Purification of EGC Metabolites. Th

Purification of EGC Metabolites. The metabolite formation from
EGC by rat intestinal flora was performed according to the procedure as
described above. After incubation for 24, 48, and 96 h, 50 mL each samples
of the incubation mixture were taken out in the anaerobic glovebox. Each
sample was centrifuged at 15000g for 20 min at 4
C to remove bacterial
cells. The resulting supernatant was adjusted pH to about 3.5 with 5 M
HCl and then extracted three times with equal volume of ethyl acetate. The
ethyl acetate fraction was evaporated to dryness under reduced pressure.
The residue obtained from the 24-h incubation mixture was used for the
isolation of 3 and 8, and the residue from the 48-h mixture for 4. Similarly,
the isolation of 5 to 7 was performed with the 96-h incubation mixture.
Each residue obtained from the 24- and 48-h incubation mixtures were
dissolved in 3 mL of 5% aqueous methanol and the solution was subjected
to preparative HPLC for purification of 3, 4, and 8. Preparative HPLC was
performed with a 150 mm 20 mm i.d., 5 μm, Capcellpak C18 MG
column (Shiseido Co. Ltd., Tokyo, Japan) in a JASCO HPLC 800 series
system (JASCO, Tokyo, Japan). The column was eluted with a linear
gradient of solvent, starting with 10% (v/v) methanol aqueous solution
containing 0.5% (v/v) acetic acid and ending with 60% (v/v) aqueous
methanol containing 0.5% (v/v) acetic acid at a flow rate of 9.7 mL/min at
40
C. The elution pattern was monitored by measuring the absorbance at
270 nm. Each fraction containing metabolite was collected and evaporated
to dryness. The residue was dissolved in 5 mL of distilled water and then
concentrated to dryness. This procedure was repeated two more times to
remove acetic acid completely. The resultant residues were individually
dissolved in a small amount of distilled water and freeze-dried to obtain
metabolite 3 (17 mg), metabolite 4 (15 mg), and metabolite 8 (5 mg). For
the isolation of 5 to 7, the ethyl acetate fraction obtained from the 96-h
incubation mixture was extracted with the one-fifth volume of 20 mM
aqueous Na2CO3 solution. In this process, 6 remained in the organic layer,
and 5 and 7 were distributed in the aqueous layer. Metabolite 6 in the ethyl

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำให้บริสุทธิ์ของ EGC Metabolites การก่อตัวของ metabolite จากEGC โดยพืชลำไส้หนูทำตามขั้นตอนเป็นอธิบายไว้ข้างต้น หลังจากฟักตัวใน 24, 48 และ 96 h, 50 mL แต่ละตัวอย่างของผสมบ่มได้นำออกใน glovebox ไม่ใช้ออกซิเจน แต่ละตัวอย่างที่ centrifuged ที่ 15000g สำหรับ 20 นาทีที่ 4 C เอาแบคทีเรียเซลล์ Supernatant ได้ถูกปรับปรุง pH ประมาณ 3.5 เมตร 5HCl และสกัดสามครั้งแล้ว ด้วยเอทิล acetate ปริมาณเท่ากัน ที่เศษเอทิล acetate หายไปกับความแห้งกร้านภายใต้ความดันที่ลดลงสารตกค้างที่ได้จากการผสมบ่ม 24 h ใช้สำหรับการแยก 3 8 และสารตกค้างจากผสม 48 h 4 ในทำนองเดียวกันแยก 5-7 ที่ดำเนินการกับส่วนผสมบ่ม 96 hมีสารตกค้างแต่ละที่ได้จากส่วนผสมบ่ม 24 - และ 48-hละลายใน 3 มล.ของ 5% อควีเมทานอล และการแก้ปัญหาถูกต้องการ HPLC preparative สำหรับฟอก 3, 4 และ 8 Preparative HPLC ได้ดำเนินการโดย มีประชาชนเป็น 150 มม. 20 มม. 5 μm, Capcellpak C18 MGคอลัมน์ (อาชิเซโด้ จำกัด โตเกียว ญี่ปุ่น) ในชุด JASCO HPLC 800ระบบ (JASCO โตเกียว ญี่ปุ่น) คอลัมน์ถูก eluted กับแบบเชิงเส้นการไล่ระดับของตัวทำละลาย การเริ่มต้น ด้วยเมทานอล 10% (v/v) ละลายประกอบด้วยกรดอะซิติก 0.5% (v/v) และลงท้าย ด้วย 60% (v/v) อควีประกอบด้วยกรดอะซิติก 0.5% (v/v) ที่อัตราการไหลของ 9.7 mL/min ที่เมทานอลค. 40 รูปแบบการ elution ถูกตรวจสอบ โดยการวัด absorbance ที่270 nm ทุกฝ่ายประกอบด้วย metabolite รวบรวม และหายไปเพื่อความแห้งกร้าน สารตกค้างถูกละลายใน 5 mL ของน้ำกลั่นแล้วเข้มข้นเพื่อความแห้งกร้าน ขั้นตอนนี้มีซ้ำ 2 ครั้งเพื่อเอากรดน้ำส้มทั้งหมด ตกผลแก่ได้ละละลายในน้ำกลั่นจำนวนเล็กน้อย และอบแห้งรับmetabolite 3 (17 มิลลิกรัม), metabolite 4 (15 mg), และ metabolite (5 มิลลิกรัม) 8 สำหรับแยกที่ไป 5 7 เศษเอทิล acetate ได้จาก 96 hคณะทันตแพทยศาสตร์ส่วนผสมถูกสกัด ด้วยปริมาณหนึ่งห้า 20 มม.ละลาย Na2CO3 ในกระบวนการนี้ 6 ยังคงอยู่ในชั้นอินทรีย์และ 5 และ 7 ได้กระจายในชั้นอควี Metabolite 6 ในเอทิล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทำให้บริสุทธิ์ของสาร EGC การก่อ metabolite จาก
EGC โดยลำไส้เล็กของหนูที่ได้ดำเนินการตามขั้นตอนตามที่
อธิบายไว้ข้างต้น หลังจากการบ่มเป็นเวลา 24, 48, และ 96 ชั่วโมง, 50 มลตัวอย่างแต่ละ
ส่วนผสมบ่มถูกนำออกมาในกล่องเก็บของแบบไม่ใช้ออกซิเจน แต่ละ
ตัวอย่างถูกหมุนเหวี่ยงที่ 15000g เป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเพื่อลบแบคทีเรีย
เซลล์ สารละลายที่เกิดมีการปรับค่าพีเอชประมาณ 3.5 กับ 5 M
HCl แล้วสกัดสามครั้งมีปริมาณที่เท่ากันของเอทิลอะซีเต
ส่วนเอทิลอะซิเตถูกระเหยจนแห้งภายใต้ความกดดันที่ลดลง.
สารตกค้างที่ได้รับจากส่วนผสมบ่ม 24 ชั่วโมงที่ใช้สำหรับ
การแยก 3 และ 8 และสารตกค้างจากส่วนผสม 48 ชั่วโมงสำหรับ 4. ในทำนองเดียวกัน,
การแยกจาก 5 7 ได้ดำเนินการกับส่วนผสมบ่ม 96 ชั่วโมง.
ที่เหลือในแต่ละที่ได้รับจาก 24 และ 48 ชั่วโมงผสมบ่มถูก
กลืนหายไปใน 3 มิลลิลิตร 5% เมทานอลในน้ำและวิธีการแก้ปัญหาที่ถูกยัดเยียด
to HPLC เตรียมสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ 3, 4, และ 8. เตรียม HPLC ได้รับการ
ดำเนินการกับ 150 มิลลิเมตร 20 มิลลิเมตร id, 5 ไมโครเมตร Capcellpak C18 MG
คอลัมน์ (ชิเซโด้ จำกัด , กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ใน JASCO HPLC 800 ชุด
ระบบ (JASCO, โตเกียว, ญี่ปุ่น) คอลัมน์ถูกชะด้วยเชิงเส้น
ลาดของตัวทำละลายเริ่มต้นด้วย 10% (v / v) สารละลายเมทานอล
ที่มี 0.5% (v / v) กรดอะซิติกและลงท้ายด้วย 60% (v / v) น้ำ
เมทานอลที่มี 0.5% (V / v) และกรดอะซิติกที่อัตราการไหล 9.7 มิลลิลิตร / นาทีที่
40 องศาเซลเซียส รูปแบบชะได้รับการตรวจสอบโดยการวัดการดูดกลืนแสงที่
270 นาโนเมตร ส่วนที่มี metabolite แต่ละคนได้เก็บรวบรวมและระเหย
จนแห้ง ที่เหลือก็เลือนหายไปใน 5 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นและจากนั้น
ความเข้มข้นเพื่อความแห้งกร้าน ขั้นตอนนี้ซ้ำอีกสองครั้งเพื่อ
เอากรดอะซิติกอย่างสมบูรณ์ ผลตกค้างถูกบุคคล
ที่ละลายในปริมาณเล็กน้อยของน้ำกลั่นและแห้งจะได้รับ
metabolite 3 (17 มิลลิกรัม) metabolite 4 (15 มิลลิกรัม) และเมตาบอไล 8 (5 มก.) สำหรับ
การแยก 5 ถึง 7 ส่วนเอทิลอะซิเตที่ได้รับจาก 96 ชั่วโมง
บ่มส่วนผสมเป็นสารสกัดที่มีปริมาณหนึ่งในห้าของ 20 มม
สารละลาย Na2CO3 ในขั้นตอนนี้ยังคงอยู่ใน 6 ชั้นอินทรีย์
และ 5 และ 7 มีการกระจายในชั้นน้ำ metabolite 6 ในเอทิล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ egc สาร . เพียงการก่อตัวจาก
egc โดยหนู intestinal ฟลอร่าก็ดำเนินการตามขั้นตอนตามที่
ที่อธิบายข้างต้น หลังจากบ่มเป็นเวลา 24 , 48 และ 96 ชั่วโมง , 50 ml แต่ละตัวอย่าง
ของส่วนผสมถูกบ่มใน glovebox แบบไม่ใช้ออกซิเจน แต่ละระดับที่ 15000g
ตัวอย่างสำหรับ 20 นาทีที่ 4
C เพื่อลบแบคทีเรีย
เซลล์นำผลคือปรับ pH 3.5 5 M
HCl แล้วสกัด 3 ครั้ง มีปริมาณเท่ากันของเอทิลอะซิเทต
ethyl acetate เศษส่วนคือระเหยแห้งภายใต้การลดความดัน
กากที่ได้จาก 24-h บ่มส่วนผสมใช้
แยก 3 และ 8 และสารตกค้างจากส่วนผสม 30 4 . โดย
แยกสารได้ 5 ถึง 7 แสดงกับ 96-h บ่มส่วนผสม .
แต่ละกากที่ได้จาก 24 - 30 ลิตรและผสมได้
3 มิลลิลิตร ละลายในสารละลายเมทานอลและโซลูชั่น 5% ภายใต้ปริมาณซูโครสเพื่อฟอก
= 3 , 4 , และ 8 ค่าดำเนินการด้วย HPLC คือ
150 มม. 20 มม. 5 ไอดี μ M , คอลัมน์ capcellpak c18 มก
( ชิเซโด้ จำกัด โตเกียวญี่ปุ่น ) ใน jasco HPLC 800 ชุด
ระบบ ( jasco , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) คอลัมน์คือตัวอย่าง ด้วยการไล่ระดับสีเส้น
ของตัวทำละลายที่เริ่มต้นด้วย 10 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) ส่วนสารละลาย
ที่มี 0.5% ( v / v ) กรดอะซิติกและลงท้ายด้วย 60 % ( v / v ) สารละลาย
เมทานอลที่มี 0.5% ( v / v ) กรดอะซิติกที่อัตราการไหล 5 มิลลิลิตร / นาทีที่ 40 องศาเซลเซียส (

รูปแบบถูกตรวจสอบโดยการวัดการดูดกลืนแสงที่
270 นาโนเมตรแต่ละส่วนที่มีอาหารถูกเก็บรวบรวมและระเหย
ให้ตายได้ ตกค้าง 5 มิลลิลิตร ละลายในน้ำกลั่นแล้ว
เข้มข้นแห้งกร้าน ขั้นตอนนี้ซ้ำอีก 2 ครั้ง

เอา กรดทั้งหมด ซึ่งเป็นสารพิษตกค้างจาก
ละลายใน จำนวนเล็ก ๆของน้ำกลั่นและแห้งเพื่อให้ได้
ไลท์ 3 ( 17 มิลลิกรัม )ระดับ 4 ( 15 มก. ) และ ระดับ 8 ( 5 มิลลิกรัม ) สำหรับ
แยก 5 ถึง 7 , เอทิลอะซิเตท เศษที่ได้จาก 96-h
บ่มส่วนผสมสารปริมาณหนึ่งในห้าของ 20 mm
สารละลาย Na2CO3 โซลูชั่น ในขั้นตอนนี้ , 6 อยู่ในชั้นอินทรีย์ ,
5 และ 7 มีการกระจายในชั้นน้ำ . ระดับ 6 ในเอทิล