Granulosa cells were aspirated from small follicles from the ovaries of 3- to 6-month-old pigs, washed, and cultured in sealed spinner flasks. Medium 199 was supplemented with 10% fetal bovine serum, insulin, dexamethasone, T4, and antibiotics. FSH, LH, or hCG was added daily where appropriate. Cultures were sampled every other day for 10 days. Cells were examined microscopically, and cellular [125I]hCG binding and DNA content were measured. The cells aggregated and underwent morphological luteinization within 4 days in the absence or presence of FSH, LH, or hCG. Aggregation in culture was independent of clumping at the time of harvest. There was no measurable cell proliferation, based on the lack of mitotic figures and the lack of any increase in DNA. The average yield of luteinized cells from small follicle granulosa cells was 7% at 6 days. Cell concentration remained constant between days 6-10. Between days 0-2, [125I]iodo-hCG binding declined in all cultures. It continued to decline through day 10 in control cultures. In cultures containing FSH, binding increased to a maximum on day 6. The effect was specific for FSH. Increased binding was due to increased numbers of binding sites per cell. Equilibrium saturation binding data indicated that [l25I]iodo-hCG binding to freshly harvested and cultured granulosa cells was specific, saturable, and of high affinity. The numbers of binding sites were 938 ± 49 and 7602 ± 156 sites/cell for control and FSH on day 6, respectively, compared to 498 ± 14 sites/cell on day 0. The effect of FSH on the increase in binding sites was specific and dose related. Autoradiographic studies indicated a skewed normal frequency distribution of [125I]iodo-hCG-binding sites on cultured cells.
Affiliations
- See more at: http://press.endocrine.org/doi/abs/10.1210/endo-108-4-1561#sthash.931iIDvL.dpuf
เซลล์มีขนาดเล็กลมธรรมชาติจากไข่จากรังไข่ 3 - 6 เดือน สุกร ล้าง และเพาะเลี้ยงในขวดสปินเนอร์ที่ปิดผนึก ปานกลาง เพราะเสริมด้วย 10% fetal bovine serum , อินซูลิน , เก้าแต้ม , T4 , ยาปฏิชีวนะ FSH , LH , หรือ HCG เพิ่มทุกวัน ที่เหมาะสม วัฒนธรรมโดยสุ่มเก็บตัวอย่างทุก ๆวัน เป็นเวลา 10 วัน เซลล์มีการตรวจสอบผล และมือถือ [ 125I ] HCG ข้อผูกพันและดีเอ็นเอปริมาณวัดได้ เซลล์รวม และได้รับคำ luteinization ภายใน 4 วันในการขาดหรือการปรากฏตัวของ FSH , LH , หรือ HCG . ความหลากหลายในวัฒนธรรมความเป็นอิสระของชายหญิงในเวลาของการเก็บเกี่ยว ไม่มีการวัดเซลล์ขยายตัว ตามการขาดของเส้นใยและการเพิ่มดีเอ็นเอของใด ๆ ผลผลิตเฉลี่ยของ luteinized เซลล์เล็กเซลล์รูขุมขนธรรมชาติ 7 % ใน 6 วัน เซลล์ความเข้มข้นคงที่ระหว่างวันที่ 6-10 . ระหว่างวัน : [ 125I ] iodo HCG ลดลงผูกพันในวัฒนธรรม มันลดลงต่อเนื่องจากวันที่ 10 ในวัฒนธรรมของการควบคุม ในวัฒนธรรมที่มี FSH ผูกพันเพิ่มขึ้นสูงสุดในวันที่ 6 ผลคือที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ 2 . การเพิ่มขึ้นเนื่องจากตัวเลขที่เพิ่มขึ้นของเว็บไซต์ผูกพันต่อเซลล์ สมดุลอิ่มตัวผูกข้อมูลพบว่า [ l25i ] iodo HCG แสดงสดเก็บเกี่ยวและเพาะเลี้ยงเซลล์ธรรมชาติมีเฉพาะ saturable และความสามารถสูง ตัวเลขของเว็บไซต์ที่ถูกผูกด้วย± 49 และ 7602 ± 156 เว็บไซต์ / เซลล์ควบคุมและ FSH ในวัน 6 ตามลำดับ เมื่อเทียบกับตอนที่± 14 เว็บไซต์ / เซลล์ในวันที่ 0 ผลของการฉีดที่เพิ่มในเว็บไซต์ที่เฉพาะเจาะจงและปริมาณที่เกี่ยวข้อง autoradiographic การศึกษาระบุกำหนดการปกติการแจกแจงความถี่ของ [ 125I ] iodo HCG ผูกพันเว็บไซต์ในการเพาะเลี้ยงเซลล์หน่วยงานที่เกี่ยวข้องดูเพิ่มเติมได้ที่ : http : / / กด ต่อมไร้ท่อ . org / ดอย / ABS / 10.1210 / endo-108-4-1561 # sthash.931iidvl.dpuf
การแปล กรุณารอสักครู่..
