Transcriptional analysisY. lipolyti

Transcriptional analysis
Y. lipolytica JMY1212 wide type and recombinant strains
overexpressing BGL1 and BGL2 were grown to midexponential
phase in defined media and then transferred
into fresh medium containing either glucose or cellobiose
as the sole carbon source. Cells were recovered from
the medium at 20 min and 1 h, respectively, and rapidly
frozen in liquid nitrogen and stored at −80°C until use.
Total mRNA was isolated using RNeasy Plus Mini Kit
(QIAGEN) and reverse transcription was performed
with iScript™ cDNA Synthesis Kit (BIO-RAD) according to the manufacturer’s instructions. Transcription of the
BGLs was analyzed by PCR, using gene-specific primers
and sequencing of the PCR products (Additional file  1:
Table S3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ transcriptionalY. lipolytica JMY1212 หลากหลายชนิดและสายพันธุ์ recombinantoverexpressing BGL1 และ BGL2 ถูกปลูกไป midexponentialขั้นตอนในการกำหนดสื่อ และโอนย้ายแล้วเป็นกลางสดประกอบด้วยน้ำตาลกลูโคสหรือ cellobioseเป็นแหล่งคาร์บอนแต่เพียงผู้เดียว เซลล์ที่ถูกกู้คืนจากสื่อที่ 20 นาทีและ 1 h ตามลำดับ และรวดเร็วแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว และเก็บไว้ที่ −80 ° C จนใช้รวม mRNA ถูกแยกโดยใช้ RNeasy และชุดมินิ(QIAGEN) และทำการ transcription ย้อนมี iScript ™ cDNA ชุดสังเคราะห์ (ไบ-RAD) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต Transcription ของBGLs ถูกวิเคราะห์ โดย PCR ใช้ไพรเมอร์ของยีนเฉพาะและจัดลำดับผลิตภัณฑ์ PCR (เพิ่มเติมไฟล์ 1:ตาราง S3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์การถอดรหัสวาย lipolytica JMY1212 กว้างชนิดและสายพันธุ์ recombinant
overexpressing BGL1 และ BGL2 ปลูกเพื่อ midexponential
ขั้นตอนที่กำหนดไว้ในสื่อและจากนั้นก็ย้ายเข้ามากลางที่มีความสดใหม่ทั้งกลูโคสหรือ cellobiose เป็นแหล่งคาร์บอน แต่เพียงผู้เดียว เซลล์ที่ถูกกู้คืนจากสื่อที่ 20 นาทีและ 1 ชั่วโมงตามลำดับอย่างรวดเร็วและแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวและเก็บไว้ที่-80 องศาเซลเซียสจนถึงการใช้งาน. รวม mRNA ถูกแยกออกโดยใช้ RNeasy พลัสมินิ Kit (QIAGEN) และการถอดรหัสย้อนกลับได้ดำเนินการกับ iScript ™ยีนสังเคราะห์ Kit (BIO-RAD) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ถอดความของBGLs ได้รับการวิเคราะห์โดยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์ยีนที่เฉพาะเจาะจงและลำดับของผลิตภัณฑ์วิธีPCR (แฟ้มเพิ่มเติมที่ 1: ตาราง S3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์
ลองวาย lipolytica jmy1212 กว้างชนิดและสายพันธุ์และคอม
overexpressing bgl1 bgl2 ปลูก midexponential
เฟสในนิยามสื่อแล้วย้ายลงในสื่อที่มีทั้งสด

หรือที่กลูโคสเป็นแหล่งคาร์บอน เซลล์ที่พบจาก
กลาง 20 มั้ยมิน 1 ไหม H ตามลำดับ และรวดเร็ว
แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวที่อุณหภูมิ 80 องศา C และ บริษัท เวสเทิร์น จนกระทั่งใช้ ได้ใช้ rneasy
mRNA ทั้งหมดรวมทั้งมินิคิท
( เพิ่ม ) และย้อนกลับการถอดความ
กับ iscript ™ cDNA การสังเคราะห์ Kit ( Bio-rad ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต การถอดความของ
bgls โดยใช้วิธี PCR โดยใช้ primers และการหาลำดับเบสของยีนที่เฉพาะเจาะจง
ผลิตภัณฑ์ PCR ( เพิ่มเติมไฟล์ไหม 1 :
โต๊ะ S3 )