dark-adapted during the night, resp

dark-adapted during the night, respectively, according to the
equations developed by Van Kooten and Snel [17].
2.3. Photosynthetic pigments and tocopherols
The extraction and HPLC analyses of photosynthetic pigments
and tocopherols were carried out as described [18]. In short, for
extraction of photosynthetic pigments and tocopherols, lyophilized
leaf samples were ground in liquid nitrogen and repeatedly
extracted with ice-cold methanol using sonication until the extract
was colorless. Pigments were separated on a nonendcapped Zorbax
ODS-5 mm column (250 mm  4.6 mm, 20% C, Teknokroma, St.
Cugat del Valle´ s, Spain) at 30 8C at a flow rate of 1 mL min1
. The
solvents consisted of (A) acetonitrile:methanol (85:15, v/v) and (B)
methanol:ethyl acetate (68:32, v/v). The gradient used was: 0–
14 min, 100% A; 14–16 min, decreasing to 0% A; 16–28 min, 0% A;
28–30 min, increasing to 100% A; and 30–38 min, 100% A. Detection
was carried out at 445 nm (Diode array detector, HP1100 Series
HPLC System; Agilent Technologies, Santa Clara, CA). Tocopherols
(a- and g-tocopherol, and their respective oxidation products, aand
g-tocopherol quinone) were separated on a Partisil 10 ODS-3
column (250 mm  4.6 mm, Scharlau, Barcelona, Spain) at a flow
rate of 1 mL min1
. The solvents consisted of (A) methanol:water
(95:5, v/v) and (B) methanol. The gradient used was: 0–10 min, 100%
A; 10–15 min, decreasing to 0% A; 15–20 min, 0% A; 20–23 min,
increasing to 100% A; and 23–28 min, 100% A. Detection was carried
out at 295 and 256 nm for a- and g-tocopherol, and their respective
quinones, respectively (Diode array detector, HP1100 Series HPLC
System; Agilent Technologies, Santa Clara, CA).
2.4. Phytohormone analyses
The extraction and analyses of ABA and SA were carried out
essentially as described [19], except that UPLC–MS/MS was used
instead of HPLC–MS/MS, thus allowing us to considerably shorten
the run time for each sample. Lyophilized leaf samples were
ground in liquid nitrogen and repeatedly extracted with ice-cold
methanol using sonication until the extract was colorless. Then the
extracts were combined, filtered through a 0.45 mm PTFE filter
(Waters, Milford, MA, USA), and injected into the UPLC–MS/MS
system.
The UPLC system consisted of Acquity Waters (Millford, MA,
USA) binary pump equipped with an autosampler and an UV
detector. For the analysis of the extracts, a Supelco Discovery C18
(Bellefonte, PA, USA) column (150 mm  2.1 mm, 5 mm) was used
with a binary solvent system comprising acetonitrile (A) and
deionized water (B), both containing 0.05% (v/v) glacial acetic acid.
Separations were performed using a gradient of increasing
acetonitrile content, at a constant flow rate of 0.4 ml min1
. The
gradient was increased linearly from 1.4% to 45.4% A over 20 min
and held for 1 min. The acetonitrile content was then increased
linearly to 100% A over 2 min. After 0.5 min, the initial conditions
were restored and allowed to equilibrate for 2 min before next
injection.
MS/MS analyses were performed on an API 3000 triple
quadrupole mass spectrometer (PE Sciex, Concord, Ont., Canada).
All the analyses were performed using the Turbo Ion spray source
in negative ion mode in a single run. MRM acquisition was done
monitoring the following transitions: ABA, 263/153; SA, 137/93.
Quantification by MS/MS using the MRM method was performed
as described [19]. The MRM mode was required because many
compounds could present the same nominal molecular mass, but
the combination of the parent mass and unique fragment ions was
used selectively tomonitor each of the compounds analyzed. Results
were corrected taking into account the specific recovery rates for
each compound (recovery rates were above 80% in all cases).
2.5. Statistical analyses
Statistical differences between treatments and measurements
on different days or on different times of the day were analyzed
following the analysis of variance ANOVA or Student’s t-test using
SPSS. Regression analyses were performed by using Sigma Plot.
Differences were considered significant at a probability level of
P  0.05.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

dark-adapted ในตอนกลางคืน ตามลำดับ ตามต้องการสมการที่พัฒนา โดย Van Kooten และ Snel [17]2.3. photosynthetic สีและ tocopherolsการสกัดและวิเคราะห์ HPLC ของ photosynthetic สีและ tocopherols ได้ดำเนินการอธิบาย [18] ในระยะสั้น สำหรับสกัดสี photosynthetic และ tocopherols, lyophilizedตัวอย่างใบถูกดิน ในไนโตรเจนเหลว และซ้ำ ๆสกัด ด้วยเมธานอฉ่ำ sonication จนถึงการดึงข้อมูลโดยใช้มีสีซีด มีแยกสีบน nonendcapped Zorbaxคอลัมน์ ODS-5 มม. (250 มม 4.6 มม. 20% C, Teknokroma เซนต์ซังคูกัดเดล Valle´ s สเปน) ที่ 8C 30 ที่อัตราการไหลของ min1 1 mL. ที่หรือสารทำละลายประกอบด้วย (A) acetonitrile:methanol (85:15, v/v) และ (B)acetate: เอทิลเมทานอล (68:32, v/v) ระดับสีที่ใช้ได้: 0 –14 นาที 100% A ต่ำสุด 14-16 การลดลงเป็น 0% A 16 – 28 นาที 0% A28 – 30 นาที เพิ่ม 100% A และ 30 – 38 นาที ตรวจหา A. 100%มีดำเนินการที่ 445 nm (ไดโอดอาร์เรย์จับ HP1100 ชุดระบบ HPLC Agilent เทคโนโลยี ซานตาคลารา CA) Tocopherols(a - และ g-tocopherol และผลิตภัณฑ์เกี่ยวข้องออกซิเดชัน aandg-tocopherol quinone) ถูกคั่นในตัว Partisil 10 ODS-3คอลัมน์ (250 มม. 4.6 mm, Scharlau บาร์เซโลนา สเปน) ในขั้นตอนการอัตรา min1 1 mL. หรือสารทำละลายประกอบด้วยเมทานอล: น้ำ (A)(95:5, v/v) และเมทานอล (B) ระดับสีที่ใช้ได้: 0 – 10 นาที 100%A 10 – 15 นาที ลดลงเป็น 0% A 15 – 20 นาที 0% A ต่ำสุด 20-23เพิ่มเป็น 100% A และ 23 – 28 นาที 100% ทำการตรวจหา A.ออกจากที่ 295 และ 256 nm ได้ - และ g-tocopherol และผู้เกี่ยวข้องquinones ตามลำดับ (ไดโอดอาร์เรย์จับ HP1100 ชุด HPLCระบบ Agilent เทคโนโลยี ซานตาคลารา CA)2.4 วิเคราะห์ phytohormoneการสกัดและวิเคราะห์ของ ABA และ SA ได้ดำเนินการหลักอธิบาย [19], ยกเว้นที่ UPLC – MS/MS ใช้แทน HPLC – MS/MS จึงทำให้เราย่นมากเวลาที่ใช้สำหรับแต่ละตัวอย่าง ตัวอย่างใบ lyophilized ดีพื้นในไนโตรเจนเหลว และสกัดซ้ำ ด้วยความฉ่ำเมทานอลโดยใช้ sonication จนกว่าการดึงข้อมูลไม่มีสี นั้นบางส่วนได้รวม กรองผ่านตัวกรองไฟเบอร์ 0.45 มม.(น้ำ ลฟอร์ด MA, USA), และฉีดเข้าไปใน UPLC – MS/MSระบบระบบ UPLC ประกอบด้วยน้ำ Acquity (Millford, MAสหรัฐอเมริกา) ปั๊มฐานการ autosampler และมี UVเครื่องตรวจจับ สำหรับการวิเคราะห์สารสกัดจาก C18 เป็นค้นพบ Supelcoใช้คอลัมน์ (Bellefonte, PA สหรัฐอเมริกา) (150 mm 2.1 mm, 5 mm)ด้วยระบบตัวทำละลายนารีประกอบด้วย acetonitrile (A) และdeionized น้ำ (B), กรดอะซิติกน้ำแข็ง 0.05% (v/v) ทั้งที่มีประโยชน์ได้ดำเนินการโดยใช้การไล่ระดับสีเพิ่มเนื้อหา acetonitrile ที่อัตราไหลคง min1 0.4 ml. ที่ไล่ระดับขึ้นเชิงเส้นจาก 1.4% 45.4% A กว่า 20 นาทีและจัดขึ้นใน 1 นาที เนื้อหา acetonitrile แล้วเพิ่มขึ้นเชิงเส้นการ 100% A กว่า 2 นาที หลังจาก 0.5 นาที เงื่อนไขเริ่มต้นเรียกคืน และอนุญาตให้ equilibrate สำหรับ 2 นาทีก่อนถัดไปฉีดดำเนินในทริ 3000 API การวิเคราะห์ MS/MSquadrupole โดยรวมสเปกโตรมิเตอร์ (Sciex PE คอนคอร์ด Ont. แคนาดา)วิเคราะห์ทั้งหมดที่ดำเนินการโดยใช้ต้นพ่นไอออนเทอร์โบในโหมดไอออนลบในรันหนึ่งครั้ง ทำ MRM ซื้อตรวจสอบการเปลี่ยนต่อไปนี้: ABA, 263/153 SA, 137/93ทำการนับ โดย MS/MS ใช้วิธี MRMเป็นอธิบาย [19] โหมด MRM ไม่จำเป็นเนื่องจากหลายสารสามารถนำเสนอแบบเดียวกันระบุโมเลกุลมวล แต่มีทั้งประจุโดยรวม และเฉพาะส่วนหลักเลือกใช้ tomonitor แต่ละสารที่วิเคราะห์ ผลลัพธ์ได้แก้ไขคำนึงราคากู้คืนเฉพาะสำหรับแต่ละบริเวณ (กู้ราคาถูกข้าง 80% ในทุกกรณี)2.5. สถิติวิเคราะห์ความแตกต่างทางสถิติระหว่างการรักษาและประเมินในวันที่แตกต่างกัน หรือแตกต่างกันได้วิเคราะห์เวลาของวันวิธีวิเคราะห์ความแปรปรวนการวิเคราะห์ความแปรปรวนหรือการใช้ t-ทดสอบของนักเรียนโปรแกรม วิเคราะห์การถดถอยได้ทำโดยซิกมาพล็อตความแตกต่างได้ถืออย่างมีนัยสำคัญที่ระดับความน่าเป็นP 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เข้มปรับตัวในช่วงเวลากลางคืนตามลำดับตามสมการพัฒนาโดยรถตู้และ Kooten Snel [17]. 2.3 เม็ดสีสังเคราะห์และ tocopherols การสกัดและวิเคราะห์ HPLC ของเม็ดสีสังเคราะห์และtocopherols ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ [18] ในระยะสั้นสำหรับการสกัดของเม็ดสีสังเคราะห์และ tocopherols, แห้งตัวอย่างใบมาบดในไนโตรเจนเหลวซ้ำแล้วซ้ำอีกสกัดด้วยเมทานอลเย็นโดยใช้sonication จนกว่าสารสกัดเป็นสี รงควัตถุถูกแยกบน nonendcapped Zorbax ODS-5 คอลัมน์มิลลิเมตร (250 มม? 4.6 มม, C 20% Teknokroma เซนต์Cugat เด Valle' วินาที, สเปน) วันที่ 30 8C ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร min1 ตัวทำละลายประกอบด้วย (A) acetonitrile: เมทานอล (85:15, v / v) และ (ข) เมทานอล: เอทิลอะซิเตท (68:32, v / v) การไล่ระดับสีที่ใช้คือ: 0- 14 นาที, 100%; 14-16 นาทีลดลงเหลือ 0%; 16-28 นาที 0%; 28-30 นาทีเพิ่มขึ้นถึง 100%; และ 30-38 นาที, 100% A. การตรวจสอบได้ดำเนินการที่445 นาโนเมตร (ตรวจจับอาร์เรย์ไดโอด, HP1100 ชุดระบบHPLC; Agilent Technologies, ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย) tocopherols (a- และ g โทโคฟีรอและผลิตภัณฑ์การเกิดออกซิเดชันของตน aand กรัมโทโคฟีรอ quinone) ถูกแยกบน Partisil 10 ODS-3 คอลัมน์ (250 มม? 4.6 มม Scharlau, บาร์เซโลนา, สเปน) ที่ไหลอัตรา1 มิลลิลิตร min1 สารละลายประกอบด้วย (A) เมทานอล: น้ำ(95: 5, v / v) และ (ข) เมทานอล การไล่ระดับสีที่ใช้คือ: 0-10 นาที, 100%; 10-15 นาทีลดลงเหลือ 0%; 15-20 นาที 0%; 20-23 นาที, เพิ่มขึ้นถึง 100%; และ 23-28 นาที, 100% A. การตรวจสอบได้ดำเนินการออกมาที่295 และ 256 นาโนเมตรสำหรับ a- และ g โทโคฟีรอและตนQuinones ตามลำดับ (เครื่องตรวจจับอาร์เรย์ไดโอด, HP1100 ชุด HPLC ระบบ; Agilent Technologies, ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย ). 2.4 phytohormone วิเคราะห์การสกัดและการวิเคราะห์ของABA และ SA ได้ดำเนินการเป็นหลักตามที่อธิบายไว้[19] ยกเว้นว่า UPLC-MS / MS ถูกนำมาใช้แทนการHPLC-MS / MS จึงช่วยให้เรามากลดระยะเวลาการทำงานสำหรับแต่ละตัวอย่าง ตัวอย่างแห้งใบพื้นดินในไนโตรเจนเหลวซ้ำแล้วซ้ำอีกและสกัดด้วยน้ำแข็งเย็นเมทานอลโดยใช้สารสกัดจากsonication จนเป็นสี จากนั้นสารสกัดมารวมกันกรองผ่าน 0.45 มมกรอง PTFE (Waters, ฟอร์ด, MA, USA) และฉีดเข้าไปใน UPLC-MS / MS ระบบ. ระบบ UPLC ประกอบด้วย Acquity น้ำ (Millford, MA, USA) ปั๊มไบนารี พร้อมกับฉีดตัวอย่างอัตโนมัติและรังสียูวีตรวจจับ สำหรับการวิเคราะห์ของสารสกัดที่เป็น Supelco การค้นพบ C18 (เบลลาฟอน, PA, สหรัฐอเมริกา) คอลัมน์ (150 มม? 2.1 มิลลิเมตร 5 มิลลิเมตร) ถูกนำมาใช้กับระบบตัวทำละลายไบนารีประกอบacetonitrile (A) และน้ำปราศจากไอออน(B) ทั้งที่มี 0.05% (v / v) กรดอะซิติกน้ำแข็ง. แยกถูกดำเนินการโดยใช้การไล่ระดับสีของการเพิ่มเนื้อหา acetonitrile ในอัตราการไหลคงที่ 0.4 มล. min1 ลาดเพิ่มขึ้นเป็นเส้นตรงจาก 1.4% สู่ 45.4% ในช่วง 20 นาทีและจัดขึ้นเป็นเวลา1 นาที เนื้อหา acetonitrile เพิ่มขึ้นนั้นเป็นเส้นตรงถึง100% ในช่วง 2 นาที หลังจากที่ 0.5 นาที, เงื่อนไขเริ่มต้นได้รับการบูรณะและได้รับอนุญาตให้สมดุลเป็นเวลา2 นาทีก่อนที่จะต่อไปฉีด. MS / MS วิเคราะห์ได้ดำเนินการใน API 3000 สามสเปกโตรมิเตอร์มวลquadrupole (PE Sciex, คองคอร์ด, Ont., แคนาดา). การวิเคราะห์ทั้งหมดได้ ดำเนินการโดยใช้แหล่งเทอร์โบไอออนสเปรย์ในโหมดไอออนลบในการทำงานครั้งเดียว การเข้าซื้อกิจการ MRM ได้ทำการตรวจสอบการเปลี่ยนต่อไปนี้: ABA, 263/153; SA, 137/93. ปริมาณโดย MS / MS โดยใช้วิธีการ MRM ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้[19] โหมด MRM ที่ถูกต้องเพราะหลายสารประกอบสามารถนำเสนอมวลโมเลกุลเดียวกันเล็กน้อยแต่การรวมกันของมวลผู้ปกครองและไอออนส่วนที่ไม่ซ้ำกันคือใช้การคัดเลือก tomonitor แต่ละสารประกอบวิเคราะห์ ผลการได้รับการแก้ไขโดยคำนึงถึงอัตราการฟื้นตัวที่เฉพาะเจาะจงสำหรับแต่ละสารประกอบ(อัตราการฟื้นตัวอยู่เหนือ 80% ในทุกกรณี). 2.5 สถิติการวิเคราะห์ความแตกต่างทางสถิติระหว่างการรักษาและการวัดในวันที่แตกต่างกันหรือในเวลาที่ต่างกันของวันที่ได้มาวิเคราะห์ต่อไปนี้การวิเคราะห์ความแปรปรวนANOVA หรือนักเรียน t-test โดยใช้โปรแกรมSPSS การวิเคราะห์การถดถอยได้ดำเนินการโดยใช้ซิกแปลง. ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญได้รับการพิจารณาในระดับที่น่าจะเป็นของP? 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สีเข้มเหมาะในช่วงกลางคืน ตามลำดับ ตามสมการ kooten
พัฒนาโดยรถตู้ และ snel [ 17 ] .
2.3 สีและแสงโทโคฟีรอล
การสกัดและ HPLC วิเคราะห์
สีสังเคราะห์แสงโทโคฟีรอลและได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ [ 18 ] ในระยะสั้นสำหรับการสกัดสีย้อมสังเคราะห์แสง และโทโคฟีรอล
,
เทอร์ตัวอย่างใบถูกบดในไนโตรเจนเหลว และซ้ำๆ สกัดด้วยเมทานอล โดยใช้น้ำแข็งเย็น

sonication จนแยกเป็นไม่มีสี สีจากกันใน nonendcapped zorbax
ods-5 มม. คอลัมน์ ( 250 มม.  4.6 มม. 20 % C , teknokroma St .
Cugat del Valle ใหม่ , สเปน ) ที่ 30 8C ที่อัตราการ ไหลของ
min1 1 ml .
ตัวทำละลายประกอบด้วย ( ก ) ไน : เมทานอล ( 85:15 , v / v ) และ ( b )
เมทานอล :เอทิลอะซิเตท ( 68:32 , V / V ) การไล่ระดับสีใช้ : 0 –
14 นาที 100% ; 14 – 16 นาที ลดลงเป็น 0% ; 16 – 28 นาที 0 % A ;
28 – 30 นาที เพิ่มถึง 100% และ 30 - 38 นาที 100 % A .
ทำการตรวจจับที่ 445 nm ( ไดโอดอาร์เรย์เครื่อง , ชุด hp1100
2 ระบบ Agilent Technologies , ซานตา คลาร่า , แคลิฟอร์เนีย ) โทโคฟีรอล
( - g-tocopherol และผลิตภัณฑ์ของตนและ
ออกซิเดชันg-tocopherol ควิโนน ) ถูกแยกเป็น partisil 10 ods-3
คอลัมน์ ( 250 มม.  4.6 มม. scharlau , บาร์เซโลนา , สเปน ) ที่อัตราการไหล

min1 1 ml . ละลาย ประกอบด้วย ( ก ) เมทานอล : น้ำ
( 95:5 , v / v ) และ ( ข ) เมทานอล การไล่ระดับสีใช้ : 0 – 10 นาที 100 %
; 10 – 15 นาที ลดเป็น 0 % A ; 15 – 20 นาที , 0 % A ; 20 – 23 min
เพิ่ม 100% ; 23 – 28 นาที 100% สามารถแบก
Aออกที่ 295 และ 256 nm สำหรับ - และ g-tocopherol และตน
ควินโนเนส ตามลำดับ ( ไดโอดอาร์เรย์เครื่อง , ชุด hp1100 ระบบ HPLC
; Agilent Technologies , ซานตา คลาร่า , แคลิฟอร์เนีย )
2.4 . phytohormone วิเคราะห์
การสกัดและการวิเคราะห์การเงิน และ ซา ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ [ 19 ]
เป็นหลัก ยกเว้นว่า uplc – MS / MS ที่ใช้
แทน HPLC MS / MS ) จึงช่วยให้เราสามารถมากลด
เวลาที่ใช้สำหรับแต่ละตัวอย่าง แห้งตัวอย่างใบ
พื้นดินในไนโตรเจนเหลวและซ้ำ ๆที่สกัดด้วยเมทานอล โดยใช้น้ำแข็งเย็น
sonication จนแยกเป็นไม่มีสี จากนั้น
สารสกัดร่วม กรองผ่าน 0.45 มม. PTFE กรอง
( น้ำที่ Milford , MA , USA ) และฉีดเข้าไปใน uplc – MS / MS

ระบบ ระบบ uplc ประกอบด้วย acquity น้ำ ( millford , MA ,
สหรัฐอเมริกา ) ปั๊มไบนารีพร้อมกับ autosampler และ UV
เครื่องตรวจจับ สำหรับการวิเคราะห์สารสกัด , supelco ค้นพบ c18
( bellefonte , PA , USA ) คอลัมน์ ( 150 มม.  2.1 มม. 5 มม. ) ที่ใช้กับระบบไบนารีประกอบด้วยตัวทำละลาย

คล้ายเนื้อเยื่อประสานไน ( ) และน้ำ ( b ) ทั้งสองที่มี 0.05 % ( v / v ) กรดแอซีติก . การใช้สีแยก

ไนเพิ่มเนื้อหาที่อัตราการไหลคงที่ของ 0.4 มล. min1


ลาดเพิ่มขึ้นเป็นเส้นตรงจาก 1.4% ต่อ % มากกว่า 20 นาที
และจัดขึ้น 1 นาทีแล้วเพิ่มปริมาณไน
นำ 100% กว่า 2 นาทีหลังจากที่ 0.5 มิน
เงื่อนไขเบื้องต้นที่ถูกบูรณะและอนุญาตให้สมดุลกัน 2 นาทีก่อนฉีดต่อไป
.
/ MS / MS จำนวน API 3000 สาม
Mass Spectrometer ( คำ sciex Concord , PE , ONT . , Canada ) .
วิเคราะห์ทั้งหมดคือการใช้ Turbo ไอออนสเปรย์แหล่ง
ในโหมดไอออนลบในระยะเดียว การตรวจสอบการเปลี่ยน mrm า
ต่อไปนี้ : ABA , 263 / 153 ; ซา , 137 / 93 .
ปริมาณโดย MS / MS โดยใช้วิธีการตามที่ mrm
[ 19 ] โหมด mrm ถูกต้องเพราะมาก
สารประกอบสามารถนำเสนอเดียวกันระบุมวลโมเลกุล แต่การรวมกันของแม่

ส่วนมวลและประจุซ้ำได้ใช้เลือก tomonitor แต่ละสารวิเคราะห์ ผลลัพธ์
ถูกแก้ไขโดยคำนึงถึงอัตราการกู้คืนเฉพาะ
สารแต่ละ ( อัตราการกู้คืนได้มากกว่า 80% ทุกกรณี ) .
2.5 การวิเคราะห์สถิติ
ความแตกต่างกันระหว่างการรักษาและการวัด
ในวันที่แตกต่างกันหรือในเวลาที่แตกต่างกันของวัน วิเคราะห์
ต่อไปนี้การวิเคราะห์ความแปรปรวน ANOVA และ t-test โดยใช้โปรแกรมสำเร็จรูปของนักเรียน
. การวิเคราะห์การถดถอยได้ใช้พล็อต Sigma .
แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ระดับพิจารณาความน่าจะเป็น
p
 0.05