Alkylperoxyl radical-induced oxidat

Alkylperoxyl radical-induced oxidation of bovine serum albumin(BSA) was assayed as described elsewhere (Mayo et al., 2003)with some modifications. We prepared AAPH as a 500 mM stock solution, and heated the solution for 2 min at 37 C before it was added to samples. Specifically, BSA (1.2 mg/mL) was incubated with AAPH (500 mM) in the presence or absence of methanolic sample extracts in a shaking water bath at 37 C for 6 h. A protein sample without AAPH was used as the control. After treatment, protein samples were mixed with loading buffer (100 mM TriseHCl buffer(pH 6.8), 4% sodium dodecyl sulfate (SDS), 0.2% bromophenol blue(BPB), 20% glycerol, 2% b-mercaptoethanol) and heated at 100 C for 5 min. A 15-mL aliquot of each sample was separated by SDS-PAGE on 12% acrylamide gels. The gels were stained overnight with 0.1% Coomassie brilliant blue (CBB) R-250 and then washed extensively.The gels were analyzed using a ChemiDoc XRS gel documentation system (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). To determine the extent of protein damage, band intensity was estimated using Quantity One 4.6.2 software (Bio-Rad). The optical density of bands was estimated and standardized against that of the control group. The extent of protection against protein oxidation was calculated as follows

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Alkylperoxyl รัศมีเกิดออกซิเดชันของ albumin(BSA) เซรั่มวัวถูก assayed ดังที่อื่น (Mayo และ al., 2003) ด้วยการปรับเปลี่ยนบางอย่าง เราเตรียม AAPH เป็นโซลูชั่นหุ้น 500 มม. และความร้อนโซลูชั่นสำหรับ 2 นาทีที่ 37 C ก่อนที่จะถูกเพิ่มเข้าไปตัวอย่าง โดยเฉพาะ บีเอสเอ (1.2 mg/mL) เป็น incubated กับ AAPH (500 mM) ในสถานะ หรือการขาดงานของ methanolic อย่างสารสกัดในน้ำน้ำงก ๆ ที่ 37 C สำหรับ 6 h ตัวอย่างโปรตีน โดย AAPH ถูกใช้เป็นตัวควบคุม หลังการรักษา ตัวอย่างโปรตีนถูกผสมกับโหลดบัฟเฟอร์ (buffer(pH 6.8) TriseHCl 100 มม. 4% โซเดียมซัลเฟต dodecyl (SDS), blue(BPB) bromophenol 0.2% กลีเซอร 20%, 2% b-mercaptoethanol) และความร้อนที่ 100 C สำหรับ 5 นาที ส่วนลงตัว 15 mL ของแต่ละอย่างถูกคั่น ด้วย SDS หน้าบน 12% อะคริลาไมด์ เจได้สีค้างคืน 0.1% Coomassie brilliant บลู (CBB) R 250 และล้างอย่างกว้างขวาง เจได้วิเคราะห์โดยใช้ ChemiDoc XRS เจเอกสารประกอบระบบ (Bio Rad เฮอร์คิวลิส CA, USA) การกำหนดขอบเขตของความเสียหายของโปรตีน วงความเข้มได้ประมาณใช้ปริมาณหนึ่ง 4.6.2 ซอฟต์แวร์ (ไบ-Rad) ความหนาแน่นออปติคัลของวงถูกประเมิน และมาตรฐานเทียบกับกลุ่มควบคุมที่ ขอบเขตการป้องกันการเกิดออกซิเดชันของโปรตีนถูกคำนวณดังนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Alkylperoxyl การเกิดออกซิเดชันรุนแรงที่เกิดขึ้นของซีรั่มอัลบูมิวัว (BSA) ได้รับการวิเคราะห์ตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น (มายอ et al., 2003) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง เราเตรียม AAPH เป็นโซลูชั่นหุ้นมิลลิ 500 และการแก้ปัญหาความร้อนเป็นเวลา 2 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียสก่อนที่จะถูกบันทึกอยู่ในตัวอย่าง โดยเฉพาะบีเอสเอ (1.2 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ถูกบ่มกับ AAPH (500 มิลลิเมตร) การมีหรือไม่มีตัวอย่างของสารสกัดเมทานอลในอ่างน้ำสั่นที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 6 ชั่วโมง ตัวอย่างโปรตีนโดยไม่ต้อง AAPH ถูกใช้เป็นตัวควบคุม หลังจากการรักษาตัวอย่างโปรตีนผสมกับบัฟเฟอร์โหลด (100 บัฟเฟอร์มิลลิ TriseHCl (pH 6.8) โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต 4% (SDS) 0.2% bromophenol สีฟ้า (BPB), กลีเซอรีน 20%, 2% B-mercaptoethanol) และให้ความร้อนที่ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที aliquot 15 มิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่างแต่ละคนถูกแยกจากกันโดย SDS-PAGE ที่ 12% เจลริลาไมด์ เจลมีการย้อมค้างคืนกับ 0.1% Coomassie สดใสสีฟ้า (CBB) R-250 และเจลล้างแล้ว extensively.The วิเคราะห์โดยใช้ ChemiDoc XRS ระบบเอกสารเจล (Bio-Rad ดาว, CA, USA) การตรวจสอบขอบเขตของความเสียหายโปรตีนเข้มวงเป็นที่คาดกันโดยใช้จำนวนหนึ่ง 4.6.2 ซอฟแวร์ (Bio-Rad) ความหนาแน่นของแสงของวงดนตรีที่เป็นที่คาดกันและมาตรฐานต่อว่ากลุ่มควบคุม ขอบเขตของการป้องกันการเกิดออกซิเดชันโปรตีนที่คำนวณได้ดังต่อไปนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

alkylperoxyl รุนแรงเกิดออกซิเดชันของอัลบูมิน ( BSA ) ซีรั่มตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น ( Mayo et al . , 2003 ) มีการปรับเปลี่ยน เราเตรียม aaph เป็น 500 มม. หุ้นโซลูชั่น และอุ่นโซลูชั่นสำหรับ 2 นาทีที่ 37  C ก่อนที่จะถูกเพิ่มไปยังตัวอย่าง โดยเฉพาะ กลุ่ม 12 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) คือแยก aaph ( 500 มม. ) ในการแสดงตนหรือขาดสารสกัดเมทานอลของตัวอย่างในสั่นน้ำร้อนอุณหภูมิ 37  C เป็นเวลา 6 ชั่วโมง โปรตีนตัวอย่างโดยไม่ aaph ที่ใช้ในการควบคุม หลังการรักษา ตัวอย่างโปรตีนผสมโหลดบัฟเฟอร์ ( 100 มม. trisehcl บัฟเฟอร์ pH 6.8 ) 4 % โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) , โบรโมฟีน 0.2% สีฟ้า ( BPB ) 20 % กลีเซอรอล2 % b-mercaptoethanol ) และอุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที  15 ml ส่วนลงตัวของแต่ละตัวอย่างถูกแยกออกโดย SDS-PAGE ใน 12 % เจลอะคริลาไมด์ เจลใช้ย้อมค้างคืนกับ 0.1% เหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าสดใส ( cbb ) r-250 แล้วล้างอย่างกว้างขวาง เจล วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ chemidoc xrs เจลเอกสารระบบ ( ไบโอ ราด , Hercules , CA , USA ) เพื่อกำหนดขอบเขตของความเสียหายที่โปรตีนวงดนตรีเข้มซึ่งใช้ปริมาณหนึ่ง 4.6.2 ซอฟต์แวร์ ( ไบโอ ราด ) ความหนาแน่นของแถบแสงประมาณมาตรฐานกับที่ของกลุ่มควบคุม ขอบเขตของการป้องกันการเกิดออกซิเดชันของโปรตีนมีค่าดังนี้