2.8. Western blot analysisRAW 264.7

2.8. Western blot analysis
RAW 264.7 cells cultured were homogenized in a protein extraction solution
(PROPREPTM; iNtRON Biotechnology, Seongnam, Korea). The procedures were as
described previously (Park et al., 2012). The membranes were blocked with 5%
fat-free dry milk and then incubated with anti-HO-1 (1:1000 dilution, Biovision,
Mountain View, CA, USA), anti-iNOS (1:500 dilution, BD biosciences, Franklin Lakes,
NJ, USA), anti-a-tubulin monoclonal (1:5000 dilution), or anti-b-actin antibody
(1:10,000 dilution). The primary antibody incubation was followed by incubation
with a secondary peroxidase conjugated anti-rabbit or anti-mouse antibody at
1:10,000 (Assay designs, Ann Arbor, MI, USA). Immuno-positive bands were visualized
by enhanced chemiluminescence (ECL Plus kit, ELPIS, Taejon, Korea) according
to the manufacturer’s instructions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8. เวสเทิร์นคืนในตาวิเคราะห์เซลล์ที่ 264.7 ดิบอ่างถูก homogenized เป็นกลุ่มในโซลูชั่นในการสกัดโปรตีน(PROPREPTM; iNtRON เทคโนโลยีชีวภาพ นัม เกาหลี) ขั้นตอนที่เป็นอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (สวนร้อยเอ็ด al., 2012) บล็อกเข้า 5%ไขมันนมแห้ง และปราศจากแล้ว incubated กับ anti-โฮจิมินห์-1 (1:1000 เจือจาง Biovisionภูเขา CA, USA), anti-iNOS (เจือจาง 1: 500 เวลาออก BD แฟรงคลินทะเลสาบNJ สหรัฐอเมริกา), anti-a-tubulin โมโน (1:5000 เจือจาง), หรือแอนติบอดีต่อต้านบีแอกติน(1:10, 000 เจือจาง) คณะทันตแพทยศาสตร์หลักแอนติบอดีถูกตาม ด้วยคณะทันตแพทยศาสตร์มี peroxidase รองกลวงแอนติบอดีป้องกันกระต่าย หรือป้องกันเมาส์ที่1:10,000 (แบบทดสอบ Ann Arbor, MI สหรัฐอเมริกา) มี visualized วง Immuno บวกโดยปรับปรุงตาม chemiluminescence (ECL บวกชุด ELPIS, Taejon เกาหลี)ให้คำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 การวิเคราะห์ดวงตะวัน
RAW 264.7 เซลล์เพาะเลี้ยงที่ถูกปั่นในการแก้ปัญหาการสกัดโปรตีน
(PROPREPTM; intron เทคโนโลยีชีวภาพซองเกาหลี) ขั้นตอนดังอธิบายไว้ก่อนหน้า (พาร์ et al., 2012)
เยื่อถูกบล็อก 5%
นมไขมันฟรีแห้งแล้วบ่มที่มีการป้องกัน-HO-1 (1: 1,000 เจือจาง Biovision,
Mountain View, CA, USA), ป้องกัน iNOS (1: 500 เจือจางชีววิทยาศาสตร์ BD แฟรงคลิน
ทะเลสาบนิวเจอร์ซีย์สหรัฐอเมริกา), การป้องกัน-a-tubulin โมโนโคลนอล (1: 5000 เจือจาง) หรือแอนติบอดีต่อต้านขโปรตีน
(1: 10,000 เจือจาง) บ่มแอนติบอดีหลักตามมาด้วยการบ่มด้วย peroxidase รองผันป้องกันกระต่ายหรือแอนติบอดีต่อต้านเมาส์ที่ 1: 10,000 (ออกแบบ Assay, Ann Arbor, MI, USA) วงดนตรีที่ Immuno บวกถูกมองเห็นโดยการเพิ่ม chemiluminescence (ชุดพลัส, Elpis, แตเกาหลี) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 . การวิเคราะห์
blot ตะวันตกดิบ 264.7 เพาะเลี้ยงเซลล์ถูกบดในการสกัดโปรตีนโซลูชั่น
( propreptm ; iNtRON เทคโนโลยีชีวภาพ นัม เกาหลี ) ขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (
ปาร์ค et al . , 2012 ) เยื่อที่ถูกบล็อกด้วย 5 %
ไขมันฟรีนมแห้งและบ่มด้วย anti-ho-1 ( 000 เจือจาง biovision
, Mountain View , CA , USA ) , ต่อต้าน inos ( เจือจาง 1 : 500 ,BD BIOSCIENCES Franklin Lakes ,
NJ , USA ) , anti-a-tubulin โมโนโคลนอล ( 1:5000 เจือจาง ) หรือ anti-b-actin )
( 1:10000 เจือจาง ) 4 ) หลักตามด้วยการบ่มเอนไซม์ conjugated anti รอง
กับกระต่ายหรือแอนติบอดีต่อต้านเมาส์ที่
1:10000 ( ออกแบบโดย แอน อาร์บอร์ , มิชิแกน , สหรัฐอเมริกา มมูโนบวกรัดมองเห็น
โดยนโยบายแรงงานเพิ่มขึ้น ( ECL รวมชุดelpis แทจอน , เกาหลีใต้ ,
) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต