E. coli M15 harboring the gene of d

E. coli M15 harboring the gene of d-pflp, d-pflp-GC or dpflp-A549 was incubated in LB medium (Difco, USA) with 100 mg/ml ampicillin and 25 mg/ml kanamycin at 37 8C respectively. When the culture reached an absorbance of 0.6 at A600, isopropylthio-b-D-galactoside induction was given to a final concentration of 1 mM. Cells were harvested after 4 h incubation at 37 8C. Protein was purified with Ni-NTA resin spin kit (Qiagen) in native condition according to the manufacturer instruction. The imidazole residue was removed by P6 gel spin column (Bio-Rad) and the eluting product was dialyzed against 10 mM sodium phosphate buffer (pH 7.0). Purified protein was analyzed in 15% SDS-PAGE.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

E. coli M15 harboring ยีน d pflp, d-pflp-GC หรือ dpflp A549 incubated ในปอนด์ (Difco สหรัฐอเมริกา) กับ 100 mg/ml โกคอและ 25 mg/ml กานามัยซินที่ 37 8C ตามลำดับ เมื่อวัฒนธรรมการค่าของ 0.6 ที่ A600, isopropylthio-b-D-galactoside เหนี่ยวนำให้เข้มข้นสุดท้าย 1 mM เซลล์ถูกเก็บเกี่ยวหลังจาก 4 ชั่วโมงบ่มที่ 37 8C. โปรตีนบริสุทธิ์ ด้วยชุดสปินเรนิ NTA (Qiagen) ในสภาพท้องถิ่นตามคำแนะนำของผู้ผลิต สารอิมิดาโซลถูกเอาออก โดยคอลัมน์หมุนเจ P6 (Bio-ล้อ) และผลิตภัณฑ์ eluting ถูก dialyzed กับ 10 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) โปรตีนบริสุทธิ์ 15% SDS-หน้า

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

E. coli M15 เก็บงำยีน D-PFLP ที่ D-PFLP-GC หรือ dpflp-A549 ถูกบ่มใน LB กลาง (Difco, สหรัฐอเมริกา) 100 มก. / ampicillin มล. และ 25 mg / ml กานามัยซิ 8C ที่ 37 ตามลำดับ เมื่อวัฒนธรรมถึงการดูดกลืนแสงที่ 0.6 A600, isopropylthio-BD-galactoside เหนี่ยวนำที่ได้รับความเข้มข้นสุดท้ายของ 1 มิลลิ เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวหลังจาก 4 ชั่วโมงบ่มที่ 37 8C โปรตีนบริสุทธิ์กับ Ni-NTA ชุดเรซินสปิน (Qiagen) ในสภาพพื้นเมืองตามคำแนะนำของผู้ผลิต ที่เหลือ imidazole ถูกลบออกโดย P6 เจลปั่นคอลัมน์ (Bio-Rad) และสินค้า eluting ถูก dialyzed กับ 10 มิลลิบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต (pH 7.0) โปรตีนบริสุทธิ์ได้รับการวิเคราะห์ใน 15% SDS-PAGE