2.6. Immunofluorescence (IF) staini

2.6. Immunofluorescence (IF) staining for the detection of Ki67 and
LGR5
To test the hypothesis that lower proliferation of intestinal
crypts, or lower frequency of crypt stem cells may contribute to
greater disease severity and deaths of nursing piglets vs. weaned
pigs, Ki67- or LGR5-positive crypt cells were identified by IF
staining in the small intestine of all pigs. Ki67 protein is a marker
for proliferating crypt cells. The frozen tissues were prepared in
Tissue-Tek OCT compound (Sakura, Torrance, CA, USA) and tested
for the detection of Ki67 and LGR5 using monoclonal and
polyclonal antibodies against human Ki67 (Dako, Glostrup,
Denmark) and human LGR5 (Novus Biologicals, Littleton, CO,
USA), respectively. The anti-Ki67 antibody was diluted 1:200 in
PBST and incubated on the tissues at 4 C overnight, and an
anti-mouse antibody conjugated with Alexa Fluor1 488 (1:200;
Invitrogen, CA, USA) was used as the detection antibody and
incubated on the tissues at 37 C for 1 h. The rabbit anti-
LGR5 antibody was diluted 1:50 in PBST and incubated on the
tissues at 4 C overnight, and an anti-rabbit antibody conjugated
with Alexa Fluor1 594 (Invitrogen) was used as the detection
antibody and incubated on the tissues at room temperature for 1 h.
The stained tissues were examined by
fluorescence microscopy.
Ki67- or LGR5-positive scores were computed by estimating the
number of IF-positive cells in the intestinal section per microscopic
area, at

200 magnification based on the following criteria: 0, no
positive cells; 1, 1–29% of Ki67- or LGR5-positive crypt epithelial
cells showed staining; 2, 30–59% of Ki67- or LGR5-positive crypt
epithelial cells showed staining; and 3, 60–100% of Ki67- or
LGR5-positive crypt epithelial cells showed staining.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.6. immunofluorescence (ถ้า) ย้อมสีสำหรับการตรวจจับของ Ki67 และLGR5การทดสอบสมมติฐานว่าลดการแพร่กระจายของลำไส้มีเป็น], หรือความถี่ต่ำศาสนสเต็มเซลล์อาจนำไปสู่ความรุนแรงของโรคมากขึ้นและเสียชีวิตของพยาบาลทรูดกับหย่านมสุกร Ki67 หรือ LGR5 บวกศาสนเซลล์ระบุโดยถ้าด่างในลำไส้เล็กของสุกรทั้งหมด โปรตีน Ki67 เป็นเครื่องหมายสำหรับ proliferating ศาสนเซลล์ มีเตรียมเนื้อเยื่อแช่แข็งในเนื้อเยื่อ-Tek OCT ผสม (ซากุระ รันซ์ CA สหรัฐอเมริกา) และทดสอบสำหรับการตรวจจับของ Ki67 และ LGR5 โดยใช้โมโน และแอนตี้ polyclonal กับมนุษย์ Ki67 (Dako กลอสทรัปเดนมาร์ก) และมนุษย์ LGR5 (โน Biologicals ททั้ง COสหรัฐอเมริกา), ตามลำดับ แอนติบอดีต่อต้าน-Ki67 ถูกเจือจาง 1: 200 ในPBST และได้รับการกกในเนื้อเยื่อที่ 4 C ค้างคืน และการแอนติบอดีต่อต้านเมาส์รวมกันกับ Alexa Fluor1 488 (1: 200ใช้ Invitrogen, CA, USA) เป็นการตรวจหาแอนติบอดี และได้รับการกกในเนื้อเยื่อที่ 37 C สำหรับ 1 h กระต่ายป้องกัน-LGR5 แอนติบอดีถูกเจือจาง 1:50 ใน PBST และได้รับการกกในการเนื้อเยื่อที่ 4 C ค้างคืน และมีแอนติบอดีต่อต้านกระต่ายรวมกันมี Alexa Fluor1 594 (Invitrogen) ใช้เป็นการตรวจสอบแอนติบอดี และได้รับการกกในเนื้อเยื่อที่อุณหภูมิห้อง 1 ชั่วโมงเนื้อเยื่อย้อมถูกตรวจสอบโดยไมโครสโคเรืองแสงKi67 หรือ LGR5 บวกคะแนนถูกคำนวณ โดยการประมาณการจำนวนของเซลล์เป็นบวกถ้าในส่วนของลำไส้ต่อด้วยกล้องจุลทรรศน์area, at
200 magnification based on the following criteria: 0, nopositive cells; 1, 1–29% of Ki67- or LGR5-positive crypt epithelialcells showed staining; 2, 30–59% of Ki67- or LGR5-positive cryptepithelial cells showed staining; and 3, 60–100% of Ki67- orLGR5-positive crypt epithelial cells showed staining.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 ( ถ้ามี ) วิธีการตรวจหาของ ki67 และlgr5เพื่อทดสอบสมมติฐานที่ลดการงอกของลำไส้สุสาน หรือลดความถี่ของสเต็มเซลล์อาจส่งผลให้ฝังศพใต้ถุนโบสถ์มากกว่าโรครุนแรงและเสียชีวิตของลูกสุกรหย่านมและการพยาบาลหมู ki67 - หรือ lgr5 บวกฝังศพใต้ถุนโบสถ์ระบุว่าเซลล์คือย้อมในลำไส้เล็กของสุกร โปรตีน ki67 เป็นเครื่องหมายฝังศพใต้ถุนโบสถ์สำหรับ proliferating เซลล์ แช่แข็งเตรียมไว้ในเนื้อเยื่อต.ค. ไปยังเนื้อเยื่อบริเวณ ( ซากุระ , Torrance , CA , USA ) และทดสอบการตรวจหาและ ki67 lgr5 โดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีและแอนติบอดีโพลีกับมนุษย์ ( ki67 Glostrup ทางหนึ่ง , ,เดนมาร์ก ) และ lgr5 มนุษย์ทุกอย่าง Littleton , รำพึง , บริษัทสหรัฐอเมริกา ) , ตามลำดับ การเจือจาง 1:200 ใน anti-ki67 แอนติบอดีpbst บ่มในเนื้อเยื่อที่ 4 C ค้างคืน และแอนติบอดีต่อต้านเมาส์และ Alexa fluor1 488 ( 1:200 ;Invitrogen , CA , USA ) ที่ใช้ในการตรวจหาแอนติบอดีและบ่มด้วยเนื้อเยื่อที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสนาน 1 ชั่วโมง กระต่าย ต่อต้านlgr5 แอนติบอดีที่เจือจาง 1 : 50 ใน pbst บ่มในเนื้อเยื่อที่ 4 องศาเซลเซียส ค้างคืน และป้องกันกระต่ายและแอนติบอดีAlexa fluor1 594 ( Invitrogen ) ที่ใช้ในการตรวจจับแอนติบอดี และบ่มในเนื้อเยื่อที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงการย้อมเนื้อเยื่อถูกวินิจฉัยโดยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงด้วยki67 - หรือ lgr5 คะแนนบวกถูกคำนวณโดยการประมาณจำนวนเซลล์ในลำไส้ส่วนถ้าบวกต่อขนาดจิ๋วพื้นที่ ที่200 ขยายตามเกณฑ์ต่อไปนี้ : 0 , ไม่มีเซลล์บวก 1 , 1 – 29 % ของ ki67 - หรือ lgr5 บวกพิฝังศพใต้ถุนโบสถ์เซลล์มีการ 2 , 30 - 59 % ของ ki67 - หรือ lgr5 บวกฝังศพใต้ถุนโบสถ์เยื่อบุผิวเซลล์ พบคราบ และ 3 , 60 – 100 % ของ ki67 - หรือlgr5 บวกห้องใต้ดินเซลล์เยื่อพบ staining