Quantification of capsaicin by LC–E

Quantification of capsaicin by LC–ESI–MS/MS
An LC-ESI-MS/MS method through MRM was developed for the
selective detection and quantification of 1 and 3 at 11.22 and
12.35 min in the extract (Fig. 3). The selectivity and sensitivity of
(MRM) LC-ESI-MS/MS relies on the application of MRM in which
each ionized compound gives a distinct precursor-to-product ion
transition that is diagnostic for the presence of a particular comtRpound in an extract. Comparison of the chromatograms of blank
and spiked standard substance indicated no significant interference
at the retention times of the investigated compounds. In the
optimized method, chromolith RP18e monolithic type column
(50  4.6 mm) was used for optimal separation of 1 and 3. The
presence of 1 and 3 was successfully detected by mass fragmentography
using two MRM transitions. Standards were injected using
LC without column (through union) controlled by Mass-Hunter
workstation software ver. B.04.00, for qualitative optimization.
Chromatograms of MRM transition mass of m/z 306.1?137.0
and 273.0?257.8 were taken as quantifier and transition mass
of m/z 306.1?170.1 and 273.0?229.9 were taken as qualifier
for 1 and 3 respectively as shown in Fig. 4. As seen in figure-4, ions
peaks were sufficiently separated and, 1 and 3 were present in all
the samples. The quantified values of 1 and 3 were found to be
8.30 lg/L and 2.31 mg/L, respectively. In comparison to 1, 3 was
found to be present in higher concentration in all the extracts.
Notably, the present method reports for the first time use of chromolith
C-18 column and (MRM) LC-ESI-MS/MS for the separation
and quantification of capsaicin. The developed multimode LC-ESIMS/
MS method can easily be utilized as a fast and sensitive analytical
tool for analysis of 1 and 3 in the presence of other possible
constituents.
Biological Activity
Compound 3 showed significant antiproliferative activity
against different human cancer cell lines (Table 2) in which human
promyelocytic leukemia, HL-60 cells were found to be the most
sensitive with IC50 value of 85 lM. Therefore, we chose the HL-
60 cell line for further studies on 3.
Phase contrast microscopy and Hoechst 33,258 staining
Apoptosis induction by 3 was checked through phase contrast
microscopy and Hoechst staining. The apoptotic bodies were
significantly visible in cells treated with 200 lM concentration of
3 for 72 h (Fig. 5A and B). Compound 3 at 200 lM concentration
caused cell wall deformation, shrinkage of cell size, nuclear condensation
and formation of scattered apoptotic bodies as shown
by white arrows in Fig. 5A and B, while the nuclei of untreated cells
are healthy and round in shape. The number of apoptotic bodies increased
with increased concentration of 3 in HL-60 cells.
Measurement of mitochondrial membrane potential
Rhodamine-123 uptake into mitochondria is driven by mitochondrial
transmembrane potential (Wmt). Loss of Wmt leads to
depolarization of mitochondrial membranes and mitochondrial
dysfunctions leads to cell death. Compound 3 induced loss of mitochondrial
membrane potential (MMP) in HL-60 cells in a dose
dependant manner (Fig. 5C). The loss of mitochondrial membrane
potential also releases several pro-apoptotic factors that activate
caspases and finally induces apoptosis

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปริมาณ capsaicin โดย LC-ESI-MS / MS
วิธี LC-ESI-MS / MS ผ่าน MRM ได้รับการพัฒนาสำหรับ
การตรวจสอบการคัดเลือกและการหาปริมาณของ 1 และ 3 ที่ 11.22 และ
12.35 นาทีในสารสกัดจาก (รูปที่. 3) การเลือกและความไวของ
(MRM) LC-ESI-MS / MS อาศัยการประยุกต์ใช้ MRM ซึ่งใน
แต่ละสารบริสุทธิ์ช่วยให้สารตั้งต้นเพื่อผลิตภัณฑ์ไอออนที่แตกต่างกัน
ที่มีการเปลี่ยนแปลงการวินิจฉัยสำหรับการปรากฏตัวของ comtRpound โดยเฉพาะอย่างยิ่งในสารสกัดจาก เปรียบเทียบ chromatograms ของว่างเปล่า
และถูกแทงสารมาตรฐานที่ระบุไม่มีการรบกวนอย่างมีนัยสำคัญ
ในช่วงเวลาการเก็บรักษาของสารการตรวจสอบ ใน
วิธีการที่ดีที่สุด chromolith RP18e คอลัมน์ชนิดเสาหิน
(50? 4.6 มิลลิเมตร) ถูกนำมาใช้สำหรับการแยกที่ดีที่สุดของ 1 และ 3
การปรากฏตัวของ 1 และ 3 ได้รับการตรวจพบประสบความสำเร็จโดย fragmentography มวล
โดยใช้สองเปลี่ยน MRM มาตรฐานถูกฉีดใช้
LC โดยไม่ต้องคอลัมน์ (ผ่านสหภาพ) ควบคุมโดยมวลฮันเตอร์
ซอฟแวร์เวิร์คสเตชั่เวอร์ชั่น B.04.00 สำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพคุณภาพ.
chromatograms มวลการเปลี่ยนแปลงของ MRM เมตร / z 306.1? 137.0
และ 273.0? 257.8 ถูกนำมาเป็นปริมาณมวลและการเปลี่ยนแปลง
ของม. / z 306.1? 170.1 และ 273.0? 229.9 ถูกนำมาเป็นรอบคัดเลือก
สำหรับ 1 และ 3 ตามลำดับดังแสดงในรูป 4. เท่าที่เห็นในรูปที่ 4 ไอออน
ยอดเขาถูกแยกออกอย่างพอเพียงและ 1 และ 3 มีอยู่ในทุก
ตัวอย่าง ค่าปริมาณของ 1 และ 3 พบว่ามี
8.30 LG / ลิตรและ 2.31 ​​มิลลิกรัม / ลิตรตามลำดับ เมื่อเทียบกับ 1, 3 ถูก
พบว่ามีอยู่ในความเข้มข้นที่สูงขึ้นในสารสกัดจากทั้งหมด.
ยวดรายงานวิธีการในปัจจุบันสำหรับการใช้งานครั้งแรกของ chromolith
คอลัมน์ C-18 และ (MRM) LC-ESI-MS / MS สำหรับการแยก
และการหาปริมาณของ capsaicin มัลติพัฒนา LC-ESIMS /
MS วิธีการสามารถนำไปใช้เป็นวิเคราะห์ได้อย่างรวดเร็วและที่สำคัญ
เครื่องมือสำหรับการวิเคราะห์ 1 และ 3 ในที่ที่มีความเป็นไปได้อื่น ๆ
องค์ประกอบ.
กิจกรรมทางชีวภาพ
ผสม 3 แสดงให้เห็นว่ากิจกรรมการยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญ
เมื่อเทียบกับเซลล์มะเร็งของมนุษย์ที่แตกต่างกัน (ตารางที่ 2) ในการที่มนุษย์
โรคมะเร็งเม็ดเลือดขาว promyelocytic เซลล์ HL-60 พบว่าส่วนใหญ่
มีความสำคัญที่มีค่า IC50 85 LM ดังนั้นเราจึงเลือกที่ HL-
เซลล์ 60 สำหรับการศึกษาต่อไปในวันที่ 3
เฟสกล้องจุลทรรศน์คมชัดและการย้อมสี Hoechst 33258
เหนี่ยวนำ Apoptosis 3 ถูกตรวจสอบผ่านขั้นตอนทางตรงกันข้าม
กล้องจุลทรรศน์และการย้อมสี Hoechst ร่างกาย apoptotic ได้
อย่างมีนัยสำคัญที่มองเห็นได้ในเซลล์รับการรักษาด้วยความเข้มข้น 200 LM ของ
3 เป็นเวลา 72 ชั่วโมง (รูป. 5A และ B) สารประกอบ 3 ที่ 200 lm ความเข้มข้น
ที่เกิดจากความผิดปกติของผนังเซลล์, การหดตัวของขนาดของเซลล์ควบแน่นนิวเคลียร์
และการก่อตัวของร่างกาย apoptotic กระจายอยู่ตามที่แสดง
โดยลูกศรสีขาวในรูป 5A และ B ในขณะที่นิวเคลียสของเซลล์ที่ได้รับการรักษา
มีสุขภาพดีและรอบในรูปร่าง จำนวนของร่างกายที่เกิด apoptosis เพิ่มขึ้น
มีความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นของ 3 HL-60 เซลล์.
วัดเมมเบรนยลศักยภาพ
การดูดซึมโรดามีน-123 เข้าสู่ mitochondria ถูกขับเคลื่อนโดยยล
รนที่มีศักยภาพ (วมต) การสูญเสียของวมตจะนำไปสู่
​​การสลับขั้วของเยื่อยลยลและ
นำไปสู่ความผิดปกติของการตายของเซลล์ สารประกอบ 3 เหนี่ยวนำให้เกิดการสูญเสียของยล
เมมเบรนที่มีศักยภาพ (MMP) ใน HL-60 ปริมาณเซลล์ใน
ลักษณะขึ้น (รูป. 5C) การสูญเสียของเมมเบรนยล
ที่มีศักยภาพยังออกโปรปัจจัย apoptotic หลายอย่างที่เปิดใช้งาน
caspases และในที่สุดก็ก่อให้เกิดการตายของเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปริมาณของ capsaicin โดย LC MS / MS ( ESI )
lc-esi-ms / MS เป็นวิธีผ่าน mrm ได้รับการพัฒนาเพื่อการใช้ และปริมาณ
1 และ 3 ที่ 11.22 และ
12.35 นาทีสกัด ( รูปที่ 3 ) เลือกสรรและความไวของ
( mrm ) lc-esi-ms / MS อาศัยการประยุกต์ใช้ mrm ซึ่งแต่ละประจุ สารตั้งต้นให้


รายละเอียดสินค้าชัดเจนการเปลี่ยนแปลงที่วินิจฉัยสถานะของ comtrpound เฉพาะในการแยก การเปรียบเทียบกลิ่นของว่าง
และสารมาตรฐานแหลมพบไม่พบการรบกวน
ที่เวลากักของตรวจสอบสาร ใน
ปรับวิธี chromolith rp18e เสาหินชนิดคอลัมน์
( 50  4.6 มม. ) ใช้สำหรับแยกที่ 1 และ 3
การปรากฏตัวของ 1 และ 3 ได้ตรวจด้วย
fragmentography มวลที่ใช้สอง mrm เปลี่ยน มาตรฐานการฉีดโดยใช้
LC โดยคอลัมน์ ( ผ่านสหภาพ ) ควบคุมโดยมวลนักล่า
เวิร์กสเตชันซอฟต์แวร์ ver . b.04.00 สำหรับการเพิ่มประสิทธิภาพคุณภาพ
กลิ่นของมวลของ mrm เปลี่ยน m / z 306.1 ? และ 137.0
273.0 ? 257.8 ถ่ายเป็นปลัดทูลฉลองและการเปลี่ยนแปลงมวล
M / Z 306.1 ? และ 170.1 273.0 ?229.9 ถ่ายตอนรอบคัดเลือก
1 และ 3 ตามลำดับ ดังแสดงในรูปที่ 4 เท่าที่เห็นใน figure-4 ไอออน
ยอดเป็นเพียงพอ แยกจากกัน , 1 และ 3 ที่เป็นปัจจุบันในทุก
ตัวอย่าง โดยวัดค่าของ 1 และ 3 พบเป็น
8.30 LG / L และ 2.31 มิลลิกรัม / ลิตร ตามลำดับ ในการเปรียบเทียบกับ 1 , 3
พบเป็นปัจจุบันในความเข้มข้นสูงสารสกัดทั้งหมด .
โดยปัจจุบันวิธีการรายงานครั้งแรกใช้คอลัมน์ chromolith
- ( mrm ) lc-esi-ms / MS เพื่อแยก และปริมาณของแคปไซซิน
. การพัฒนามัลติ lc-esims /
นางสาววิธีสามารถจะใช้เป็นเครื่องมือวิเคราะห์ที่รวดเร็วและความไวในการวิเคราะห์
1 และ 3 ในการแสดงตนขององค์ประกอบที่สุด


กิจกรรมทางชีวภาพอื่น ๆสารต่อต้านการเกิดอนุมูลอิสระอย่างมีนัยสำคัญ
3 กิจกรรมสายมนุษย์เซลล์มะเร็งต่าง ๆ ( ตารางที่ 2 ) ซึ่งในมะเร็งเม็ดเลือดขาวด้วยคน
hl-60 เซลล์พบว่ามีความไวมากที่สุดด้วยค่า
ic50 85 อิม ดังนั้นเราจึงเลือก HL -
60 ไพรที ในการศึกษา 3 .
/ ความคมชัดและระยะ Hoechst 33258 staining
เกิดการเหนี่ยวนำโดย 3 คือตรวจสอบผ่านกล้องจุลทรรศน์ตรงกันข้าม
เฟสและ Hoechst staining ศพถูกมองเห็นได้ในกลุ่มที่มีระดับเซลล์
ได้รับ 200 โดยความเข้มข้นของ
3 สำหรับ 72 ชั่วโมง ( รูปที่ 43 และ B ) สารประกอบ 3 ที่ความเข้มข้น 200 LM
ทำให้ผนังเซลล์ของการหดตัวของขนาดเซลล์
การควบแน่นนิวเคลียร์และการกระจายอยู่ในกลุ่มที่มีร่างกายเป็น