption maxima, prosthetic group
and amino acid compositions of the protein complex
were also analysed.
2.3. Column and thin layer chromatography
The dialysed material was once again centrifuged
and then purified by ion-exchange chromatography
on DEAE-cellulose. Elution was carried
out with phosphate buffer (pH 7.0) using a linear
concentration gradient of 0.02–0.35 M. The measurements of extinction in the eluent were taken in
the range of 300–800 nm using a Model 203
‘Spectrimom’ spectrophotometer.
Carotenoids were liberated from carotenoproteins
with acetone according to the procedure of
Shone et al. (1979). Using thin-layer chromatography,
the prosthetic group of carotenoproteins, the
ketocarotenoids were identified. The extracted
carotenoid alone was analysed or admixed with a
ketocarotenoid (canthaxanthin and asthaxanthin)
standard (Hoffman La Roche, Basle, Switzerland
and Sigma, USA). Individual pigments were identified
based on their separation on (a) thin-layer
chromatography, which was carried out on silica
gel-G supported on 20=20 cm glass plate in a
pre-saturated chamber; the solvent system consisted
of 15% acetone in petroleum ether as outlined
by Zagalsky et al. (1967); (b) based on their
partition between hexane and 95% methanol; and
(c) the mass spectrum of end groups (Wetter et
al., 1971

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ตัวอย่างทางชีวภาพ
นางฟ้ากุ้ง streptocephlaus ไดโคโตมัส
( poondi เจนไน ) และน้ำหมัด , ไรแดง micrura
( ใกล้ tambaram เจนไน ) จากการสัมภาษณ์
บ่อชั่วคราว และนำตัวไปห้องทดลอง .
สัตว์แยกจากกันแล้ว ล้างด้วยน้ำกลั่น
น้ำแห้งและเก็บไว้จนกว่าการวิเคราะห์ทางโครมาโตกราฟี
.
2.2 .
ตัวอย่างการเตรียมสัตว์ ( 1 กรัมน้ำหนักแห้งเป็น homogenised
แยก 1 มิลลิลิตร สำหรับระดับที่ 4 , 500 = g ,
5 นาทีที่ 4 8C และระงับใน
edtv โซลูชั่น ( 40 mM EDTA 10 โซเดียมคลอไรด์พีเอช
7.0 ) การ carotenoprotein เชิงซ้อนตกตะกอนด้วยแอมโมเนียมซัลเฟต (

zagalsky ตามที่ระบุโดย et al . ( 1970 ) เป็นอีกครั้งที่ระดับ 0.05 M

และละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 )ในการแสดงตนของฟอสเฟตบัฟเฟอร์

และมีการค้างคืนในตู้เย็น Maxima การดูดซึม
กลุ่มเทียมและกรดอะมิโนองค์ประกอบโปรตีนที่ซับซ้อนยังวิเคราะห์
.
2.3 คอลัมน์โครมาโตกราฟีผิวบาง
วัสดุ dialysed อีกครั้งที่ระดับแล้ว บริสุทธิ์ โดยการแลกเปลี่ยนไอออน chromatography

บน DEAE เซลลูโลส ได้มาอุ้ม
ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) โดยใช้การไล่ระดับความเข้มข้น 0.02 0.35 เมตร เส้น
–วัดสูญพันธุ์ในตัวถ่าย
ช่วง 300 - 800 nm ใช้รุ่น 203

'spectrimom ' วัสดุ คาโรทีนอยด์ถูกปลดปล่อยจาก carotenoproteins
ด้วยอะซิโตน ตามขั้นตอนของ
ส่อง et al , . ( 1979 ) การใช้เทคนิค TLC พบ
,กลุ่มเทียมของ carotenoproteins ,
ketocarotenoids ระบุ . สกัดแคโรทีนอยด์คนเดียว
วิเคราะห์หรือผสมกับ ketocarotenoid ( แคนทาแซนทิน และ asthaxanthin )

มาตรฐาน ( ฮอฟแมน ลา โรช และ basle สวิตเซอร์แลนด์
, Sigma , USA ) สีแต่ละตัวระบุ
ตามแยกของพวกเขา ( A )
1 เครื่อง ซึ่งพบว่าซิลิกา
gel-g รองรับใน 20 = 20 ซม. จานแก้วใน
ก่อนห้องอิ่มตัว ; ระบบตัวทำละลาย )
15 % ) ในปิโตรเลียมอีเทอร์ตามที่ระบุ
โดย zagalsky et al . ( 1967 ) ; ( b ) ตาม
กั้นระหว่างเฮกเซนและ 95 % เมทานอล ;
( C ) แมสสเปกตรัมของกลุ่ม ( Wetter et
al . , 1971