PCR products were isolated and subc

PCR products were isolated and subcloned into the TA cloning vector pGEM-T Easy (Promega, Fitchburg, WI, USA) and sequenced by a 3130 DNA sequencer (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Full- length cDNA was isolated by the rapid amplification of cDNA ends (RACE) technique using Marathon cDNA Amplification Kit (Clontech, San Jose, CA, USA).
To investigate whether we obtained the genuine orthologs in P. machaon and P. polytes, we performed the phylogenetic analysis using several related genes. Sequences were aligned using Clustal_X (Thompson et al. 1997). Phylogenetic trees were constructed by the Neighbor joining method with the MEGA4 program (Tamura et al. 2007). The confidence of the various phylogenetic lineages was assessed by the bootstrap analysis. The sequences used to create the diagram are listed in supporting information Table S1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกผลิตภัณฑ์ PCR และ subcloned เป็น TA cloning vector ง่าย pGEM T (Promega แมดิสัน อิน สหรัฐอเมริกา) และเรียงลำดับตาม 3130 DNA sequencer (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ เมืองฟอสเตอร์ CA, USA) ความยาวเต็ม cDNA ถูกแยก โดยขยายอย่างรวดเร็วของ cDNA ปลาย (แข่งขัน) เทคนิคการใช้ cDNA มาราธอนชุดขยาย (Clontech, San Jose, CA, USA)การตรวจสอบว่า เราได้รับ orthologs ของแท้ใน P. machaon และ P. polytes เราทำการวิเคราะห์ผลโดยใช้ยีนที่เกี่ยวข้องหลาย ลำดับสอดคล้องโดยใช้ Clustal_X (Thompson et al. 1997) ต้นทางถูกสร้างขึ้น โดยเพื่อนบ้านที่เข้าร่วมวิธี ด้วยโปรแกรม MEGA4 (ทา et al. 2007) ความมั่นใจต่าง ๆ ทางเชื้อที่ชาติถูกประเมิน โดยการวิเคราะห์เริ่มต้น ลำดับที่ใช้ในการสร้างไดอะแกรมที่อยู่ในการสนับสนุนข้อมูลตาราง S1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกแยกและ subcloned ลงไปในโคลนเวกเตอร์ TA pGEM-T ง่าย (Promega ฟิตช์, WI, USA) และลำดับขั้นตอนโดยซีเควนดีเอ็นเอ 3130 (Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) cDNA ความยาวเต็มรูปแบบที่แยกได้จากการขยายตัวอย่างรวดเร็วของยีนปลาย (แข่งขัน) โดยใช้เทคนิคการวิ่งมาราธอน cDNA Amplification Kit (Clontech, San Jose, CA, USA.)
ในการตรวจสอบว่าเราได้รับ orthologs ของแท้ในพีพี Machaon polytes, เราดำเนินการ phylogenetic วิเคราะห์โดยใช้ยีนที่เกี่ยวข้องกับหลาย ลำดับถูกจัดชิดโดยใช้ Clustal_X ( ธ อมป์สัน et al. 1997) ต้นไม้ที่ถูกสร้างขึ้นโดยเพื่อนบ้านวิธีการเข้าร่วมกับโปรแกรม MEGA4 นี้ (ทามูระ et al. 2007) ความเชื่อมั่นของ lineages phylogenetic ต่าง ๆ ได้รับการประเมินโดยการวิเคราะห์บูต ลำดับที่ใช้ในการสร้างแผนภาพมีการระบุไว้ในการสนับสนุนข้อมูลตาราง S1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกแยกของเป็น ทาโคลน pgem-t เวกเตอร์ที่ง่าย ( promega Fitchburg , WI , USA ) และลำดับเบสโดย 3130 ลำดับ DNA ( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา เต็ม - ยาวแยก cDNA โดยการขยายอย่างรวดเร็วของ cDNA Ends ( แข่ง ) โดยใช้เทคนิคชุด Amplification cDNA มาราธอน ( clontech , San Jose , CA , USA )เพื่อตรวจสอบว่าเราได้รับ orthologs ของแท้ในหน้า Machaon และ P . polytes เราได้ทำการวิเคราะห์ ซึ่งใช้หลายที่เกี่ยวข้องกับยีน ลำดับการใช้ clustal_x ชิด ( Thompson et al . 1997 ) ต้นไม้ซึ่งถูกสร้างโดยเพื่อนบ้านร่วมวิธีกับโปรแกรม mega4 ( ทามูระ et al . 2007 ) ความเชื่อมั่นของต่าง ๆ ซึ่งเมื่อประเมินโดยการวิเคราะห์บูสแตรป ขั้นตอนที่ใช้ในการสร้างแผนภาพที่แสดงในการสนับสนุนตารางข้อมูล S1 .