All the quantitative LC–MS/MS metho

All the quantitative LC–MS/MS method data are reported in
Table 1. The calibration curves obtained by plotting the area of
ES (1–6) against the known concentration of compounds were linear
in the range of 1–10 lgmL1. The calibration graphs, obtained
by plotting area of external standard versus the known concentration
of each compound, were linear in the range of 1–10 lgmL–1
for all compounds, with the regression values reported in
Table 1. Values of r2, LOD, LOQ and p were calculated in order to
validate the new method according to Quality Guidelines:
Validation of Analytical Procedures – Text and Methodology (ICH
Q2). Validation data are reported in Table 1. In our procedures,
plants were extracted with water: ethanol 50:50 (10 mL  3), for
30 min with a continuous vortex, at 30 C, at a plant:solvent ratio
of 1:10. Table 2 reports the presence of the 6 compounds in the different
samples (5 biological repetitions for each treatment) of S.
rebaudiana, grown under different chilling conditions.
Analysis of the different samples revealed the good quality
level, with respect to the presence of sweet glycosides, of plants
cultivated in field and greenhouse in Tunisia, with differences in
content relative to the stress conditions applied to the crops.
Each result is the average value obtained from three technical triplicates.
All the treated samples showed highest content in steviol
glycosides, with the major content for T2 treated with 0.5 mM salicylic
acid (SA), and T4 treated with 30 lM 6-benzylaminopurine
(BAP). With respect to samples treated with salicylic acid (SA)
(T2), content of rebaudioside A (1) and stevioside (6) increased relative
to untreated plants (T0). This finding is interesting because
among the diterpenic glycosides rebaudioside A (1) and stevioside
(6) are the compounds showing the highest sweetness activity and
least toxicity. Principal component analysis, using SIMCA-P software,
was applied to the simple matrix obtained, as seen in
Table 2 which shows the quantitative content of each marker compound
in each of the 24 samples. Fig. 4A shows the 2D projection
(score) plot of the 24 S. rebaudiana samples. The first component
explains 80% of the variance while the second 7.3%. There are confined
cluster areas in the 2D diagram, showing a link to chilling
treatment. The area mapped in the upper right quadrant is populated
mainly by samples labelled as T4, corresponding to plants
treated with 30 lM BAP, in the section corresponding to the area
mapped at the lower right quadrant are distributed samples pertaining
to plants labelled as T2, treated with 0.5 mM SA,. Samples
labelled as T3 treated with 10 mM CaCl2, T1 treated with 10 mM
H2O2 and T0 (untreated) showed less differentiation. The loading
plot (Fig. 4B) reveals differences in concentration of the six principal
steviol glycosides. In particular, the concentrations of rebaudioside
A (1) and stevioside (6) are associated with T2,
encouraging evidence to attribute to this chilling treatment the
production of Stevia plants rich in the most interesting sweet
glycosides.
4. Conclusions

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีรายงานข้อมูลทั้งหมดประมาณ LC – MS/MS วิธีในตารางที่ 1 เทียบเส้นโค้งได้ โดยพื้นที่การลงจุดES (1 – 6) กับทราบความเข้มข้นของสารถูกเส้นในช่วง 1 – 10 lgmL 1 กราฟปรับเทียบ รับโดยพล็อตของมาตรฐานภายนอกเทียบกับความเข้มข้นรู้จักแต่ละสารประกอบ มีเชิงเส้นในช่วง 1-10 lgmL-1สำหรับสารประกอบทั้งหมด ค่าถดถอยในตารางที่ 1 มีคำนวณค่าของ r2 ลอด LOQ และ p เพื่อตรวจสอบวิธีการใหม่ตามแนวทางคุณภาพ:การตรวจสอบขั้นตอนวิเคราะห์ข้อความและวิธีการ (ICHไตรมาสที่ 2) มีรายงานการตรวจสอบข้อมูลในตารางที่ 1 ในขั้นตอนของเราพืชที่สกัด ด้วยน้ำ: เอทานอลคนละครึ่ง (10 mL 3), สำหรับ30 นาที ด้วย vortex ที่ต่อเนื่อง ที่ 30 C ที่อัตราพืช: ตัวทำละลาย1:10 ตารางที่ 2 รายงานสถานะของสาร 6 ในที่แตกต่างกันตัวอย่าง (5 ชีวภาพทำซ้ำสำหรับแต่ละทรีทเม้นต์) s ได้rebaudiana เติบโตขึ้นภายใต้เงื่อนไขอื่นรำคาญวิเคราะห์อย่างอื่นเปิดเผยคุณภาพดีระดับ เกี่ยวกับสถานะของ glycosides หวาน พืชปลูกในเรือนกระจกในตูนิเซีย มีความแตกต่างในและฟิลด์เนื้อหาที่สัมพันธ์กับสภาพความเครียดที่ใช้ปลูกแต่ละผลเป็นค่าเฉลี่ยที่ได้จากเทคนิค triplicates สามตัวอย่างที่บำบัดพบเนื้อหาสูงสุด steviolรับ glycosides กับเนื้อหาหลักของ T2 salicylic 0.5 mMกรด (SA), และ T4 รักษา ด้วย lM 30 6-benzylaminopurine(BAP) กับตัวอย่างรักษา ด้วยกรดซาลิไซลิ (SA)(T2), เนื้อหา rebaudioside A (1) และ (6) stevioside เพิ่มญาติจะไม่ถูกรักษาพืช (T0) ค้นหานี้เป็นที่น่าสนใจเนื่องจากระหว่าง diterpenic glycosides rebaudioside (1) และ stevioside(6) คือสารประกอบที่แสดงกิจกรรมความหวานหอมสูงสุด และความเป็นพิษน้อยที่สุด การวิเคราะห์ส่วนประกอบหลัก ใช้ซอฟต์แวร์ SIMCA-Pใช้กับเมทริกซ์อย่างที่ได้รับ ไว้ตารางที่ 2 ซึ่งแสดงเนื้อหาเชิงปริมาณของแต่ละเครื่องหมายมีความซับซ้อนในแต่ละตัวอย่าง 24 Fig. 4A แสดงฉายภาพ 2Dแผน (คะแนน) ตัวอย่าง rebaudiana S. 24 ส่วนประกอบแรกอธิบายถึง 80% ของผลต่างในขณะที่สอง 7.3% มีอยู่จำกัดพื้นที่คลัสเตอร์ในไดอะแกรม 2D การแสดงการเชื่อมโยงไปถือรักษา เติมบริเวณที่ถูกแมปในควอดร้อนท์ที่ขวาบนโดยมันเป็น T4 ตัวอย่างที่สอดคล้องกับพืชรับ 30 lM BAP ในส่วนที่สอดคล้องกับพื้นที่แมปที่ควอดร้อนท์ที่ขวาล่างเป็นตัวอย่างแบบกระจายที่เกี่ยวข้องให้พืชมันเป็น T2 รักษา ด้วย 0.5 mM SA ตัวอย่างมันเป็น T3 รับ 10 มม. CaCl2, T1 รับ 10 มม.H2O2 และ T0 (ไม่ถูกรักษา) แสดงน้อยสร้างความแตกต่าง โหลดแผน (Fig. 4B) เผยให้เห็นถึงความแตกต่างในความเข้มข้นของหลักหกsteviol glycosides โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ความเข้มข้นของ rebaudioside(1) และ (6) stevioside จะเกี่ยวข้องกับ T2ส่งเสริมหลักฐานของแอตทริบิวต์นี้ถือรักษาผลิต Stevia พืชอุดมหวานน่าสนใจglycosides4. บทสรุป

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ทั้งหมดปริมาณ LC-MS / MS
ข้อมูลวิธีการมีการรายงานในตารางที่1 เส้นโค้งการสอบเทียบที่ได้รับจากการวางแผนพื้นที่ของ
ES (1-6)
กับความเข้มข้นของสารที่รู้จักกันเป็นเชิงเส้นในช่วง1-10 lgmL หรือไม่ 1 กราฟสอบเทียบที่ได้รับจากการวางแผนพื้นที่ภายนอกมาตรฐานเมื่อเทียบกับความเข้มข้นที่รู้จักกันของแต่ละสารประกอบเป็นเชิงเส้นในช่วง1-10 lgmL-1 สำหรับสารทั้งหมดที่มีค่าการถดถอยรายงานในตารางที่ 1 ค่าของ r2, ล็อด LOQ p และมีการคำนวณเพื่อตรวจสอบวิธีการใหม่ตามแนวทางคุณภาพ: การตรวจสอบขั้นตอนการวิเคราะห์ - ข้อความและวิธีการ(ไอซีไตรมาสที่ 2) การตรวจสอบข้อมูลที่มีการรายงานในตารางที่ 1 ในขั้นตอนของเราพืชถูกสกัดด้วยน้ำ: 50:50 เอทานอล (10 มิลลิลิตร 3?) สำหรับ30 นาทีกับกระแสน้ำวนอย่างต่อเนื่องวันที่ 30 ซีที่โรงงาน: ตัวทำละลายอัตราส่วน1 : 10 ตารางที่ 2 รายงานการปรากฏตัวของสารประกอบที่ 6 ในที่แตกต่างกันตัวอย่าง(5 ซ้ำทางชีวภาพสำหรับการรักษาในแต่ละ) ของเอสrebaudiana ปลูกภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่างกันหนาว. วิเคราะห์ตัวอย่างที่แตกต่างกันพบว่ามีคุณภาพดีระดับที่เกี่ยวกับการปรากฏตัวของหวานไกลโคไซด์ของพืชที่ปลูกในภาคสนามและเรือนกระจกในตูนิเซียมีความแตกต่างในเนื้อหาที่สัมพันธ์กับสภาพความเครียดนำไปใช้กับพืช. ผลแต่ละค่าเฉลี่ยที่ได้รับจากสาม triplicates ทางเทคนิค. ทุกกลุ่มตัวอย่างได้รับการปฏิบัติที่แสดงให้เห็นเนื้อหาที่สูงที่สุดใน steviol ไกลโคไซด์ที่มี เนื้อหาที่สำคัญสำหรับการรักษาด้วย T2 0.5 มิลลิซาลิไซลิกรด(SA) และ T4 รับการรักษาด้วย 30 LM 6 benzylaminopurine (BAP) ด้วยความเคารพต่อตัวอย่างการรักษาด้วยกรดซาลิไซลิ (SA) (T2) เนื้อหาของ Rebaudioside A (1) และสตีวิโอไซ (6) เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับพืชได้รับการรักษา(T0) การค้นพบนี้เป็นที่น่าสนใจเพราะในหมู่ไกลโคไซด์ diterpenic Rebaudioside A (1) และสตีวิโอไซ (6) ได้รับสารแสดงกิจกรรมความหวานสูงสุดและความเป็นพิษน้อย การวิเคราะห์องค์ประกอบหลักโดยใช้ซอฟแวร์ SIMCA-P, ถูกนำไปใช้เมทริกซ์ได้ง่ายเท่าที่เห็นในตารางที่ 2 ซึ่งแสดงให้เห็นเนื้อหาเชิงปริมาณของสารแต่ละเครื่องหมายในแต่ละ24 ตัวอย่าง รูป 4A แสดงให้เห็นถึงการฉาย 2 มิติ(คะแนน) พล็อตของเอส 24 ตัวอย่าง rebaudiana องค์ประกอบแรกอธิบาย 80% ของความแปรปรวนในขณะที่สอง 7.3% จะถูกคุมขังมีพื้นที่กลุ่มในแผนภาพ 2D แสดงให้เห็นการเชื่อมโยงไปหนาวรักษา พื้นที่ที่แมปในด้านขวาบนเป็นประชากรส่วนใหญ่โดยกลุ่มตัวอย่างระบุว่าเป็น T4 สอดคล้องกับพืชได้รับการปฏิบัติที่มี30 LM BAP ในส่วนที่สอดคล้องกับพื้นที่แมปที่ด้านขวาล่างที่มีการกระจายตัวอย่างที่เกี่ยวข้องกับพืชที่มีข้อความเป็นT2 รับการรักษา 0.5 มิลลิ SA ,. ตัวอย่างระบุว่าเป็น T3 รับการรักษาด้วย 10 มิลลิ CaCl2, T1 รับการรักษาด้วย 10 มิลลิ H2O2 และ T0 (ได้รับการรักษา) แสดงให้เห็นความแตกต่างน้อย โหลดพล็อต (รูป. 4B) เผยให้เห็นความแตกต่างในความเข้มข้นของหกหลัก glycosides steviol โดยเฉพาะอย่างยิ่งความเข้มข้นของ Rebaudioside A (1) และสตีวิโอไซ (6) มีความเกี่ยวข้องกับ T2, ส่งเสริมให้หลักฐานที่แอตทริบิวต์การรักษาหนาวเหน็บผลิตของพืชที่อุดมไปด้วยหญ้าหวานหวานที่น่าสนใจที่สุดglycosides. 4 สรุปผลการวิจัย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ทั้งหมดปริมาณ LC MS / MS และข้อมูลวิธีการรายงาน
โต๊ะ 1 เส้นโค้งสอบเทียบได้วางแผนพื้นที่
ES ( 1 – 6 ) กับความเข้มข้นของสารประกอบที่รู้จักกันเป็นเส้นตรง
ในช่วง 1 – 10 lgml  1 การปรับแต่งกราฟ โดยวางแผนได้
พื้นที่มาตรฐานภายนอกเมื่อเทียบกับความเข้มข้นของแต่ละสาร
รู้จักเป็นเส้นตรงในช่วง 1 – 10 – 1
lgmlสำหรับสารที่มีการรายงานในตารางที่ 1 ค่า
. ค่า R2 , LOD loq และ P , คำนวณเพื่อ
ตรวจสอบวิธีการใหม่ตามแนวทางคุณภาพ :
การตรวจสอบความถูกต้องของกระบวนการวิเคราะห์และข้อความและวิธีการ ( I
2 ) ความถูกต้องของข้อมูลจะมีการรายงานในตารางที่ 1 ในขั้นตอนของเรา
พืชสกัดด้วยน้ำเอทานอล 50 : 50 ( 10 ml 
3 )30 นาทีกับ Vortex ต่อเนื่อง 30  C ที่โรงงาน :
ต่อตัวทำละลาย 1 : 10 . ตารางที่ 2 รายงานสถานะของสารประกอบในตัวอย่างที่แตกต่างกัน 6
( เหลือ 5 ทางชีวภาพสำหรับการรักษาแต่ละ ) S .
ว่าปลูกภายใต้สภาพอุณหภูมิที่แตกต่างกัน .
การวิเคราะห์ตัวอย่างต่างกันพบระดับคุณภาพ
ดี ด้วยความเคารพในการปรากฏตัวของไกลโคไซด์จากพืช
หวานปลูกในเขตข้อมูลและเรือนกระจกในตูนิเซีย มีความแตกต่างในเนื้อหาที่สัมพันธ์กับภาวะเครียด

ใช้กับพืช แต่ละผลเป็นค่าเฉลี่ยที่ได้จากสามล้อมเทคนิค .
ทั้งหมดตัวอย่างได้รับการรักษา พบปริมาณสูงสุดใน /
glycosides กับเนื้อหาหลักสำหรับ T2 รักษาด้วย salicylic acid ( ซา
0.5 มม. ) , และ T4 ถือว่า 6-benzylaminopurine
30 โดย( BAP ) ด้วยความเคารพอย่างที่ได้รับการรักษาด้วยกรด salicylic ( SA )
( T2 ) เนื้อหาของรีบาวดิโ ซด์ ( 1 ) และ สตีวิโอไซด์ ( 6 ) เพิ่มขึ้นสัมพัทธ์
พืชดิบ ( t0 ) การค้นพบนี้เป็นสิ่งที่น่าสนใจ เพราะ
ในหมู่ diterpenic รำพันรีบาวดิโ ซด์ ( 1 ) และ สตีวิโอไซด์
( 6 ) เป็นสารประกอบที่แสดงกิจกรรมและความหวานสูง
พิษน้อยที่สุด การวิเคราะห์องค์ประกอบหลักการใช้ซอฟต์แวร์ simca-p
, ใช้ง่ายเมทริกซ์ได้ ตามที่เห็นใน
ตารางที่ 2 ซึ่งแสดงปริมาณเนื้อหาของแต่ละสารประกอบในแต่ละเครื่องหมาย
24 ตัวอย่าง รูปที่ 4 แสดง
ฉาย 2D ( คะแนน ) พล็อตของ 24 . ว่าตัวอย่าง
ส่วนแรกอธิบายถึง 80 % ของความแปรปรวนในขณะที่สอง 7.3 % มีคับ
กลุ่มพื้นที่ใน 2D แผนภาพแสดงลิงค์ไปยังหนาว
รักษา พื้นที่ที่แมปใน Quadrant บนขวาเป็นประชากรส่วนใหญ่ โดยตัวอย่าง labelled เป็น T4

ที่พืชได้รับ 30 โดย บัง ในส่วนที่เกี่ยวข้องกับพื้นที่
แมปที่ขวาล่างของกระจาย ตัวอย่างเกี่ยวกับ
พืช labelled เป็น T2 , ปฏิบัติกับซา , 0.5 มิลลิเมตร ตัวอย่าง
labelled เป็น T3 รักษาด้วย CaCl2 10 มม.T1 ได้รับ 10 มม. และแบตเตอรี่ t0
( รักษา ) พบความแตกต่างได้น้อยลง โหลด
พล็อต ( ภาพ 4B ) พบความแตกต่างของความเข้มข้นของหกหลัก
สารไกลโคไซด์ โดยเฉพาะความเข้มข้นของรีบาวดิโ ซด์
( 1 ) และ สตีวิโอไซด์ ( 6 ) เกี่ยวข้องกับ T2
นิมิต , หลักฐานการรักษาคุณลักษณะนี้หนาว
การผลิตของหญ้าหวานพืชที่อุดมไปด้วยที่น่าสนใจที่สุดไกลหวาน
.
4 สรุป