Total protein was extracted accordi

Total protein was extracted according to the previously described method with slight modifications (Chan et al., 2007). Briefly, 1 g frozen powder from plant leave were homogenized extensively with 5 ml of pre-cooled homogenization buer [20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1.05 M sucrose, 10 mM EGTA, 1 mM DTT, 1 mM PMSF and 1% (v/v) Triton X-100] on ice, and centrifuged at 10,000 g for 30 min at 4◦C. The supernatant was then mixed with equal volume of Tris-HCl (pH 7.8) buered phenol. After centrifugation at 10,000 g for 30 min at 4◦C, the above phenol phase was mixed with five volumes of ice-cold saturated ammonium acetate in methanol overnight at −20◦C. The total proteins were collected through centrifugation was stored at−80◦C or dissolved in the lysis buer [7 M urea, 2 M mithiourea, 4% (w/v) of 3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammo-nio]-1-propane sulfonate (CHAPS), 65 mM DTT and 0.2% (w/v) of carrier ampholyte (pH3.5–10)]. After dissolving extensively and centrifugation, the protein supernatant was quantified through the Bradford’s method (Bradford, 1976).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โปรตีนทั้งหมดถูกแยกตามวิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย (จัน et al. 2007) สั้น ๆ 1 กรัมผงจากออกจากโรงงานแช่แข็งถูก homogenized อย่างกว้างขวาง ด้วย 5 ml ของเย็นก่อน homogenization bu เอ้อ มม. 20 ทริสเรทติ้ง HCl (pH 7.5), ซูโครส 1.05 M, EGTA, 1 mM DTT, PMSF 1 มม.และ 1% (v/v) Triton X-100 10 มม.บนน้ำแข็ง และผลิตภัณฑ์ที่ 10,000 g 30 นาทีที่ 4◦C Supernatant ถูกนำมาผสมแล้ว ด้วยปริมาณเท่ากับของทริสเรทติ้ง HCl (pH 7.8) บุ ered ฟีนอล หลังจากหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 g 30 นาทีเวลา 4◦C ฟีนอลขั้นตอนข้างต้นถูกผสมกับแอมโมเนียอิ่มฉ่ำ acetate ในเมทานอค้างคืนที่ −20◦C ห้า โปรตีนทั้งหมดถูกรวบรวมผ่านหมุนเหวี่ยงถูกเก็บ at−80◦C หรือละลายใน lysis bu เอ้อ [7 M ยูเรีย mithiourea 2 ม. 4% (w/v) 3-[(3-cholamidopropyl)-dimethylammo-nio] -1-โพรเพ sulfonate (CHAPS), 65 มม. DTT และ 0.2% (w/v) ของผู้ขนส่ง ampholyte (pH3.5 – 10)] หลังจากยุบอย่างกว้างขวางและหมุนเหวี่ยง โปรตีน supernatant ถูกวัด ด้วยวิธีของแบรดฟอร์ด (แบรดฟอร์ด 1976)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรตีนทั้งหมดถูกสกัดตามวิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย (จัน et al., 2007) สั้น ๆ 1 กรัมผงแช่แข็งจากออกจากโรงงานถูกหดหายอย่างกว้างขวางกับ 5 มิลลิลิตรก่อนระบายความร้อนด้วย Bu เป็นเนื้อเดียวกัน? ER [20 มิลลิเมตร Tris-HCl (pH 7.5) 1.05 M ซูโครส 10 มิลลิ EGTA 1 มิ DTT 1 มิ PMSF และ 1% (v / v) Triton X-100] บนน้ำแข็งและหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่4◦C ใสได้รับการผสมกับปริมาณที่เท่ากันของ Tris-HCl (pH 7.8) Bu? ered ฟีนอล หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่4◦Cเฟสฟีนอลข้างต้นถูกผสมกับห้าเล่มของเย็นอิ่มตัวแอมโมเนียมอะซิเตทในเมทานอลค้างคืนที่-20◦C โปรตีนทั้งหมดที่ถูกเก็บรวบรวมผ่านการหมุนเหวี่ยงถูกเก็บไว้ที่-80◦Cหรือละลายใน Bu สลายหรือไม่เอ้อ [7 M ยูเรีย 2 M mithiourea, 4% (w / v) 3 - [(3 cholamidopropyl) -dimethylammo-NIO] -1-โพรเพนซัลโฟเนต (CHAPS) 65 มิลลิ DTT และ 0.2% (w / v) ของผู้ให้บริการ ampholyte (pH3.5-10 )] หลังจากที่ละลายอย่างกว้างขวางและหมุนเหวี่ยงสารละลายโปรตีนที่ถูกวัดผ่านวิธีการที่แบรดฟอ (แบรด, 1976)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรตีนทั้งหมดถูกสกัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้วิธีกับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ( ชาน et al . , 2007 ) สั้น 1 กรัมแป้งจากพืชบดแช่แข็งออกไปอย่างกว้างขวางกับ 5 ml ก่อนเย็นการบูเออร์ [ 20 มม. โดย HCl ( pH 7.5 ) , 1.05 เมตร โดยหน่วย 10 มม. , 20 มม. 1 mM PMSF และ 1 , 1 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) Triton X-100 ] บนน้ำแข็ง ไฟฟ้า 10 , 000 กรัม 30 นาทีที่ 4 ◦ C แล้วนำผสมกับปริมาณเท่ากันของทริส HCl ( pH 7.8 ) buered ฟีนอล หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 10 , 000 G สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ◦ C เฟสฟีนอลข้างต้นผสมกับห้าเล่มของเย็นน้ำอิ่มตัว acetate ในเมทานอลค้างคืนที่ 20 C −◦โปรตีนทั้งหมดถูกรวบรวมผ่านการปั่นเหวี่ยงที่ถูกเก็บไว้ที่− 80 ◦ C หรือละลายในการสลายบูเออร์ [ 7 M ยูเรีย 2 M mithiourea 4 % ( w / v ) 3 - [ ( 3-cholamidopropyl ) - dimethylammo นีโอ ] - 1-propane ซัลโฟเนต ( Chaps ) , DTT 65 มม. และ 0.2% ( w / v ) ของผู้ให้บริการ ampholyte ( ph3.5 – 10 ) ] หลังจากละลายอย่างกว้างขวางและปั่น , โปรตีนสูงถูก quantified ผ่านแบรดฟอร์ดเป็นวิธี Bradford , 1976 )