The viruses were propagated in epithelioma papulosum cyprini
(EPC) cells maintained at 15 C in supplemented Eagle's minimum
essential medium (MEM10), which consisted of Eagle's MEM
(Gibco®, Invitrogen Co., USA) supplemented with 10% fetal bovine
serum (FBS, Gibco®, Invitrogen Co., USA), 100 IU mL1 penicillin G,
and 100 mg mL1 streptomycin sulfate. The viruses were harvested
after observation of cytopathic effects (CPEs) and centrifuged at
12,000 g for 10 min at 4 C. The culture supernatants were
divided into aliquots and stored at 80 C. Viral infectivity was
determined in 96-well microplates seeded with EPC cells. After
propagating the EPC cells at 15 C for 14 d, the viral titer was
quantified by determining the 50% tissue culture infective dose
(TCID50).
2.
ไวรัสที่ถูกแพร่กระจายในเซลล์ Epithelioma papulosum cyprini
(EPC) เซลล์เก็บรักษาไว้ที่ 15 องศาเซลเซียสในการเสริมอินทรีขั้นต่ำ
กลางที่สำคัญ (MEM10) ซึ่งประกอบไปด้วยนกอินทรี MEM
(Gibco®, Invitrogen Co. , USA) เสริมด้วย 10% ของทารกในครรภ์วัว
ซีรั่ม (FBS , Gibco®, Invitrogen Co. , USA) 100 IU มล 1 penicillin G,
และ 100 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1 streptomycin ซัลเฟต ไวรัสที่ถูกเก็บเกี่ยว
หลังจากการสังเกตของผล cytopathic (CPEs) และหมุนเหวี่ยงที่
12,000? กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส supernatants วัฒนธรรมถูก
แบ่งออกเป็น aliquots และเก็บไว้ที่ 80 องศาเซลเซียสการติดเชื้อไวรัสที่ถูก
กำหนดไว้ใน 96 หลุม microplates เมล็ดกับเซลล์ EPC หลังจาก
การแพร่กระจายของเซลล์ EPC ที่ 15 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 14 D ที่ titer ไวรัสถูก
วัดโดยกำหนด 50% การเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อติดเชื้อยา
(TCID50).
2
การแปล กรุณารอสักครู่..
