Lipases (triacylglycerol acylhydrol

Lipases (triacylglycerol acylhydrolase, EC 3.1.1.3), which
catalyzes the hydrolysis of triacrylglycerol, have received much
attention because of their potential use in industry.l,2) Various
microbiallipases are being produced on an industrial scale for the
purpose of ester synthesis,3) fat-splitting,4) and so on. They are
diversified in their enzymatic properties and substrate specificities.
Above all, the lipase from Penicillium camembertii U-1505
) has a
unique substrate specificity of hydrolyzing mono- and diacylglycerols
but not triacylglycerols. The lipase is very useful
for facilitating crystallization in fractionation process of fats and
oils by reducing the diacylglycerol concentration, 6) but is not
suitable for diagnostic use for a serum lipase assay by reason of
its optimum pH (5.6).
We were interested in finding a lipase from microorganisms that
had good properties for such use and screened 90 fungi for lipase
producers. In this paper, we report the results of investigations of
the purification and characterization of the extracellular lipase
produced by Fusarium sp. YM-30.
Lipase activity was measured using l-monooleylglycerol
(Funakoshi Co., Ltd., Tokyo, Japan) as substrate. The standard
assay mixture contained 5.6 nmol of substrate, 200 pI of n-hexane,
800 pI of 0.1 M Tris buffer (pH 7.0), and 100 pI oflipase solution.
After reaction at 37°C for 30min with mixing every 3 min, 1 ml
of CHCl3 was added to stop the reaction and the glycerol released
into the water layer was measured with a Triglyceride G Test
Wako (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japan). One unit
of lipase activity is defined as the amount of enzyme that released
1 pmol of glycerol per min. On the assay of substrate specificity,
fatty acids released in the CHCl3 layer were also measured with
a NEFA C-Test Wako (Wako Pure Chemical Industries, Osaka,
Japan).
Protein concentration was measured by the method of Bradford
7
) using a protein assay kit (Bio-Rad Lab., Richmond,
California, U.S.A.) with bovine serum albumin as the standard.
For the production of lipase, F. sp. YM-30 was cultured in
a medium containing 1 % monoolein, 1% polypeptone, 0.5%
NaN03, 0.25% K2HP04, 0.125% MgS04' 7H20, 0.005%
FeS04' 7H20, and 1.0% yeast extract (pH 6.0). The cultivation
in a 30-liter jar-fermentor was done in 20 liters of medium at 30°C
for 72 h with agitation at 300 rpm and aeration at 20 liters per min.
The mycellia were removed by filtration and the filtrate was
concentrated with ultrafiltration. The methods used in purifying
the lipase and the results are summarized in Table I. All purification

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Lipases (triacylglycerol acylhydrolase, EC 3.1.1.3), ซึ่งcatalyzes สลายของ triacrylglycerol ได้รับมากความสนใจเนื่องจากการใช้ศักยภาพใน industry.l,2) ต่าง ๆมีกำลังผลิต microbiallipases บนอุตสาหกรรมสำหรับการวัตถุประสงค์ของเอสเทอร์สังเคราะห์ 3) ไขมันแบ่ง 4) และ พวกเขาจะมีความหลากหลายในคุณสมบัติเอนไซม์และพื้นผิวจำเพาะข้างต้นทั้งหมด เอนไซม์ไลเปสจากศาสตราจารย์ camembertii U-1505) มีการความเฉพาะพื้นของ hydrolyzing โมโน - และ diacylglycerolsแต่ triacylglycerols ไม่ เอนไซม์ไลเปสมีประโยชน์มากเพื่ออำนวยความสะดวกการตกผลึกในกระบวนการแยกส่วนของไขมัน และน้ำมัน โดยลดความเข้มข้น diacylglycerol, 6) แต่ไม่เหมาะสำหรับใช้วิเคราะห์สำหรับการวิเคราะห์เอนไซม์ไลเปสซีรั่มโดย reason ของค่า pH เหมาะสม (5.6)เราไม่สนใจในการหาเอนไซม์ไลเปสจากจุลินทรีย์ที่มีคุณสมบัติที่ดีสำหรับการใช้ และตรวจเชื้อ 90 สำหรับเอนไซม์ไลเปสผู้ผลิต ในกระดาษนี้ เราได้รายงานผลการสอบสวนของบริสุทธิ์และสมบัติของเอนไซม์ไลเปสสารผลิต โดยเอสพี Fusarium YM-30มีวัดกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่ใช้ l-monooleylglycerol(Funakoshi Co., Ltd. โตเกียว ญี่ปุ่น) เป็นพื้นผิว มาตรฐานทดสอบผสมอยู่ 5.6 นาโนโมลของพื้นผิว ปี่ 200 ของเอ็นเฮกเซนพี่ 800 0.1 M ทริบัฟเฟอร์ (pH 7.0), และ 100 ปี่ oflipase โซลูชันหลังจากปฏิกิริยาที่ 37° C เป็นเวลา 30 นาทีด้วยการผสมทุก 3 นาที 1 มิลลิลิตรของ CHCl3 เพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยาและกลีเซอรอลออกน้ำ ชั้นถูกวัด ด้วยแบบทดสอบ G ไตรกลีเซอไรด์วาโกะ (วาโกะบริสุทธิ์อุตสาหกรรมเคมี โอซาก้า ญี่ปุ่น) หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ไลเปสที่ กำหนดกิจกรรมจำนวนเอนไซม์ที่นำออกใช้pmol 1 ของกลีเซอรอลต่อนาที ในการทดสอบของพื้นผิวความกรดไขมันออกในชั้น CHCl3 ยังถูกวัดด้วยวาโกะทดสอบ C NEFA (วาโกะบริสุทธิ์อุตสาหกรรมเคมี โอซาก้าประเทศญี่ปุ่น)ความเข้มข้นของโปรตีนโดยวัดจากวิธีการของแบรดฟอร์ด7) โดยใช้ชุดทดสอบโปรตีน (ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Rad ริชมอนด์แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) มีวัว serum albumin เป็นมาตรฐานในการผลิตเอนไซม์ไลเปส เอสพีเอฟ YM 30 ถูกเพาะเลี้ยงในสื่อที่ประกอบด้วย 1% monoolein, polypeptone 1%, 0.5%NaN03, K2HP04% ของ 0.25, 0.125% MgS04' 7H 20, 0.005%FeS04' 7H 20 และสารสกัดจากยีสต์ 1.0% (ค่า pH 6.0) การเพาะปลูกใน fermentor ขวดมี 30 ลิตรทำในกลางที่ 30° C 20 ลิตรสำหรับ h 72 ปั่นป่วนที่ 300 rpm และอากาศที่ 20 ลิตรต่อนาทีMycellia ถูกถอดออก โดยการกรอง และการกรองถูกเข้มข้น ด้วยกรอง วิธีการที่ใช้ในการทำความสะอาดเอนไซม์ไลเปสและผลที่สรุปได้ในตารางผม บริสุทธิ์ทั้งหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ไลเปส (triacylglycerol acylhydrolase, EC 3.1.1.3) ซึ่ง
ย่อยสลาย triacrylglycerol ที่ได้รับมาก
ให้ความสนใจเนื่องจากการใช้ศักยภาพของพวกเขาใน industry.l 2) ต่างๆ
microbiallipases มีการผลิตในระดับอุตสาหกรรมสำหรับ
วัตถุประสงค์ของการสังเคราะห์เอสเตอร์ 3) ไขมันแยก 4) และอื่น ๆ พวกเขาจะ
มีความหลากหลายในคุณสมบัติของเอนไซม์และสารตั้งต้นจำเพาะ.
เหนือสิ่งเอนไซม์ไลเปสจาก Penicillium camembertii U-1505
) มี
ความจำเพาะพื้นผิวที่เป็นเอกลักษณ์ของไฮโดรไลซ์ขาวดำและ diacylglycerols
แต่ไม่ triacylglycerols ไลเปสเป็นประโยชน์อย่างมาก
สำหรับการอำนวยความสะดวกในการตกผลึกในกระบวนการแยกของไขมันและ
น้ำมันโดยการลดความเข้มข้น diacylglycerol, 6) แต่ไม่
เหมาะสำหรับใช้ในการวินิจฉัยสำหรับการทดสอบซีรั่มไลเปสด้วยเหตุผลของ
ความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมของมัน (5.6).
เรามีความสนใจในการหา เพสจากจุลินทรีย์ที่
มีคุณสมบัติที่ดีสำหรับการใช้งานดังกล่าวและการคัดเลือก 90 เชื้อราสำหรับเอนไซม์ไลเปส
ผู้ผลิต ในบทความนี้เราจะรายงานผลการสืบสวนของ
บริสุทธิ์และลักษณะของเอนไซม์ไลเปส
ที่ผลิตโดย Fusarium SP YM-30.
กิจกรรมเอนไซม์ไลเปสได้รับการวัดโดยใช้ L-monooleylglycerol
(โกชิ จำกัด กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) เป็นสารตั้งต้น มาตรฐาน
ส่วนผสมการทดสอบที่มีอยู่ 5.6 nmol ของพื้นผิว 200 pI n-เฮกเซน
800 pI 0.1 M Tris บัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ 100 pI oflipase วิธีการแก้ปัญหา.
หลังจากปฏิกิริยาที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีด้วยการผสมทุก 3 นาที, 1 มล.
ของ CHCl3 ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อหยุดการเกิดปฏิกิริยาและกลีเซอรอลที่ปล่อยออกมา
ในชั้นน้ำที่ถูกวัดที่มีไตรกลีเซอไรด์ G ทดสอบ
Wako (Wako อุตสาหกรรมเคมีบริสุทธิ์, โอซาก้าประเทศญี่ปุ่น) หนึ่งหน่วย
ของกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสถูกกำหนดให้เป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ปล่อยออกมา
1 pmol กลีเซอรอลต่อนาที ในการทดสอบความจำเพาะพื้นผิว,
กรดไขมันที่ได้รับการปล่อยตัวในชั้น CHCl3 ยังเป็นวัดที่มีความ
NEFA C-ทดสอบ Wako (Wako อุตสาหกรรมเคมีบริสุทธิ์, โอซาก้า
ประเทศญี่ปุ่น).
ความเข้มข้นของโปรตีนโดยวัดจากวิธีการของแบรดฟอ
7
) โดยใช้การทดสอบโปรตีน Kit (Bio-Rad Lab. ริชมอนด์
รัฐแคลิฟอร์เนียประเทศสหรัฐอเมริกา) กับอัลบูมิวัวซีรั่มเป็นมาตรฐาน.
สำหรับการผลิตของไลเปสเอฟ SP YM-30 เป็นที่เลี้ยงใน
สื่อที่มี monoolein 1%, polypeptone 1%, 0.5%
NaN03, 0.25% K2HP04, 0.125% '7H20, 0.005% MgS04
FeS04' 7H20 และ 1.0% สารสกัดจากยีสต์ (pH 6.0) การเพาะปลูก
ใน 30 ลิตรขวดถังหมักที่ทำใน 20 ลิตรของกลางที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 72 ชั่วโมงที่มีการกวนที่ 300 รอบต่อนาทีและการให้อากาศที่ 20 ลิตรต่อนาที.
mycellia ถูกถอดออกโดยการกรองและการกรองที่ถูก
เข้มข้นกับกรอง . วิธีการที่ใช้ในการทำให้บริสุทธิ์
เอนไซม์ไลเปสและผลสรุปในตาราง I. บริสุทธิ์ทั้งหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ไลเปส ( triacylglycerol acylhydrolase EC 3.1.1.3 ) ซึ่งและการย่อยสลายของ triacrylglycerol ได้รับ มากความสนใจเนื่องจากการใช้ศักยภาพของพวกเขาในอุตสาหกรรม ชั้น 2 ) ต่าง ๆmicrobiallipases มีการผลิตในขั้นอุตสาหกรรมสำหรับวัตถุประสงค์ของการสังเคราะห์เอสเทอร์ , 3 ) การแยกไขมัน , 4 ) และ พวกเขาเป็นหลากหลายในคุณสมบัติของสารอาหารและเอนไซม์ - .เหนือสิ่งอื่นใด เอนไซม์จากเชื้อรา Penicillium camembertii u-1505) มีความจำเพาะ ( เฉพาะของการย่อยและ diacylglycerols โมโนแต่ไม่ใช่ ไตรกลีเซอรอล . เอนไซม์มีประโยชน์มากเพื่อส่งเสริมกระบวนการตกผลึกในส่วนของไขมัน และน้ำมันโดยการลด diacylglycerol ความเข้มข้น , 6 ) แต่ไม่เหมาะสำหรับใช้วินิจฉัย การทดสอบด้วยเซรั่มเอนไซม์pH ที่เหมาะสมของมัน ( 5.6 )เราสนใจในการหาเอนไซม์ไลเปสจากเชื้อจุลินทรีย์ที่มี คุณสมบัติที่ดีสำหรับการใช้งานดังกล่าวและคัดกรอง 90 เชื้อราแบคทีเรียผู้ผลิต ในกระดาษนี้เรารายงานผลการสืบสวนของการทำให้บริสุทธิ์และคุณสมบัติของเอนไซม์พบว่าผลิตโดย Fusarium sp . ym-30 .กิจกรรมพบ l-monooleylglycerol วัดโดยใช้( จาก จำกัด , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) เป็นสับสเตรท มาตรฐานส่วนผสมวิธีที่มีอยู่ 5.6 ? ( บีบ 200 ปี่ของ ,ด 0.1 M 800 บริษัทบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) และ 100 ปี่ oflipase โซลูชั่นหลังจากปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 37 องศา C เป็นเวลา 30 นาที ผสมกับทุก 3 นาที 1 มิลลิลิตรของ chcl3 ถูกเพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยากลีเซอรอล และออกลงไปในน้ำที่ชั้นเป็นวัดที่มีไตรกลีเซอไรด์กรัมทดสอบวาโก ( Wako บริสุทธิ์อุตสาหกรรมเคมี , โอซาก้า , ญี่ปุ่น หนึ่งหน่วยกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปส หมายถึง ปริมาณของเอนไซม์ที่ปล่อยออกมา1 pmol รอลต่อนาทีในการทดสอบ ( ความจำเพาะกรดไขมันที่ออกในชั้น chcl3 ยังวัดด้วยเป็น nefa c-test Wako ( Wako โอซาก้า เพียว เคมีอุตสาหกรรมญี่ปุ่น )วัดความเข้มข้นของโปรตีนโดยวิธีของแบรดฟอร์ด7 .) การใช้โปรตีน ( Kit ( ไบโอแลป ริชมอนด์ , RAD ,California , USA ) กับอัลบูมินเป็นมาตรฐานสำหรับการผลิตไลเปส , F . . ym-30 เลี้ยงในอาหารที่มี monoolein polypeptone 1% 1% , 0.5% ,nan03 0.25 % k2hp04 0.125 % MgSO " 7h20 0.005 % ,fes04 " 7h20 , และสารสกัดจากยีสต์ 1.0% ( pH 6.0 ) การเพาะปลูกในขวดขนาด 30 ลิตร ได้ 20 ลิตร 30 ° C กลาง72 H ด้วยการกวน 300 รอบต่อนาทีและอากาศที่ 20 ลิตรต่อนาทีการ mycellia ออกโดยการกรองและการกรอง คือเข้มข้นด้วยน้ำธรรมชาติ . วิธีการที่ใช้ในการชำระเอนไซม์และผลลัพธ์ที่สรุปไว้ในโต๊ะผมทั้งหมด บำบัดน้ำเสีย