C. elegans cultures from approximat

C. elegans cultures from approximately 150 10 cm diameter NGM
plates were collected and egg-prepped using hypochlorite bleach solution
to isolate eggs from gravid hermaphrodites. Eggs were allowed to
hatch overnight in M9 and a synchronized population of L1 larva was
transferred to liquid culture medium and allowed to grow at 20 °C
until the population reached the young adult stage. Worms were collected
and washed three times to generate an approximately 8 mL
dense pellet. For lipid droplet proteomics analysis, the pellet and all solutions
were spiked with protease inhibitor cocktail solution (Sigma
Aldrich P2714). Worms were manually chopped with razor blade tool
(10–12 new razor blades taped together and sterilized with ethanol)
on an ice cold glass plate until visually all the worms had been broken
open. The worm pellet was then dounce homogenized 40 plunges
with a tight fitting pestle. Pellet was spun at 200 ×g at 4 °C for 5 min
and then an equal volume of 1.08 M sucrose solution was added and
spun at 2000 g for 5 min to remove large debris. Supernatant was
transferred to a 13.2 mL thinwall ultraclear centrifuge tube (Beckman-
Coulter 344059) and layered with a gradient of 0.27 M sucrose,
0.135 M sucrose and Top solution buffer (25 mM Tris–HCl; 1 mM
EDTA; 1 mM EGTA; protease inhibitor cocktail). Spun in SW41 rotor
using a Beckman L8-70M ultracentrifuge at 35,000 rpm for 30 min at
4 °C. The top layer (white, cloudy) was transferred via a glass pipet to
a siliconized microcentrifuge tube and spun at 18,000 ×g for 10 min
and the bottom, aqueous layer was removed

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

C. elegans วัฒนธรรมจากประมาณ 150 10 ซมเส้นผ่าศูนย์กลาง NGMแผ่นถูกรวบรวม และไข่-prepped ใช้โซลูชันฟอกขาวไฮโปการแยกไข่จาก gravid hermaphrodites ไข่ที่ได้รับอนุญาตให้ขณะข้ามคืนใน M9 และประชากรหนอน L1 ให้ตรงกันได้โอนย้ายไปยังสื่อวัฒนธรรมของเหลว และสามารถเจริญเติบโตที่ 20 ° Cจนประชากรถึงขั้นผู้ใหญ่หนุ่มสาว หนอนถูกรวบรวมไว้และล้างครั้งที่ 3 เพื่อสร้างการประมาณ 8 mLเม็ดหนาแน่น การวิเคราะห์ไขมันหยดโปรตีโอมิกส์ เม็ดโซลูชันทั้งหมดมี spiked กับรติเอสเตอร์ค็อกเทลโซลูชัน (ซิกมาAldrich P2714) หนอนถูกสับ ด้วยมีดโกนใบมีดเครื่องมือด้วยตนเอง(10-12 ใบมีดโกนใหม่ฝากัน และ sterilized ด้วยเอทานอล)ในจานแก้วที่เย็นเป็นน้ำแข็ง จนเห็น ตัวหนอนได้เสียเปิด เม็ดหนอนได้ แล้ว dounce homogenized เป็นกลุ่ม 40 plungesมี pestle กระชับแน่นขึ้น เม็ดได้ที่ 200 × g ที่ 4 ° C สำหรับ 5 นาทีปั่นและได้เพิ่มปริมาณเป็นเท่าของซูโครส 1.08 กก M และปั่นที่ g 2000 สำหรับ 5 นาทีเอาเศษขยะขนาดใหญ่ Supernatant ถูกโอนไป thinwall มล 13.2 เครื่องหมุนเหวี่ยง ultraclear หลอด (Beckman-Coulter 344059) และชั้น ด้วยการไล่ระดับสีของซูโครส 0.27 M0.135 M ซูโครสและบัฟเฟอร์ของโซลูชันบนสุด (25 มม.ตรี – HCl; 1 mMEDTA มม. 1 EGTA รติเอสเตอร์ค็อกเทล) ปั่นในใบพัด SW41ใช้ ultracentrifuge Beckman L8 - 70M ที่ 35000 rpm 30 นาทีที่4 องศาเซลเซียส ชั้นบนสุด (สีขาว มีเมฆมาก) ถูกโอนย้ายผ่าน pipet แก้วการการ siliconized microcentrifuge หลอด และปั่นที่ 18000 × g สำหรับ 10 นาทีและด้านล่าง ชั้นอควีถูกเอาออก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

C. elegans วัฒนธรรมประมาณ 150 ซม. เส้นผ่าศูนย์กลาง 10 NGM แผ่นถูกเก็บรวบรวมและไข่เตี๊ยมใช้น้ำยาฟอกขาวไฮโปที่จะแยกไข่จากคิดดูตั้งครรภ์ ไข่ได้รับอนุญาตให้ฟักค้างคืนในแปลง M9 และประชากรตรงของตัวอ่อน L1 ถูกถ่ายโอนไปยังอาหารเลี้ยงเชื้อเหลวและได้รับอนุญาตที่จะเติบโตที่20 ° C จนประชากรถึงขั้นผู้ใหญ่ เวิร์มที่ถูกเก็บรวบรวมและล้างครั้งที่สามในการสร้างประมาณ 8 มิลลิลิตรเม็ดหนาแน่น สำหรับหยดวิเคราะห์โปรตีนไขมันเม็ดและการแก้ปัญหาทั้งหมดได้รับการถูกแทงด้วยน้ำย่อยยับยั้งการแก้ปัญหาค๊อกเทล(ซิกม่าดิชP2714) หนอนถูกสับด้วยตนเองด้วยเครื่องมือมีดโกนใบมีด(10-12 ใบมีดโกนใหม่บันทึกเทปด้วยกันและผ่านการฆ่าเชื้อด้วยเอทานอล) บนแผ่นกระจกน้ำแข็งเย็นจนสายตาหนอนทั้งหมดได้ถูกทำลายเปิด เม็ดหนอนก็หดหาย dounce 40 พุ่งกับสากกระชับแน่น เม็ดที่ได้ปั่นกรัม 200 × 4 ° C เป็นเวลา 5 นาทีและจากนั้นปริมาณเท่ากับ1.08 แก้ปัญหา M ซูโครสถูกบันทึกและปั่นที่2,000 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อขจัดเศษซากขนาดใหญ่ ใสถูกโอนไปยัง 13.2 มิลลิลิตรหลอด centrifuge thinwall UltraClear (Beckman- โคลเตอร์ 344059) และชั้นที่มีการไล่ระดับ 0.27 M ซูโครสที่0.135 M ซูโครสและบัฟเฟอร์แก้ปัญหายอดนิยม (25 มิลลิ Tris-HCl 1 มิลลิEDTA 1 มิลลิ EGTA; น้ำย่อย ค๊อกเทลยับยั้ง) เสาเข็มในโรเตอร์ SW41 ใช้เบคค์ L8-70M ultracentrifuge ที่ 35,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่4 ° C ชั้นบนสุด (สีขาวขุ่น) ถูกย้ายผ่านปิเปตแก้วหลอดไมโครsiliconized และหมุนตัวที่ 18,000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีและด้านล่าง, ชั้นน้ำจะถูกลบออก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

C . ถิ่นวัฒนธรรมจากประมาณ 150 ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 10 เซนติเมตร NGM
แผ่นจำนวนและไข่พร้อมใช้ไฮโปคลอไรต์สารฟอกขาว
เพื่อแยกไข่จากการตั้งครรภ์ hermaphrodites . ไข่ฟักให้

ค้างคืนใน M9 และตรงกัน ประชากรของหนอนคือ L1
โอนวัฒนธรรมอาหารเหลว และได้รับอนุญาตให้เติบโตอยู่ที่ 20 องศา C
จนกว่าประชากรถึงระยะผู้ใหญ่หนุ่มสาวหนอนใน
และล้างสามครั้งเพื่อสร้างประมาณ 8 ml
หนาเม็ด ให้ไขมันแตกตัว proteomics การวิเคราะห์ , เม็ดและโซลูชั่นทั้งหมด
เป็น C โปรตีเ นฮิบิเตอร์ค็อกเทลโซลูชั่น ( Sigma
ดิช p2714 ) หนอนได้ด้วยตนเองสับกับ
เครื่องมือใบมีด ( 10 – 12 ใหม่มีดโกนเทปด้วยกัน และฆ่าเชื้อด้วยแอลกอฮอล์ )
เมื่อเย็น จาน แก้ว จนสายตาเวิร์มทั้งหมดได้รับการหัก
เปิด หนอนเม็ดจากนั้นดาว์โฮโม 40 พุ่ง
ด้วยแน่นกระชับสาก เม็ดมาปั่นที่ 200 × g 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีโดย
แล้วปริมาณเท่ากับ 1.08 M sucrose และโซลูชั่นเพิ่ม
ปั่นที่ 2000 กรัม เป็นเวลา 5 นาที เพื่อเอาเศษใหญ่ น่านคือ
โอนไปยัง 13หลอด centrifuge ultraclear thinwall 2 ml ( Beckman Coulter -
344059 ) และชั้นด้วยการไล่ระดับของ 3 M sucrose ซูโครสและด้านบน
0.135 M สารละลายบัฟเฟอร์ ( ณ 25 มิลลิเมตร– HCl 1 mm
EDTA 1 มม. หน่วย ; ตัวยับยั้งโปรเทล ) ปั่นใน sw41 ใบพัด
ใช้เบค l8-70m Ultracentrifuge อยู่ที่ 35 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่
4 องศา ชั้นบน ( สีขาวขุ่น ) โอนผ่านแก้ว

ไปเปตเป็น siliconized หลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ และสานที่ 18000 × 10
กรัมมินและด้านล่างน้ำชั้นถูกถอดออก