2.2. Growth media and starter cultu

2.2. Growth media and starter culture preparation
Starter cultures of D. bruxellensisstrains were prepared by transferring multiple colonies from YPD agar into 5 ml YPD broth in sterile 14 ml tubes, and then incubating at 27 C for 48 h. These cultures were used to inoculate either yeast nitrogen base (YNB, Difco) (yeast nitrogen base, 67 g/l; glucose, 20 g/l; pH 3.5) or YPD-ethanol adaptation media containing 6% (v/v)ethanol, at5 10 6 cells/ml according to experimental requirements. YNB or YPD-ethanol adaptation cultures (100 ml in 250 ml shake fl ask) were incubated at 27 C with agitation (150 rpm) until a density of 1 10 8 cells/ml was achieved according to duplicate haemocytometer counts.Chemically de fi ned wine medium (WM) was prepared by fermentation of chemically de fi ned grape juice medium (McBryde et al., 2006) with a wine yeastPDM as described in Harris et al.(2008) Finished wine was adjusted to 10% (v/v) ethanol after concentration was determined using an Anton Paar Alcolyzer according to the manufacturer s instructions and pH modi fi ed to 3.8 using 10 M NaOH. Residual sugar concentration was determined by glucose-fructose enzymatic assay (Boehringer Mannheim), and then adjusted to 2.5 g/l glucose and 2.5 g/l fructose. To ensure de fi ciency problems were avoided, vitamins were also added(Harris et al., 2008). Complete WM was sterilized byfi ltration(0.22mm, Millipore)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2 การเจริญเติบโตของสื่อและ starter วัฒนธรรมเตรียม
วัฒนธรรม Starter ของ D. bruxellensisstrains ได้เตรียมถ่ายโอนหลายอาณานิคมจาก YPD agar ในซุป YPD 5 ml ในหลอด 14 มล.ผ่านการฆ่าเชื้อ และ incubating แล้ว ที่ 27 C สำหรับ 48 h วัฒนธรรมเหล่านี้ถูกใช้ในการฉีดทั้งยีสต์ไนโตรเจนพื้นฐาน (YNB, Difco) (ยีสต์ไนโตรเจนพื้นฐาน 67 g/l กลูโคส 20 g/l; pH 35) หรือเอทานอล YPD ปรับสื่อประกอบด้วย 6% (v/v) เอทานอล at5 10 6 เซลล์/มล.ตามความต้องการทดลอง YNB หรือเอทานอล YPD ปรับวัฒนธรรม (100 มลใน 250 ml ปั่น fl ถาม) ได้ incubated ที่ 27 C มีอาการกังวลต่อ (150 รอบต่อนาที) จนกระทั่งความหนาแน่นของ 8 10 1 สำเร็จตาม haemocytometer ซ้ำจำนวนเซลล์/มล.สารเคมีเด fi เน็ดไวน์กลาง (WM) ถูกเตรียม โดยการหมักของสารเคมีเดสายปานกลาง (McBryde และ al., 2006) ด้วย yeastPDM ไวน์เป็นน้ำองุ่นโดยอธิบายในห้องไวน์เสร็จ al.(2008) ถูกปรับปรุงให้เอทานอล 10% (v/v) หลังจากกำหนดความเข้มข้นโดยใช้การ Alcolyzer Paar แอนทอนตามผู้ผลิตตามคำสั่งและค่า pH modi ไร้สายร้อยเอ็ด ed ไป 3.8 ใช้ 10 M NaOH ความเข้มข้นของน้ำตาลที่เหลือถูกกำหนด โดยเอนไซม์ในระบบทดสอบกลูโคสฟรักโทส (มันน์ไฮม์ Boehringer), และปรับ 2.5 g/l กลูโคสและฟรักโทส 2.5 g/l ให้เด fi ciency ปัญหาหลีกเลี่ยง วิตามินยังถูกเพิ่ม (ห้อง et al., 2008) WM สมบูรณ์ถูก sterilized byfi ltration ($ 0.22 มิลลิเมตร มาก)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 สื่อการเจริญเติบโตและเริ่มต้นการเตรียมวัฒนธรรม
วัฒนธรรมที่เริ่มต้นของ D. bruxellensisstrains ถูกจัดทำขึ้นโดยการถ่ายโอนอาณานิคมจากหลาย YPD agar เป็น 5 มล YPD น้ำซุปในการฆ่าเชื้อ 14 มิลลิลิตรหลอดและจากนั้นบ่มที่ 27 C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง วัฒนธรรมเหล่านี้ถูกนำมาใช้ในการฉีดวัคซีนทั้งยีสต์ไนโตรเจนฐาน (YNB, Difco) (ฐานยีสต์ไนโตรเจน 67 g / l; กลูโคส 20 กรัม / l; ค่า pH 3.5) หรือ YPD เอทานอลที่มีการปรับตัวสื่อ 6% (v / v) เอทานอล , AT5 10 6 เซลล์ / ml ตามความต้องการของการทดลอง YNB หรือ YPD เอทานอลปรับตัววัฒนธรรม (100 ml ใน 250 มลสั่นชั้นถาม) ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 27 C ที่มีความปั่นป่วน (150 รอบต่อนาที) จนความหนาแน่นของ 1 10 8 เซลล์ / ml ก็ประสบความสำเร็จตามที่ซ้ำกันสไลด์นับเม็ดเลือด counts.Chemically นิยาม กลางไวน์ (WM) ได้รับการจัดทำขึ้นโดยการหมักของสารเคมีไฟองุ่นเน็ดกลางน้ำ (McBryde et al., 2006) โดยมี yeastPDM ไวน์ตามที่อธิบายไว้ในแฮร์ริส et al. (2008) ไวน์สำเร็จรูปมีการปรับถึง 10% (v / v ) เอทานอลความเข้มข้นหลังจากที่ถูกกำหนดโดยใช้แอนตันพาร์ Alcolyzer ตามคำแนะนำของผู้ผลิตและค่า pH Modi ไฟเอ็ด 3.8 ใช้ 10 M NaOH เข้มข้นของน้ำตาลที่เหลือถูกกำหนดโดยกลูโคสฟรุกโตสเอนไซม์ทดสอบ (Boehringer Mannheim) แล้วปรับให้ 2.5 กรัม / ลิตรน้ำตาลกลูโคสและ 2.5 g / l ฟรุกโตส เพื่อให้แน่ใจว่าปัญหาเครือ ciency เลี่ยงวิตามินยังเพิ่ม (แฮร์ริส et al., 2008) ชุด WM ได้ผ่านการฆ่าเชื้อ byfi ltration (0.22mm, ค)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . สื่อการเจริญเติบโตและกล้าเชื้อเริ่มต้นการเตรียม
วัฒนธรรมของ D . bruxellensisstrains เตรียมย้ายหลายอาณานิคมจาก ypd วุ้น 5 ml ypd ซุปในหมัน 14 ml หลอด แล้วไข่ที่ 27 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง วัฒนธรรมเหล่านี้ถูกใช้ในการฉีดวัคซีนให้ยีสต์ ( ynb difco ฐานไนโตรเจน , ไนโตรเจน ( ยีสต์ ) 67 กรัม / ฐาน l ; กลูโคส 20 กรัมต่อลิตร ค่าความเป็นกรด 35 ) หรือ ypd เอทานอลปรับสื่อที่มี 6 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เอทานอล at5 10 6 เซลล์ / มล. ตามความต้องการทดลอง ynb หรือ ypd เอทานอลปรับเปลี่ยนวัฒนธรรม ( 100 ml 250 มล. เขย่า FL ถาม ) บ่มที่อุณหภูมิ 27 องศาเซลเซียสอัตราการกวน 150 รอบต่อนาที ) จนถึงความหนาแน่น 1 10 8 เซลล์ / มล. พบว่าตามซ้ำ haemocytometer นับเคมี เดอ ฟีเน็ตไวน์ขนาดกลาง ( WM ) เตรียมโดยกระบวนการทางเคมี เดอ ฟีเน็ตกลางน้ำองุ่น ( mcbryde et al . , 2006 ) กับไวน์ yeastpdm ตามที่อธิบายไว้ในแฮร์ริส et al . ( 2008 ) เสร็จเหล้าปรับ 10% ( v / v ) ความเข้มข้นของเอทานอล หลังจากตั้งใจใช้คู่ แอนทอน alcolyzer ตามที่ผู้ผลิตของคำแนะนำและ pH โมดิฟี ed 3.8 ใช้ 10 M NaOHที่เหลือ น้ำตาลกลูโคสฟรุคโตสความเข้มข้นถูกกำหนดโดยเอนไซม์ assay ( Boehringer Mannheim ) แล้วปรับ 2.5 กรัม / ลิตรและ 2.5 กรัมต่อลิตรและกลูโคสฟรักโทส . เพื่อให้แน่ใจว่าประสิทธิภาพ de Fi ปัญหาหลีกเลี่ยงวิตามินพบ ( แฮร์ริส et al . , 2008 ) WM ที่สมบูรณ์ถูกฆ่าเชื้อ byfi ltration ( 0.22mm มิลลิ , )