Genomic DNA was isolated from blood

Genomic DNA was isolated from blood samples by the phenol-chloroform method. Amplifications of fragments of the promotor of PRL and all the exons of PRLR were by PCR. Primers (Table 1) were designed according to the sequence of PRL (GenBank accession no. AB011434) and PRLR (GenBank accession no. AY237377 and AY237376) using the online primer design procedure, Primer 3.0.3 The 20-μL PCR volume included 50 ng of DNA template, 0.20 mM deoxynucleoside triphosphate, 2.5 mM MgCl2, 0.20 mM primer, and 0.5 U of Taq DNA polymerase.4 The PCR protocol was 94°C for 5 min fol- lowed by 35 cycles of 94°C for 1 min, 57°C for 1 min, and 72°C for 1 min and a final extension at 72°C for 10 min. The PCR products of PRL and PRLR were genotyped by single-stranded conformational polymorphism.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Genomic DNA ถูกแยกต่างหากจากตัวอย่างเลือด โดยวิธีวางคลอโรฟอร์ม Amplifications ชิ้นส่วนของ promotor ของ PRL และ exons ทั้งหมดของ PRLR โดย PCR ได้ ไพรเมอร์ (ตาราง 1) ถูกออกแบบตามลำดับของ PRL (GenBank ทะเบียนไม่ AB011434) และ PRLR (GenBank ทะเบียนไม่ AY237377 และ AY237376) โดยใช้กระบวนการออกแบบพื้นที่ออนไลน์ รองพื้น 3.0.3 20 μL PCR ปริมาตรรวม 50 ng ของดีเอ็นเอต้นแบบ 0.20 มม. deoxynucleoside โนซีนไตรฟอสเฟต 2.5 มม. MgCl2, 0.20 มม.รองพื้น และ 0.5 polymerase.4 U Taq DNA PCR โพรโทคอลถูก 94 ° C สำหรับ 5 นาที fol - lowed โดยรอบ 35 94 องศาเซลเซียสใน 1 นาที 57 องศาเซลเซียสใน 1 นาที และ 72 องศาเซลเซียส 1 นาทีและส่วนขยายเป็นขั้นสุดท้ายที่ 72° C สำหรับ 10 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR PRL และ PRLR ถูก genotyped โดยควั่นเดียว conformational โพลีมอร์ฟิซึม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอที่แยกได้จากตัวอย่างเลือดโดยวิธีการฟีนอลคลอโรฟอร์ม เครื่องขยายเสียงของชิ้นส่วนของโปรโมเตอร์ของ PRL และ exons ทั้งหมดของ PRLR ได้โดยวิธี PCR ไพรเมอร์ (ตารางที่ 1) ได้รับการออกแบบตามลำดับของ PRL (การภาคยานุวัติ GenBank ไม่มี. AB011434) และ PRLR (GenBank เข้า no. AY237377 และ AY237376) โดยใช้ขั้นตอนการออกแบบไพรเมอร์ออนไลน์รองพื้น 3.0.3 ปริมาณ PCR 20 ไมโครลิตรรวม 50 งะแม่แบบดีเอ็นเอ 0.20 มิลลิ deoxynucleoside triphosphate 2.5 มิลลิ MgCl2 ไพรเมอร์ 0.20 มิลลิและ 0.5 U ดีเอ็นเอ Taq polymerase.4 โปรโตคอล PCR เป็น 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีไปนี้ lowed 35 รอบของ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที 57 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีและนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR ของ PRL และ PRLR ถูก genotyped โดยหลายรูปแบบโครงสร้างเดียวควั่น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอที่แยกได้จากตัวอย่างเลือดจากฟีนอลด้วยวิธี amplifications ของชิ้นส่วนของโปรโมเตอร์ของ PRL และทั้งหมดที่มีของ prlr โดย PCR ไพรเมอร์ ( ตารางที่ 1 ) ได้รับการออกแบบตามลําดับของฮอร์โมน ( ขนาดหนังสือไม่ ab011434 ) และ prlr ( ขนาดและการไม่ ay237377 ay237376 ) ออนไลน์โดยใช้วิธีการออกแบบไพรเมอร์ 3.03 20 - μ l ) ปริมาณรวม 50 นาโนแม่แบบดีเอ็นเอ ไตรฟอสเฟต deoxynucleoside 0.20 มม. ชุด 2.5 มม. รองพื้น 0.20 มม. และ 0.5 U ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรสได้ดี 4 pcr โพรโทคอลคือ 94 °องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีสีขาว - lowed 35 รอบ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที , 57 องศาซี 1 นาที , และ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาทีและขยายสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 10 นาทีการตรวจฮอร์โมน prlr เป็นผลิตภัณฑ์และ genotyped เดียวโดยติดในรูปแบบ .