After introduction of the mutagenes

After introduction of the mutagenesis plasmids into competent L. plantarum WCFS1, cells were plated on MRS containing 10 μg·ml−1 chloramphenicol. After 48 h, double-crossover deletion mutants were initially selected by colony PCR using primer pairs M plus O and N plus P (named 87 [34]) for ctsR and K plus O and L plus P for hrcA (see Table S2).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลังจากแนะนำของ mutagenesis plasmids เข้าสู่อำนาจบาซิลลัส L. WCFS1 เซลล์ถูกชุบบน MRS ที่ประกอบด้วย 10 μg·ml−1 คคัส หลังจาก 48 ชั่วโมง การลบคู่ไขว้สายพันธุ์ครั้งแรกได้รับเลือกจากอาณานิคม PCR โดยใช้ไพรเมอร์คู่ M และ O และ N บวก P (ชื่อ 87 [34]) สำหรับ ctsR และ K บวก O และ L บวก P สำหรับ hrcA (ดูตาราง S2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลังจากการแนะนำของพลาสมิดฉับเข้าสู่อำนาจ L. plantarum WCFS1 เซลล์ถูกชุบบน MRS บรรจุ 10 ไมโครกรัม· ML-1 chloramphenicol หลังจาก 48 ชั่วโมงสองครั้งที่ครอสโอเวอร์กลายพันธุ์ลบได้รับการคัดเลือกในขั้นแรกโดยอาณานิคม PCR โดยใช้ M คู่ไพรเมอร์บวก O และ N พลัสพี (ชื่อ 87 [34]) สำหรับ ctsR และ K บวก O และ L พลัสพีสำหรับ hrcA (ดูตาราง S2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

หลังจากการแนะนำของ L . plantarum ที่มีพลาสมิดใน wcfs1 เซลล์ถูกชุบบนนาง บรรจุ 10 กรัมต่อμด้วย− 1 ของส . หลังจาก 48 ชั่วโมง สายพันธุ์ การเลือกการลบคู่เริ่มต้นด้วยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์คู่โดยอาณานิคม O และ N และ P ( ชื่อ 87 [ 34 ] ) สำหรับ ctsr และ K บวก O และฉันบวก P สำหรับ hrca ( ตาราง S1 )