Materials and Methods 1. Plant mate

Materials and Methods
1. Plant materials Twenty-five local mulberry cultivars from Nakhonratchsima Sericulture Research Center were chosen. This included, 21 local, and 4 fruit accessions (Table 1). 2. Methods Genomic DNA was extracted from young leaves by the modified protocol of Doyle and Doyle (1990). Amplification was performed in a DNA Thermal cycler (Gene Amp PCR System 9600, Perkin Elmer) using 16 arbitrary different primers (Operon Technologies, USA) (Table 2) and followed the modified protocol of Williams et. al.(1990). The amplification products were size-analyzed by electrophoresis in 1.5 % (W/V) agarose gels using 1 X TBE buffer and visualized by ethidium bromide staining.
Three replications were performed for each genomic DNA sample. Consistent and reproducible polymorphic bands were binary scored i.e., 1 (band present) or 0 (band absent). Cluster analysis was conducted using NTsys-pc version 2.0 (Numerical Taxonomy System, Exeter Software. New York. USA). A pair wise similarity matrix was constructed by using Dice similarity index. Similarity amongst varieties was estimated by the unweighted pair-group method of arithmetic averages (UPGMA). The resulting clusters were expressed in a dendrogram. Initially, 243 decamer primers were screened with a Thai local mulberry. Of these, 67 primers which yielded distinct banding patterns of bright intensity, were chosen for a second round screening using different DNA samples of mulberry (Promboon’s unpublished data and Saksoong’s unpublished data). Finally, the PCR reactions were conducted using 16 primers with best bands.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ 1. โรงงานผลิตพันธุ์หม่อนภายในยี่สิบห้าจากศูนย์วิจัย Sericulture Nakhonratchsima ที่ถูกเลือก นี้รวม ผลไม้ท้องถิ่น และ 4 21 accessions (ตาราง 1) 2. วิธี Genomic DNA ที่สกัดจากใบอ่อน โดยโพรโทคอลแก้ไขดอยล์และดอยล์ (1990) ทำการขยายใน cycler ร้อนดีเอ็นเอ (ยีน Amp PCR ระบบ 9600 เพอร์เอลเมอ) ใช้ 16 กำหนดต่าง ๆ ไพรเมอร์ (Operon เทคโนโลยี สหรัฐอเมริกา) (ตารางที่ 2) และโพรโทคอลแก้ไขของวิลเลียมส์ร้อยเอ็ด al.(1990) ผลิตภัณฑ์ขยายได้ขนาดวิเคราะห์ โดย electrophoresis ในเจ agarose 1.5% (W/V) โดยใช้บัฟเฟอร์ X TBE 1 และ visualized โดยย้อมสีโบรไมด์ ethidium ระยะที่สามถูกทำสำหรับแต่ละตัวอย่างดีเอ็นเอ genomic สอดคล้อง และจำลองวง polymorphic มีฐานคะแนนเช่น 1 (วงปัจจุบัน) หรือ 0 (วงขาด) แบ่งวิธีการใช้ NTsys-พีซีรุ่น 2.0 (ระบบตัวเลขระบบ ซอฟต์แวร์เอ็กเซเตอร์ นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา) เมทริกซ์คล้ายฉลาดคู่ถูกสร้างขึ้น โดยใช้ดัชนีความคล้ายลูกเต๋า คล้ายหมู่พันธุ์ถูกประเมิน โดยกลุ่มคู่วิธี unweighted ค่าเฉลี่ยเลขคณิต (UPGMA) คลัสเตอร์ได้ถูกแสดงเป็น dendrogram เริ่มแรก ไพรเมอร์ decamer 243 ได้ฉายกับสาท้องถิ่นไทย เหล่านี้ ไพรเมอร์ 67 ซึ่งให้ผลแตกต่างแถบรูปแบบของความเข้มสว่าง ถูกเลือกสำหรับสองรอบคัดกรองโดยใช้ดีเอ็นเอตัวอย่างที่แตกต่างกันของใบหม่อน (พรหมบุญของยกเลิกประกาศข้อมูลและข้อมูลการประกาศของ Saksoong) สุดท้าย ปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินด้วยไพรเมอร์ที่ 16 วงที่ดีที่สุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
1 วัสดุพืชยี่สิบห้าพันธุ์หม่อนท้องถิ่นจาก Nakhonratchsima ศูนย์วิจัยหม่อนไหมได้รับการแต่งตั้ง นี้รวมถึง 21 ในท้องถิ่นและ 4 สายผลไม้ (ตารางที่ 1) 2. วิธีจีโนมดีเอ็นเอที่สกัดจากใบอ่อนโดยโปรโตคอลแก้ไขของดอยล์และดอยล์ (1990) ขยายได้ดำเนินการในดีเอ็นเอ Cycler ความร้อน (ยีนแอมป์ระบบ PCR 9600 Perkin Elmer) โดยใช้ไพรเมอร์ที่แตกต่างกัน 16 พล (operon Technologies, สหรัฐอเมริกา) (ตารางที่ 2) และตามโปรโตคอลแก้ไขของวิลเลียมส์และ al. (1990) ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการขยายขนาดการวิเคราะห์โดย electrophoresis 1.5% (w / v) เจล agarose ใช้บัฟเฟอร์ 1 X TBE และมองเห็นโดยการย้อมสี ethidium bromide.
สามซ้ำได้ดำเนินการในแต่ละตัวอย่างดีเอ็นเอจีโนม วงดนตรีที่ polymorphic สอดคล้องและถูกเลียนแบบไบนารีคะแนนคือ 1 (วงดนตรีปัจจุบัน) หรือ 0 (วงดนตรีหายไป) การวิเคราะห์กลุ่มได้รับการดำเนินการโดยใช้ NTsys พีซีรุ่น 2.0 (ตัวเลขระบบอนุกรมวิธานเอ็กซีเตอร์ซอฟท์แว. นิวยอร์ก USA.) เมทริกซ์คู่ความคล้ายคลึงกันที่ชาญฉลาดที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ดัชนีความคล้ายคลึงกันลูกเต๋า ความคล้ายคลึงกันในหมู่สายพันธุ์ที่ได้รับการประเมินโดยวิธีการจับคู่กลุ่มชั่งของค่าเฉลี่ยเลขคณิต (UPGMA) กลุ่มส่งผลให้มีการแสดงออกใน dendrogram ในขั้นต้น 243 decamer ไพรเมอร์ได้รับการคัดเลือกด้วยหม่อนท้องถิ่นไทย ของเหล่านี้ 67 ไพรเมอร์ที่ให้ผลที่แตกต่างกันรูปแบบการรวมตัวของความเข้มสดใสได้รับเลือกสำหรับการตรวจคัดกรองรอบที่สองโดยใช้ตัวอย่างดีเอ็นเอแตกต่างกันของใบหม่อน (พรหมบุญที่ไม่ได้เผยแพร่ข้อมูลและข้อมูลที่ไม่ถูกเผยแพร่ Saksoong ของ) ในที่สุดปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการโดยใช้ไพรเมอร์ 16 กับวงดนตรีที่ดีที่สุด