concentration and volume in the low

concentration and volume in the lower phase. Cp and Vp represent
the protein concentration and volume in the lower phase.
2.4. Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis
(SDS-PAGE)
SDS-PAGE of the samples was performed according to the
method as reported by Laemmli [33] with slight modification. Protein
samples were loaded onto the electrophoresis gels, which
were composed of 5% stacking and 12% separating gels. The electric
current was 15 mA for the stacking gel and then 40 mA for the separating
gel. After electrophoresis, the gel was stained for 2–3 h with
staining solutions (0.05% (w/v) Coomassie Brilliant Blue R-250 in
45.4% (v/v) methanol, and 9.2% (v/v) acetic acid). The gel was then
destained (7.5% (v/v) acetic acid and 5.0% methanol).
3. Results and discussion
3.1. Optimization of the TPP
Ammonium sulfate and t-butanol concentration, temperature,
and pH were considered to be the critical parameters for the evaluation
of TPP. Therefore, it was necessary to optimize the conditions
for obtaining the maximum extraction efficiency.
Ammonium sulfate plays an important role in the TPP system,
which flocculates the protein to the surface of the aqueous solution
due to the salting-out effect. The influence of ammonium sulfate
was investigated in the mass range of 0.8–2.8 g (mass fraction of
11.78–33.37%). As shown in Fig. 1(a), the extraction efficiency of
protein increased with the increasing of salt, whereas no statistically
significant increase (Student’s t-test, p > 0.05) was observed
when the salt concentration was increased from 22.25% to 33.37%.
The maximum extraction efficiency of APS was obtained at a 26.35%
salt concentration, then it decreased with further increase of the
salt concentration. This could be explained by the hypothesis that
the stronger salting-out effect makes less free water available to
dissolve the APS, and ammonium sulfate flocculates the APS, leading
to its separation into the middle phase. In light of these results,
26.35% (w/w) ammonium sulfate was chosen for further studies.
Compared with other alcohols, such as n-butanol, isobutanol
and n-propanol, t-butanol has been widely considered to be the
best solvent in TPP, which can increase the buoyancy of the precipitated
protein by binding to it, resulting in its floatation above
the denser aqueous salt layer [16,34]. The influence of t-butanol
was investigated in the volume range of 1.0–6.0 mL (mass fraction
of 11.62–44.09%). As shown in Fig. 1(b), higher extraction efficiencies
of APS were obtained when a lower amount of t-butanol was
added. The reason is that more t-butanol can make APS flocculate
and enhance its buoyancy, leading to the partitioning of APS into
the middle phase. Therefore, the extraction efficiency decreased
with further increasing of t-butanol. The extraction efficiency of
protein did not increase significantly (Student’s t-test, p > 0.05)
with an increase of t-butanol concentration from 20.82% to 44.09%.
More t-butanol can enhance the buoyancy of the precipitated protein
making the protein more stable in the interface. Therefore,
the 20.82% (w/w) t-butanol concentration was more suitable for
simultaneous consideration of the extraction efficiency and cost.
Temperature also played an important role in TPP, and the effect
of temperature was investigated in the range of 25–45 ◦C. The
results in Fig. 1(c) showed thatthe lower temperature (below 35 ◦C)
was more suitable for the extraction of APS and protein. The mass
transfer velocity is raised, and more APS could dissolve into the
aqueous phase with increase in temperature. However, a higher
temperature will cause consumption of more energy. The maximal
extraction efficiency of protein was obtained at 30 ◦C as higher

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความเข้มข้นและปริมาตรในระยะต่ำ แสดงถึง cp และ Vpความเข้มข้นโปรตีนและปริมาณในระยะต่ำ2.4 polyacrylamide ซัลเฟตโซเดียม dodecyl เจ electrophoresis(หน้าองค์กร)SDS-หน้าของตัวอย่างได้ดำเนินการตามวิธีการรายงาน ด้วยการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย Laemmli [33] โปรตีนตัวอย่างถูกโหลดลงในเจ electrophoresis ซึ่งมีประกอบด้วย 5% ซ้อนและ 12% แยกเจ การไฟฟ้าปัจจุบันมี 15 mA สำหรับเจซ้อน แล้ว 40 mA สำหรับการแยกเจ หลังจาก electrophoresis เจมีสีสำหรับ 2 – 3 h ด้วยโซลูชั่น (0.05% (w/v) Coomassie Brilliant Blue R-250 ในการย้อมสี45.4% (v/v) เมทานอล และ 9.2% (v/v) กรดอะซิติก) เจได้แล้วdestained (7.5% (v/v) กรดอะซิติกและ 5.0% เมทานอล)3. ผลลัพธ์ และสนทนา3.1 การเพิ่มประสิทธิภาพของ TPPแอมโมเนียมซัลเฟตและบิวทานอ t สมาธิ อุณหภูมิและค่า pH ได้ถือเป็นพารามิเตอร์สำคัญในการประเมินของ TPP ดังนั้น ก็จำเป็นต้องปรับเงื่อนไขสำหรับการได้รับประสิทธิภาพสูงสุดสกัดแอมโมเนียมซัลเฟตมีบทบาทสำคัญในระบบ TPPซึ่ง flocculates โปรตีนกับพื้นผิวของการละลายเนื่องจากลักษณะพิเศษออกมารีซอลทิง อิทธิพลของแอมโมเนียมซัลเฟตถูกสอบสวนในช่วงมวล 0.8 – 2.8 g (รวมเศษ11.78-33.37%) ตามที่แสดงใน Fig. 1(a) ประสิทธิภาพการสกัดโปรตีนเพิ่มขึ้น ด้วยการเพิ่มขึ้นของเกลือ ในขณะที่ไม่มีทางสถิติมีสังเกตเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (ของ t-ทดสอบ p > 0.05)เมื่อความเข้มข้นเกลือถูกเพิ่มจาก 22.25% 33.37%ประสิทธิภาพการแยกสูงสุดของ APS กล่าวเป็น 26.35%เกลือความเข้มข้น แล้วมันลดกับต่อการเพิ่มขึ้นของการความเข้มข้นเกลือ นี้สามารถอธิบายได้ ด้วยทฤษฏีที่ผลออกมารีซอลทิงแข็งทำให้น้ำน้อยพร้อมใช้งานละลาย APS และแอมโมเนียซัลเฟต flocculates APS นำการแยกตัวในระยะกลาง เมื่อผลลัพธ์เหล่านี้26.35% (w/w) แอมโมเนียมซัลเฟตได้เลือกศึกษาเพิ่มเติมเมื่อเทียบกับ alcohols อื่น ๆ เช่นเอ็นบิวทานอ isobutanolและ n-อย่างไร propanol, t-บิวทานอได้รับกันอย่างแพร่หลายถือเป็นการตัวทำละลายที่ดีที่สุดใน TPP ซึ่งสามารถเพิ่มการพยุงของที่ precipitatedโปรตีน โดยผูกกับ ผลของ floatation ข้างต้นdenser อควีเกลือชั้น [16,34] อิทธิพลของบิวทานอ tถูกสอบสวนในช่วง 1.0-6.0 mL (เศษมวลปริมาตร11.62 – 44.09%) ตามที่แสดงใน Fig. 1(b) ประสิทธิภาพการสกัดสูงของ APS ได้รับเมื่อจำนวน t-บิวทานอล่างเพิ่ม เหตุผลคือ ว่า t-บิวทานอเพิ่มเติมทำให้ APS flocculateและเพิ่มการพยุง นำไปสู่การแบ่งพาร์ทิชันของ APS ในระยะกลาง ดังนั้น การลดลงของประสิทธิภาพการแยกมีการเพิ่มเติม ของบิวทานอ t ประสิทธิภาพการสกัดโปรตีนได้เพิ่มมาก (t-ทดสอบของนักเรียน p > 0.05)กับการเพิ่มขึ้นของความเข้มข้น t-บิวทานอจาก 20.82% 44.09%บิวทานอ t เพิ่มเติมสามารถเพิ่มพยุงโปรตีน precipitatedทำให้การโปรตีนมีเสถียรภาพมากขึ้นในส่วนติดต่อ ดังนั้นบิวทานอ t 20.82% (w/w) ความเข้มข้นเหมาะสำหรับพิจารณาพร้อมสกัดประสิทธิภาพและต้นทุนอุณหภูมิยังเล่นมีบทบาทสำคัญใน TPP และผลกระทบของอุณหภูมิถูกสอบสวนในช่วง 25 – 45 ◦C ที่ผล Fig. 1(c) พบว่าที่อุณหภูมิต่ำ (ต่ำกว่า 35 ◦C)ไม่เหมาะสำหรับสกัดของ APS และโปรตีน มวลเพิ่มความเร็วในการโอนย้าย และ APS มากสามารถละลายในตัวระยะอควีกับอุณหภูมิที่เพิ่มขึ้น อย่างไรก็ตาม ความสูงอุณหภูมิจะทำให้ปริมาณการใช้พลังงานมากขึ้น สูงสุดประสิทธิภาพในการสกัดโปรตีนได้รับที่ 30 ◦C เป็นสูง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความเข้มข้นและปริมาณในระยะที่ต่ำกว่า Cp และรองประธานฝ่ายตัวแทนของ
ความเข้มข้นของโปรตีนและปริมาณในระยะที่ต่ำกว่า.
2.4 โซเดียมข่าวคราวซัลเฟต polyacrylamide โดเดซิล
(SDS-PAGE)
SDS-PAGE ของกลุ่มตัวอย่างที่ได้ดำเนินการตาม
วิธีการตามที่รายงานโดย Laemmli [33] ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โปรตีน
ตัวอย่างที่ถูกโหลดไปยังเจลอิเล็กซึ่ง
ประกอบด้วยซ้อน 5% และ 12% แยกเจล ไฟฟ้า
ปัจจุบันอยู่ที่ 15 mA สำหรับเจลซ้อนแล้ว 40 mA สำหรับแยก
เจล หลังจาก electrophoresis เจลที่ถูกย้อมสีสำหรับ 2-3 ชั่วโมงกับ
การแก้ปัญหาการย้อมสี (0.05% (w / v) Coomassie สดใสสีฟ้า R-250 ใน
45.4% (v / v) เมทานอลและ 9.2% (v / v) กรดอะซิติก) . เจลจากนั้นก็
destained (7.5% (v / v) กรดอะซิติกและเมทานอล 5.0%).
3 และอภิปรายผล
3.1 การเพิ่มประสิทธิภาพของ TPP
แอมโมเนียมซัลเฟตและความเข้มข้นของเสื้อบิวทานออุณหภูมิ
และพีเอชได้รับการพิจารณาให้เป็นค่าพารามิเตอร์ที่สำคัญสำหรับการประเมินผล
ของ TPP ดังนั้นจึงเป็นสิ่งจำเป็นที่จะเพิ่มประสิทธิภาพเงื่อนไข
สำหรับการได้รับประสิทธิภาพการสกัดสูงสุด.
แอมโมเนียมซัลเฟตมีบทบาทสำคัญในระบบ TPP,
ซึ่ง flocculates โปรตีนกับพื้นผิวของสารละลาย
เนื่องจากผลเกลือออก อิทธิพลของแอมโมเนียมซัลเฟต
ถูกตรวจสอบในช่วงที่มวลของ 0.8-2.8 กรัม (ส่วนมวลของ
11.78-33.37%) ดังแสดงในรูป 1 (ก), ประสิทธิภาพการสกัด
โปรตีนที่เพิ่มขึ้นตามการเพิ่มขึ้นของเกลือในขณะที่ไม่มีสถิติที่
เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (นักเรียนของ t-test, p> 0.05) เป็นที่สังเกต
เมื่อความเข้มข้นของเกลือเพิ่มขึ้นจาก 22.25% เป็น 33.37%.
การสกัดสูงสุด ประสิทธิภาพของ APS ได้ที่ 26.35%
ความเข้มข้นของเกลือจากนั้นก็ลดลงกับการเพิ่มขึ้นต่อไปของ
ความเข้มข้นของเกลือ ซึ่งอาจจะอธิบายได้ด้วยสมมติฐานที่ว่า
ผลกระทบที่แข็งแกร่งเกลือออกทำให้น้ำฟรีน้อยพร้อมที่จะ
ละลาย APS และแอมโมเนียมซัลเฟต flocculates APS ที่นำ
ไปสู่การแยกเข้าไปในขั้นตอนกลาง ในแง่ของผลเหล่านี้
26.35% (w / W) แอมโมเนียมซัลเฟตเป็นทางเลือกสำหรับการศึกษาต่อไป.
เมื่อเทียบกับแอลกอฮอล์อื่น ๆ เช่น n-butanol, isobutanol
และ n โพร t-บิวทานอได้รับการพิจารณาอย่างกว้างขวางเพื่อเป็น
ตัวทำละลายที่ดีที่สุด ใน TPP ซึ่งสามารถเพิ่มการลอยตัวของตกตะกอน
โปรตีนโดยมีผลผูกพันกับมันผลในการลอยตัวเหนือ
ชั้นเกลือน้ำหนาแน่น [16,34] อิทธิพลของเสื้อบิวทานอ
ได้รับการตรวจสอบในช่วงที่ปริมาณ 1.0-6.0 มิลลิลิตร (ส่วนมวล
ของ 11.62-44.09%) ดังแสดงในรูป 1 (ข) ที่มีประสิทธิภาพสูงกว่าการสกัด
ของ APS ได้รับเมื่อเป็นจำนวนเงินที่ลดลงของเสื้อบิวทานอถูก
เพิ่ม เหตุผลก็คือเสื้อบิวทานออื่น ๆ อีกมากมายสามารถทำให้ APS จับตัวเป็นก้อน
และเพิ่มการลอยตัวของมันนำไปสู่การแบ่งพาร์ติชันของ APS เป็น
ระยะกลาง ดังนั้นประสิทธิภาพในการสกัดลดลง
ที่มีต่อการเพิ่มของเสื้อบิวทานอ ประสิทธิภาพการสกัด
โปรตีนไม่ได้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (นักเรียนของ t-test, p> 0.05)
กับการเพิ่มขึ้นของความเข้มข้นเสื้อบิวทานอจาก 20.82% เป็น 44.09%.
อื่น ๆ t-butanol สามารถเพิ่มการลอยตัวของโปรตีนตกตะกอน
ทำให้โปรตีนมากขึ้น มีเสถียรภาพในอินเตอร์เฟซ ดังนั้น
20.82% (w / W) ความเข้มข้นเสื้อบิวทานอมีความเหมาะสมมากขึ้นสำหรับ
การพิจารณาพร้อมกันของประสิทธิภาพการสกัดและค่าใช้จ่าย.
อุณหภูมิยังเล่นบทบาทสำคัญใน TPP และผลกระทบ
ของอุณหภูมิที่ถูกตรวจสอบในช่วง 25-45 ◦C
ผลในรูป 1 (ค) แสดงให้เห็น thatthe อุณหภูมิต่ำ (ต่ำกว่า 35 ◦C)
มีความเหมาะสมมากขึ้นสำหรับการสกัด APS และโปรตีน มวล
ความเร็วการถ่ายโอนจะเพิ่มขึ้นและอื่น ๆ APS จะละลายลงไปใน
เฟสน้ำกับการเพิ่มขึ้นของอุณหภูมิ แต่สูงกว่า
อุณหภูมิที่จะทำให้เกิดการใช้พลังงานมากขึ้น สูงสุด
ประสิทธิภาพในการสกัดโปรตีนที่ได้รับวันที่ 30 ◦Cเป็นที่สูงขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความเข้มข้นและปริมาณในขั้นตอนล่าง บริษัท ซีพี ออลล์ และ VP แทน
ระดับโปรตีนและปริมาณในขั้นตอนล่าง
2.4 . โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS-PAGE )

การแก้ปัญหาของตัวอย่างได้ปฏิบัติตาม
วิธีรายงานโดย laemmli [ 33 ] กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ตัวอย่างโปรตีน
ถูกโหลดลงบนเจลอิเลคโตรโฟรีซีส ซึ่ง
ประกอบด้วย 5 % ซ้อนและ 12% แบ่งเจล ไฟฟ้า
ปัจจุบันอายุ 15 มาสำหรับซ้อน เจลแล้ว 40 มาเพื่อแยก
เจล หลังจากอิเล็ก เจลที่ถูกย้อมสี 2 – 3 ชั่วโมง
staining โซลูชั่น ( 0.05% ( w / v ) เหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าสดใสใน
45.4 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เมทานอลและ 9.2 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดอะซิติก ) เจลแล้ว
destained ( 7.5 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) กรดอะซิติกและ 5.0 เปอร์เซ็นต์เมทานอล )
3ผลและการอภิปราย
3.1 . การเพิ่มประสิทธิภาพของ นายกรัฐมนตรี และ t-butanol
แอมโมเนียมซัลเฟตความเข้มข้น อุณหภูมิ และ pH
เป็นพารามิเตอร์ที่สำคัญสำหรับการประเมิน
ของสาธารณชน ดังนั้น จึงจำเป็นที่ต้องปรับเงื่อนไขสำหรับการได้รับประสิทธิภาพการสกัดสูงสุด
.
แอมโมเนียม ซัลเฟต มีบทบาทสำคัญในระบบ TPP
,ซึ่ง flocculates โปรตีนที่ผิวของสารละลาย
เนื่องจากการหมดผล อิทธิพลของปุ๋ยแอมโมเนียมซัลเฟต
ถูกสอบสวนในช่วงมวล 0.8 – 2.8 กรัม ( สัดส่วนมวลของ
11.78 – 33.37 % ) ดังแสดงในรูปที่ 1 ( a ) , ประสิทธิภาพการสกัด
โปรตีนเพิ่มขึ้นตามการเพิ่มขึ้นของเกลือ และคะแนนเฉลี่ยที่เพิ่มขึ้นของนักเรียน )
( P > 005 ) )
เมื่อความเข้มข้นเกลือเพิ่มขึ้นจากร้อยละ 22.25 33.37 %
สูงสุดประสิทธิภาพการสกัด โดยได้ ที่ความเข้มข้นของเกลือ 26.35 %
แล้วมันลดลง เพิ่มเพิ่มเติมของ
ความเข้มข้นเกลือ นี้สามารถอธิบายได้โดยสมมติฐานว่า
แข็งแกร่ง salting out ผลทำให้ฟรีน้อยกว่าน้ำใช้ได้

ให้ละลาย ,และแอมโมเนียมซัลเฟต flocculates APS า
แยกของมันลงในระยะกลาง ในแง่ของผลลัพธ์เหล่านี้
26.35 % ( w / w ) แอมโมเนียมซัลเฟตที่ถูกเลือกสำหรับการศึกษา .
เมื่อเทียบกับชนิดอื่น ๆเช่น n-butanol ไอโซบิวทานอล
t-butanol น โพรพาน , และ , ได้รับการพิจารณาอย่างกว้างขวางเป็นตัวทำละลายที่ดีที่สุด
ใน TPP ซึ่งสามารถเพิ่มการพยุงของตกตะกอน
โปรตีนโดยผูกพันกับมัน ทำให้มันลอยตัวเหนือชั้นเกลือที่มีน้ำ
[ 16,34 ] อิทธิพลของ t-butanol
ถูกสอบสวนในช่วง– 6.0 ปริมาณ 1.0 มิลลิลิตร ( เศษส่วนมวล
ของ 11.62 – 44.09 % ) ดังแสดงในรูปที่ 1 ( B ) มีค่าประสิทธิภาพการสกัด
ของ APS ได้เมื่อจํานวนล่างของ t-butanol คือ
เพิ่ม เหตุผลคือ t-butanol สามารถให้ flocculate
และเพิ่มประสิทธิภาพของรายได้ , นำไปสู่การ APS ใน
ระยะกลาง ดังนั้น การสกัดลดลง
เพิ่มเติมด้วยการเพิ่ม t-butanol . ประสิทธิภาพการสกัด
โปรตีนไม่ได้เพิ่มขึ้นอย่างมาก ( นักเรียน ) , P > 0.05 ) ความเข้มข้นของ t-butanol
เพิ่มขึ้นจากร้อยละ 20.82 เพื่อ 44.09
%t-butanol เพิ่มเติมสามารถเพิ่มการลอยตัวของโปรตีนทำให้โปรตีนตกตะกอน
มีเสถียรภาพมากขึ้นในอินเตอร์เฟซ ดังนั้น ร้อยละ 20.82
( w / w ) t-butanol ความเข้มข้นเหมาะกว่า
พิจารณาพร้อมกันสกัดประสิทธิภาพและต้นทุน
อุณหภูมิมีบทบาทสำคัญใน TPP และผลของอุณหภูมิ
ศึกษาในช่วง 25 – 45 ◦
Cผลลัพธ์ที่ได้ในรูปที่ 1 ( ค ) พบว่าอุณหภูมิต่ำ ( ต่ำกว่า 35 ◦ C )
เป็นมากขึ้นเหมาะสำหรับการสกัด APS และโปรตีน มวล
โอนความเร็วจะเพิ่มขึ้น และให้เพิ่มเติมสามารถละลายในน้ำ
เฟสเพิ่มขึ้นในอุณหภูมิ อย่างไรก็ตาม อุณหภูมิที่สูงขึ้นจะทำให้เกิดการใช้พลังงานมากกว่า
. สูงสุด
ประสิทธิภาพการสกัดโปรตีนได้ 30 ◦ C เป็นสูงกว่า