RT-PCR analysis confirming presence

RT-PCR analysis confirming presence of human Lf
mRNA in plant cells



high quality recombinant protein as well as for quality
improvement of this important forage crop. As the
production of recombinant protein with high authenticity
is of significant importance for its application as
therapeutic agent as well as for achieving crop quality
improvement, we aimed obtaining full length Lf in alfalfa
plants. Our results have shown that transformation of
alfalfa with human Lf cDNA under control of the
35S CaMV promoter using Agrobacterium tumefciensmediated
gene transfer leads to production of recombinant
human Lf with molecular mass of approximately 80
kDa in leaf alfalfa extracts which corresponds to the size
of the native protein. Maximum expression level of the






recombinant human Lf, determined by ELISA assay, was
0.0047 % of TSP (clone 53). It is comparable to
previously reported expression levels in transgenic alfalfa
plants bearing a gene encoding the avian reovirus σC
protein under control of the 35S CaMV promoter (Huang
et al. 2006) and could be explained with the relative low
efficiency of this constitutive promoter in alfalfa
compared to other dicotyledoneus species (D’Aoust et al.
2004). Different expression of recombinant human Lf in
leaf tissue are reported in other systems – tobacco (0.1 -
0.8 % of TSP) (Zhang et al. 1998, Salmon et al. 1998)
and potato (0.01 - 0.1 % of TSP) (Chong and Langridge

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

RT-PCR วิเคราะห์ยืนยันสถานะของมนุษย์ LfmRNA ในเซลล์พืชrecombinant โปรตีนสูงเช่นสำหรับคุณภาพการปรับปรุงนี้พืชอาหารสัตว์ที่สำคัญ เป็นการการผลิต recombinant โปรตีนมีความถูกต้องสูงเป็นของสำคัญของโปรแกรมประยุกต์รักษาตัวแทนเช่นสำหรับบรรลุคุณภาพพืชปรับปรุง เรามุ่งเน้นรับเต็มความยาว Lf ใน alfalfaรดน้ำต้นไม้ ผลของเราได้แสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงของalfalfa กับ cDNA Lf มนุษย์ภายใต้การควบคุมของการโปรโมเตอร์ CaMV 35S ใช้อโกรแบคทีเรียม tumefciensmediatedโอนย้ายยีนเป้าหมายการผลิตของวททชLf มนุษย์ มีมวลโมเลกุลประมาณ 80kDa ในสารสกัดจากใบ alfalfa ซึ่งสอดคล้องกับขนาดโปรตีนดั้งเดิม ระดับสูงสุดของนิพจน์Lf มนุษย์ recombinant ตามที่ทดสอบ ELISA ถูก0.0047% ของช้อนชา (โคลน 53) จึงเทียบได้กับก่อนหน้านี้ รายงานระดับนิพจน์ใน alfalfa ถั่วเหลืองพืชยีนที่เข้า σC reovirus นกแบริ่งโปรตีนภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ที่ CaMV 35S (หวงร้อยเอ็ด al. 2006) และสามารถอธิบายกับต่ำสุดสัมพัทธ์ประสิทธิภาพของโปรโมเตอร์นี้ขึ้นใน alfalfaเปรียบเทียบกับพันธุ์อื่น ๆ dicotyledoneus (D'Aoust et al2004) ค่าแตกต่างกันของ Lf recombinant มนุษย์ในรายงานในระบบอื่น ๆ เนื้อเยื่อใบยาสูบ (0.1 -0.8% ของช้อนชา) (Zhang et al. 1998 ปลาแซลมอนและ al. ปี 1998)และมันฝรั่ง (0.01 - 0.1% ของช้อนชา) (ช่องและ Langridge

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ RT-PCR ยืนยันการปรากฏตัวของมนุษย์ Lf
mRNA ในเซลล์พืชที่มีคุณภาพสูงโปรตีนเช่นเดียวกับคุณภาพการปรับปรุงของพืชอาหารสัตว์ที่สำคัญนี้ ในฐานะที่เป็นการผลิตของโปรตีนที่มีความถูกต้องสูงมีความสำคัญอย่างมีนัยสำคัญสำหรับการประยุกต์ใช้ในฐานะที่เป็นตัวแทนในการรักษาเช่นเดียวกับการประสบความสำเร็จในการเพาะปลูกที่มีคุณภาพการปรับปรุงเรามุ่งรับLf ยาวเต็มรูปแบบในหญ้าชนิตพืช ผลของเราได้แสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงของว่านเดอร์ที่มียีนของมนุษย์ Lf ใต้การควบคุมของ 35S โปรโมเตอร์ CaMV ใช้ Agrobacterium tumefciensmediated การถ่ายโอนยีนจะนำไปสู่การผลิต recombinant Lf มนุษย์ที่มีมวลโมเลกุลประมาณ 80 กิโลดาลตันในใบสารสกัดจากหญ้าชนิตซึ่งสอดคล้องกับขนาดของพื้นเมืองโปรตีน. ระดับการแสดงออกสูงสุดของมนุษย์ recombinant Lf กำหนดโดยการทดสอบ ELISA เป็น 0.0047% ของ TSP (โคลน 53) มันก็เปรียบได้กับรายงานก่อนหน้านี้ระดับการแสดงออกในหญ้าชนิตพันธุ์พืชแบกยีนเข้ารหัสนกreovirus σCโปรตีนภายใต้การควบคุมของผู้ก่อการ35S CaMV (Huang et al. 2006) และสามารถอธิบายได้ด้วยในระดับต่ำเมื่อเทียบประสิทธิภาพของการก่อการส่วนประกอบในหญ้าชนิตเมื่อเทียบกับสายพันธุ์อื่น ๆ dicotyledoneus (D'Aoust et al. 2004) การแสดงออกที่แตกต่างกันของ Lf recombinant มนุษย์ในใบเนื้อเยื่อมีการรายงานในระบบอื่นๆ - ยาสูบ (0.1 - 0.8% ของ TSP) (Zhang et al, 1998, ปลาแซลมอน et al, 1998..) และมันฝรั่ง (0.01-0.1% ของ TSP) (ปากช่องและ Langridge

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เทคนิคการวิเคราะห์ยืนยันการแสดงตนของมนุษย์ ถ้ายีนในเซลล์พืช




รีคอมบิแนนท์โปรตีนคุณภาพสูง รวมทั้งการพัฒนาคุณภาพของพืชอาหารสัตว์ที่สำคัญนี้ . การผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนเป็น

แท้สูงด้วยเป็นสำคัญที่สำคัญสำหรับการเป็นตัวแทนการรักษาเช่นเดียวกับ

รับการปรับปรุงคุณภาพพืชเรามุ่งได้รับเต็มความยาวถ้าใน Alfalfa
พืช ผลของเราแสดงให้เห็นว่าการเปลี่ยนแปลงของยีนมนุษย์ ถ้าหญ้าด้วย

35s ภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์โดยใช้ Agrobacterium CAMV tumefciensmediated
ถ่ายยีนนำไปสู่การผลิตถ้ามนุษย์ recombinant
มีมวลโมเลกุลประมาณ 80 กิโล ใน สารสกัดจากใบหญ้า

ซึ่งสอดคล้องกับขนาดของโปรตีนพื้นเมืองระดับการแสดงออกสูงสุดของ






recombinant มนุษย์ถ้าพิจารณาโดยวิธี ELISA ,
0.0047 1 ช้อนชา ( โคลน ( 53 ) มันเทียบได้กับระดับการแสดงออกยีน
รายงานก่อนหน้านี้ใน Alfalfa
พืชนำยีนรีโอไวรัสนกσ C
โปรตีนภายใต้การควบคุมของโปรโมเตอร์ 35s CAMV ( Huang
et al . 2549 ) และสามารถอธิบายความสัมพันธ์กับ
น้อยประสิทธิภาพของการก่อตั้งนี้ในอัลฟัลฟา
เมื่อเทียบกับชนิดอื่น ๆ ( dicotyledoneus
d'aoust et al . 2004 ) การแสดงออกที่แตกต่างกันของโปรตีนในเนื้อเยื่อใบถ้ามนุษย์
รายงานในระบบอื่น ๆและใบยาสูบ ( 0.1 -
0.8% ของ TSP ) ( Zhang et al . 1998 ปลาแซลมอน et al . 1998 )
และมันฝรั่ง ( 0.01 - 0.1% ของช้อนชา ) ( ชง และ langridge