Preparation of spore suspensions: O

Preparation of spore suspensions: One milliliter of the
standard suspension (1.5×108
cfu/mL) was inoculated on
Sporulating Agar (Merck) by spread plate method. Then
the plates were incubated at 37ºC for seven days to get
more than 90% of the spores [12]. Sporulation process
was examined by using an optical microscope and stained
spores [13].
Free spores were visible at 3rd day, almost 90% of
bacteria were in spore phase at the 7th day after staining
the background, and vegetative form was seen no more
than 8-10.
At seventh day, firstly spores were collected in the
sterile Eppendorf by adding 3-5 mL of cooled (4ᵒC)
sterile distilled water to each plate, using speridil, and
then they were centrifuged at 4ºC, at 9000 rpm for 15
minutes [12]. This step was repeated twice to remove
impurities. Then, spores were suspended in 1 ml of sterile
water for 20 minutes in water bath 80ºC, for losing
vegetative forms. Finally, spores suspension was kept at
4ᵒC until treatment with the extracts.
Evaluation of sporocidal effects: The dried extract was
dissolved in 0.5% dimethylsulfoxide (DMSO, Merck) and
serially diluted to yield 100, 150, 200, 250 and 300
mg/mL.
Eppendorfs tubes containing spores were centrifuged at
4ᵒC, 9000 rmp for 15 min. Supernatant was removed, and
then, 1 mL of each dilution of the extract was added to
each Eppendorf tube. They were vortexed and finally
incubated at 37ºC for 24 h [13]. Spores were centrifuged
in 14500 rpm for 5 minutes, and to prevent the extract
effects, they were washed three times with sterile saline
[13].
Final spores were dissolved in 1 mL of normal saline
consequently; dilution series were set for colony counting.
Then 0.1 mL of dilutions, were inoculated to nutrient agar
by spread plate method to obtain single colony [13, 14].
In this study, formaldehyde was used as a positive and 5%
DMSO as a negative control. The data were analyzed
using SPSS-14 software. The selected threshold level for
statistical significance was p-Value less than 0.05.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เตรียมบริการสปอร์: milliliter หนึ่งของการระบบกันสะเทือนมาตรฐาน (1.5 × 108 cfu/mL) เป็น inoculated บนAgar sporulating (เมอร์ค) โดยวิธีกระจายแผ่น แล้วแผ่นก็ incubated ที่ 37ºC สำหรับเจ็ดวันจะได้รับกว่า 90% ของเพาะเฟิร์น [12] Sporulation กระบวนการตรวจสอบ โดยใช้กล้องจุลทรรศน์การแสง และสีเพาะเฟิร์น [13]ได้เห็นเพาะเฟิร์นฟรี 3 วัน เกือบ 90% ของแบคทีเรียที่อยู่ในระยะสปอร์วัน 7 หลังจากการย้อมสีพื้นหลัง และแบบฟอร์มผักเรื้อรังได้เห็นอีกกว่า 8-10วันที่เจ็ด ประการแรกเพาะเฟิร์นถูกรวบรวมไว้ในการกอซ Eppendorf เพิ่ม 3-5 mL ของเย็น ๆ (4ᵒC)แผ่นละ speridil ใช้น้ำกลั่นฆ่าเชื้อ และจากนั้น พวกเขาถูก centrifuged ที่ 4ºC ที่ 9000 rpm 15นาที [12] ขั้นตอนนี้เป็นซ้ำสองครั้งเพื่อเอาออกสิ่งสกปรก แล้ว เพาะเฟิร์นถูกหยุดชั่วคราวใน 1 ml ของกอซน้ำ 20 นาทีในการอาบน้ำ 80ºC การแพ้ฟอร์มผักเรื้อรัง สุดท้าย ระงับเพาะเฟิร์นถูกเก็บไว้ที่4ᵒC จนถึงรักษาด้วยสารสกัดการประเมินผล sporocidal: สารสกัดแห้งได้ละลายใน dimethylsulfoxide 0.5% (DMSO บริษัทเมอร์ค) และserially diluted กับ 100, 150, 200, 250 และ 300mg/mLท่อ Eppendorfs ประกอบด้วยเพาะเฟิร์นถูก centrifuged ที่ลบออก 4ᵒC, rmp 9000 สำหรับ 15 นาที Supernatant และ, 1 mL ของแต่ละเจือจางสารสกัดถูกเพิ่มเข้าไปหลอดละ Eppendorf พวก vortexed และสุดท้ายincubated ที่ 37ºC ใน 24 ชม [13] มี centrifuged เพาะเฟิร์นใน 14500 รอบต่อนาที 5 นาที และ เพื่อป้องกันการดึงข้อมูลผล พวกเขาถูกล้างสามครั้งกับกอซ saline[13]สุดท้ายเพาะเฟิร์นถูกละลายใน 1 mL ของน้ำเกลือปกติดังนั้น ชุดเจือจางได้ตั้งค่าสำหรับการตรวจนับโคโลนีแล้ว ก็ inoculated 0.1 mL ของ dilutions กับ agar ธาตุอาหารโดยวิธีจานมาเพื่อให้ได้โคโลนีเดี่ยว [13, 14]ในการศึกษานี้ ใช้ฟอร์มาลดีไฮด์เป็นบวกและ 5%DMSO เป็นตัวควบคุมค่าลบ มีวิเคราะห์ข้อมูลใช้ซอฟต์แวร์โปรแกรม 14 ระดับขีดจำกัดที่เลือกนัยสำคัญทางสถิติมีค่า p น้อยกว่า 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเตรียมสารแขวนลอยสปอร์:
หนึ่งมิลลิลิตรของการระงับมาตรฐาน(1.5 × 108
โคโลนี / มิลลิลิตร) ได้รับเชื้อใน
Sporulating วุ้น (เมอร์ค) โดยวิธีการแพร่กระจายแผ่น แล้วแผ่นที่ถูกบ่มที่37ºCเจ็ดวันที่จะได้รับมากกว่า90% ของสปอร์ [12] กระบวนการสร้างสปอร์ได้รับการตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แสงและสีสปอร์[13]. สปอร์ฟรีได้มองเห็นได้ในวันที่ 3 เกือบ 90% ของเชื้อแบคทีเรียที่อยู่ในขั้นตอนการสร้างสปอร์ในวันที่7 หลังจากที่การย้อมสีพื้นหลังและรูปแบบของพืชที่ถูกมองว่าไม่มีอะไรมากไปกว่า8-10. ในวันที่เจ็ดแรกสปอร์ที่ถูกรวบรวมไว้ในการฆ่าเชื้อโดยการเพิ่ม Eppendorf 3-5 มิลลิลิตรเย็น (4ᵒC) น้ำกลั่นปลอดเชื้อแต่ละจานจะใช้ speridil และแล้วพวกเขาก็ถูกหมุนเหวี่ยงที่4ºCที่9000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที [12] ขั้นตอนนี้ซ้ำสองครั้งเพื่อเอาสิ่งสกปรก จากนั้นสปอร์ที่ถูกระงับใน 1 มิลลิลิตรผ่านการฆ่าเชื้อในน้ำเป็นเวลา20 นาทีใน80ºCอาบน้ำสำหรับการสูญเสียรูปแบบของพืช ในที่สุดการระงับสปอร์ได้รับการเก็บรักษาไว้ที่4ᵒCจนถึงการรักษาด้วยสารสกัด. ประเมินผลกระทบ sporocidal: สารสกัดแห้งละลายใน0.5% Dimethylsulfoxide (DMSO เมอร์ค) และปรับลดลำดับให้ผลผลิต100, 150, 200, 250 และ 300 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร . หลอด Eppendorfs ที่มีสปอร์ได้รับการหมุนเหวี่ยงที่4ᵒC, 9000 RMP นาน 15 นาที ใสจะถูกลบออกและแล้ว 1 มิลลิลิตรเจือจางของสารสกัดแต่ละถูกบันทึกอยู่ในแต่ละหลอดEppendorf พวกเขาได้รับการ vortex และในที่สุดก็บ่มที่37ºCเป็นเวลา24 ชั่วโมง [13] สปอร์ได้รับการหมุนเหวี่ยงใน 14,500 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีและเพื่อป้องกันไม่ให้สารสกัดจากผลกระทบที่พวกเขาถูกล้างสามครั้งด้วยน้ำเกลือปลอดเชื้อ[13]. สปอร์สุดท้ายถูกกลืนหายไปใน 1 มิลลิลิตรน้ำเกลือจึง; ชุดเจือจางได้รับการตั้งค่าสำหรับการนับอาณานิคม. แล้ว 0.1 มิลลิลิตรเจือจางได้รับเชื้อไปยังอาหารเลี้ยงเชื้อจากการแพร่กระจายวิธีจานที่จะได้รับอาณานิคมเดียว[13, 14]. ในการศึกษานี้ดีไฮด์ที่ใช้เป็นบวกและ 5% DMSO เป็นเชิงลบ ควบคุม. วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้โปรแกรม SPSS-14 ระดับเกณฑ์เลือกสำหรับนัยสำคัญทางสถิติคือ p-value น้อยกว่า 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเตรียมสปอร์แขวนลอย : หนึ่งมิลลิลิตรของ
ช่วงล่างมาตรฐาน ( 1.5 × 108 CFU / ml

) เป็นเชื้อที่ผลิตสปอร์ ( Merck ) โดยวิธีแผ่นกระจาย งั้น
จานถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 7 วันเพื่อรับº
มากกว่า 90% ของสปอร์ [ 12 ] กระบวนการการสร้างสปอร์
ถูกตรวจสอบโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบแสงและเปื้อน
สปอร์ [ 13 ] .
สปอร์ฟรีถูกมองเห็นได้ใน 3 วัน เกือบ 90% ของ
แบคทีเรียในระยะสปอร์ที่วันที่ 7 หลังจากการย้อมสี
พื้นหลังและรูปแบบลักษณะที่เห็นไม่มี

ที่ 7 กว่า 8-10 วันแรกสปอร์เก็บตัว
เป็นหมันเพนดอร์ฟ โดยเพิ่ม 3-5 มิลลิลิตรของเย็น ( 4 ᵒ C )
หมันน้ำแต่ละจาน ใช้ speridil และ
แล้วพวกระดับที่ 4 º C ที่ 9000 รอบต่อนาที 15
นาที [ 12 ] ขั้นตอนนี้ซ้ำ 2 ครั้งเพื่อลบ
การปลอม จากนั้น สปอร์ถูกระงับใน 1 มิลลิลิตรของน้ำหมัน
20 นาทีในน้ำร้อน 80 º C สำหรับการสูญเสีย
รูปผัก ในที่สุด สปอร์แขวนลอยถูกเก็บไว้ที่ᵒ
4 C จนถึงการรักษาด้วยสารสกัด
การประเมินผล sporocidal : แห้ง g
ละลาย 0.5 ไดเมทิลซัลฟอกไซด์ ( DMSO เมอร์ค ) และ
เป็นเจือจางให้ผลผลิต 100 , 150 , 200 , 250 และ 300

มิลลิกรัม / มิลลิลิตรeppendorfs หลอดที่มีสปอร์เป็นระดับที่ᵒ
4 C , 9000 rmp เป็นเวลา 15 นาที นำออกและ
แล้ว 1 มิลลิลิตร สารสกัดแต่ละการเพิ่ม

แต่ละหลอดเพนดอร์ฟ . พวกเขา vortexed และในที่สุด
บ่มที่ 37 ºเป็นเวลา 24 ชั่วโมง [ 13 ] อยู่ในระดับ 10 , 000 RPM สปอร์
5 นาที เพื่อป้องกันไม่ให้สารสกัดผล พวกเขาล้างสามครั้งกับหมันเค็ม

[ 13 ]ส่วนสุดท้ายที่ถูกละลายใน 1 มิลลิลิตร
น้ำเกลือเจือจางจากนั้น ชุดเป็นชุดสำหรับการนับอาณานิคม .
แล้ว 0.1 มล. เจือจางเป็นเชื้อ
NUMB3RS โดยวิธีกระจายเพื่อขอรับแผ่นเดียวอาณานิคม [ 13 , 14 ] .
ในการศึกษานี้ ใช้ถูกใช้เป็นบวก และ 5 %
DMSO เป็นชุดควบคุมลบ วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้โปรแกรม spss-14
. เลือกเกณฑ์ระดับ
นัยสำคัญทางสถิติ p-value น้อยกว่า 0.05