preparations are passed through a 4

preparations are passed through a 45 lm stainless steel or
nylon mesh screen to remove undigested cell clumps and
debris from broken cells. Protoplast-containing filtrates are
then centrifuged for 4–10 min at 100g in 15 ml calibrated
screw-top centrifuge tubes. The supernatant is removed
with a Pasteur pipette, and the pellet containing the protoplasts
is gently resuspended in 5 ml of a 25% sucrose
solution containing CPW nutrients (27.2 mg/l KH2PO4,
100 mg/l KNO3, 150 mg/l CaCl2, 250 mg/l MgSO4,
2.5 mg/l Fe2(SO4)3.6H2O, 0.16 mg/l KI, 0.00025 CuSO4,
pH 5.8) (Frearson et al. 1973). This is followed by slowly
pipetting 2 ml of a 13% mannitol solution (containing
CPW salts) directly on top of the sucrose layer (avoid
mixing). Centrifuge for 6 min at 100 g. Viable protoplasts
form a band at the interface between the sucrose and the
mannitol. Carefully remove the protoplasts from this
interface and resuspend them in the appropriate volume of
BH3 medium in preparation for somatic fusion.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เตรียมผ่าน lm สแตนเลส 45 หรือหน้าจอตาข่ายไนล่อนเพื่อลบเซลล์ undigested กระจุก และเศษจากเซลล์เสีย Protoplast ที่ประกอบด้วย filtrates อยู่centrifuged แล้ว สำหรับ 4 – 10 นาทีที่ 100 กรัมใน 15 ml ปรับเทียบเครื่องหมุนเหวี่ยงสกรูด้านบนท่อ Supernatant ถูกเอาออกเปตต์ระดับ และเม็ดที่ประกอบด้วยการโปเบา ๆ resuspended ใน 5 ml ของซูโครส 25%โซลูชันที่ประกอบด้วยสารอาหาร CPW (27.2 mg/l KH2PO4100 mg/l KNO3, CaCl2 150 mg/l, MgSO4 250 mg/l2.5 mg/l Fe2 (SO4) 3.6H2O, 0.16 mg/l กี่ 0.00025 CuSO4pH 5.8) (Frearson et al. 1973) นี้ตามด้วยช้าpipetting 2 ml ของโซลูชัน mannitol 13% (ประกอบด้วยด้านบนด้วย CPW เกลือ) ของชั้นซูโครส (หลีกเลี่ยงผสม) เครื่องหมุนเหวี่ยงใน 6 นาทีที่ 100 กรัมโปได้ฟอร์มวงที่อินเทอร์เฟซระหว่างซูโครสและmannitol เอาโปที่จากนี้อย่างระมัดระวังอินเทอร์เฟซ และ resuspend พวกเขาในระดับที่เหมาะสมกลาง BH3 เตรียมพร้อมสำหรับการฟิวชั่น somatic

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเตรียมการจะผ่านสแตนเลส LM 45 หรือ
หน้าจอตาข่ายไนลอนที่จะเอากอเซลล์ไม่ได้แยกแยะและ
เศษซากจากเซลล์หัก filtrates โปรโตพลาที่มีกำลัง
ปั่นแล้วสำหรับ 4-10 นาทีที่ 100 กรัมใน 15 มลสอบเทียบ
หลอด centrifuge สกรูบน สารละลายจะถูกลบออก
ด้วยปิเปตปาสเตอร์และเม็ดมี protoplasts
เป็น resuspended เบา ๆ ใน 5 มิลลิลิตรน้ำตาลซูโครส 25%
วิธีการแก้ปัญหาที่มีสารอาหาร CPW (27.2 มิลลิกรัม / ลิตร KH2PO4,
100 mg / l KNO3 150 mg / l CaCl2, 250 mg / l MgSO4,
2.5 mg / l Fe2 (SO4) 3.6H2O 0.16 mg / l KI, 0.00025 CuSO4,
ค่า pH 5.8) (Frearson et al. 1973) นี้ตามด้วยช้า
ปิเปต 2 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาแมนนิทอล 13% (ที่มี
เกลือ CPW) ตรงด้านบนของชั้นซูโครส (หลีกเลี่ยงการ
ผสม) ปั่นแยก 6 นาทีที่ 100 กรัม ทำงานได้ protoplasts
รูปแบบวงดนตรีที่เชื่อมต่อระหว่างซูโครสและ
แมนนิทอล อย่างเอา protoplasts จากนี้
อินเตอร์เฟซและแขวนลอยพวกเขาในปริมาณที่เหมาะสมของ
สื่อ BH3 ในการเตรียมตัวสำหรับการหลอมร่างกาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเตรียมผ่าน 45 โดย เหล็กสแตนเลสหรือ
หน้าจอตาข่ายไนลอนเพื่อเอาเศษเซลล์และ clumps undigested
จากเซลล์แตก โปรโตพลาสต์ที่ประกอบด้วยสารละลายเป็น
แล้วระดับ 4 – 10 นาทีที่ 100 กรัมใน 15 ml ปรับสกรูด้านบน
centrifuge หลอด ที่นำออก
กับปาสเตอร์เปต และเม็ดที่มีเอนไซม์
มันเบา ๆ resuspended 5 ml ของ 25% ซูโครส
สารละลายที่มีธาตุอาหารแวกซ์ ( 27.2 mg / l kh2po4
100 มก. / ลิตร , kno3 150 มก. / ล. ผลิต 250 มก. / ล. MgSO4 ใ
2.5 mg / l , fe2 ( ปา ) 3.6h2o 0.16 mg / l กี 0.00025 CuSO4 ,
อ 5.8 ) ( frearson et al . 1973 ) นี้ตามด้วย pipetting ช้าๆ
2 มิลลิลิตรของสารละลาย mannitol 13% ( ประกอบด้วย
เกลือแวกซ์ ) ตรงด้านบนของซูโครส ชั้น ( หลีกเลี่ยง
ผสม )เพื่อให้ 6 นาทีที่ 100 กรัม ได้โปรโตพลาสต์
ฟอร์มวงดนตรีที่รอยต่อระหว่างซูโครสและ
5 . อย่างเอาโปรโตพลาสต์จากอินเตอร์เฟซนี้
resuspend พวกเขาและในปริมาณที่เหมาะสมของ
bh3 ขนาดกลางในการเตรียมการสำหรับโซมาฟิวชั่น