tThe polymorphism of A781G locus of

tThe polymorphism of A781G locus of the growth hormone (GH) gene was analyzed in112 Vembur sheep. HaeIII – RFLP of the GH gene (422 bp) revealed the existence of twogenotypes viz., AA (366 and 56 bp) and AB (422, 366 and 56 bp), and two alleles viz., A andB. Genotypic frequencies for AA and AB were 0.43 and 0.57, and allelic frequencies were 0.71and 0.29 for A and B respectively. BB genotype was absent. Highly significant Chi-squarevalue (P < 0.001) showed that the population is not under Hardy–Weinberg equilibrium atthe A781G locus. This indicates that molecular markers associated with embryonic survivalare to be explored for their use in MAS in Vembur population.© 2015 Elsevier B.V. All rights reserved



Materials and methods
2.1 Experimental animals
animalsBlood samples (n = 112) were collected from males and females ofyoung and adult Vembur sheep maintained at the farmers’ households inthe breeding tract (between 9◦00and 9◦30N and 77◦90and 78◦25E).Genomic DNA was extracted using standard phenol–chloroform extrac-tion procedure (Sambrook et al., 1989) with slight modifications by usingDNAzol reagent, instead of SDS and proteinase K.
2.2. Primer synthesis and PCR–RFLP reactions
The published primer sequences were used for amplification of GH(Hua et al., 2009) genes.
GH1-F 5-CTCTGCCTGCCCTGGACT-3
GH1-R 5-GGAGAAGCAGAAGGCAACC-3
Both PCR reactions were performed in a 20 l mixture containing10 pmol forward and reverse primers each, 10 l master mix which con-tained 200 M dNTP (deoxyribonucleotide phosphate), 1.5 mM MgCl2, 1unit of Taq-DNA polymerase (Sigma), and 50 ng genomic DNA as tem-plate. Gradient PCR was used to optimize the reaction accuracy: 95◦C for

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โพลิมอร์ฟิซึม tThe ของโลกัสโพล A781G ของยีนฮอร์โมนการเติบโต (GH) แกะ Vembur in112 วิเคราะห์ได้ HaeIII – RFLP ของยีน GH (422 bp) เปิดเผยการดำรงอยู่ของ twogenotypes viz., AA (bp 366 และ 56) และ AB (422, 366 และ 56 bp), และสอง alleles A viz., andB ความถี่จีโนไทป์ AA และ AB ถูก 0.43 และ 0.57 และความถี่ allelic ถูก 0.71and 0.29 สำหรับ A และ B ตามลำดับนั้น ลักษณะทางพันธุกรรมของ BB มาได้ ชี squarevalue สูงอย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.001) พบว่า ประชากรไม่สมดุล Hardy – Weinberg ที่โลกัสโพล A781G บ่งชี้ว่า เครื่องหมายโมเลกุลเกี่ยวข้องกับ survivalare ตัวอ่อนไปสำหรับใช้ในมาสใน Vembur ประชากร © 2015 Elsevier b.v สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมดวัสดุและวิธีการ2.1 สัตว์ทดลองanimalsBlood ตัวอย่าง (n = 112) ได้รวบรวมจากชายและหญิง ofyoung และผู้ใหญ่ Vembur แกะเก็บรักษาในครัวเรือนของเกษตรกรในทางเดินอาหารการผสมพันธุ์ (ระหว่าง 9◦00 และ 9◦30 N และ 77◦90 และ 78◦25 E) Genomic DNA ถูกสกัดโดยใช้มาตรฐานวาง – คลอโรฟอร์ม extrac สเตรชันกระบวน (Sambrook et al., 1989) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ด้วยรีเอเจนต์ usingDNAzol, SDS และ proteinase คุณแทน2.2 การรองพื้นการสังเคราะห์และปฏิกิริยา PCR-RFLPลำดับประกาศพื้นที่ใช้สำหรับการขยายของ GH (หัว et al., 2009) ยีนGH1-F 5 - CTCTGCCTGCCCTGGACT-3GH1-R 5 - GGAGAAGCAGAAGGCAACC-3ดำเนินทั้งสองปฏิกิริยา PCR ในการ 20 l ผสม containing10 pmol ไปข้างหน้า และย้อนกลับไพรเมอร์ละ 10 l หลักผสม (deoxyribonucleotide ฟอสเฟต) dNTP 200 M ที่คอน tained, 1.5 มม. MgCl2, 1unit ของ Taq DNA พอลิเมอเรส (ซิกมา), และดีเอ็นเอ genomic ng 50 เป็นยการแผ่น ใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความถูกต้องของปฏิกิริยา PCR ไล่ระดับ: 95◦C สำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ความแตกต่างของสถานที่ Tthe A781G ฮอร์โมนการเจริญเติบโต (GH) ยีนวิเคราะห์แกะ in112 Vembur HaeIII -.. RFLP ของยีน GH (422 bp) เปิดเผยการดำรงอยู่ของ twogenotypes ได้แก่ , AA (366 และ 56 bp) และ AB (422, 366 และ 56 bp) และอัลลีล ได้แก่ , andB ความถี่พันธุกรรมสำหรับ AA และ AB เป็น 0.43 และ 0.57 และมีความถี่ allelic 0.71and 0.29 สำหรับ A และ B ตามลำดับ จีโนไทป์ BB ก็ขาด อย่างมีนัยสำคัญสูง Chi-squarevalue (p <0.001) พบว่าประชากรที่ไม่อยู่ภายใต้ความสมดุล Hardy-Weinberg atthe สถานที่ A781G นี้บ่งชี้ว่าเครื่องหมายโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับ survivalare ตัวอ่อนที่จะสำรวจสำหรับการใช้งานของพวกเขาใน MAS ประชากร Vembur. © 2015 Elsevier BV สงวนลิขสิทธิ์วัสดุและวิธีการ2.1 สัตว์ทดลองanimalsBlood ตัวอย่าง (n = 112) ที่ถูกเก็บรวบรวมจากชายและหญิง ofyoung และผู้ใหญ่ แกะ Vembur เก็บรักษาไว้ที่ครัวเรือนเกษตรกรเบี่ยงทางเดินพันธุ์ (ระหว่าง9◦00? และ9◦30? n และ77◦90? และ78◦25? E) ดีเอ็นเอ .Genomic ถูกสกัดโดยใช้ขั้นตอนการสกัด-การมาตรฐานฟีนอลคลอโรฟอร์ม ( Sambrook et al., 1989) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยโดยน้ำยา usingDNAzol แทน SDS และโปรเค2.2 ไพรเมอร์สังเคราะห์และปฏิกิริยา PCR-RFLP ลำดับไพรเมอร์ที่ตีพิมพ์ถูกนำมาใช้สำหรับการขยายของ GH (Hua et al., 2009) ยีน. GH1-F 5? -CTCTGCCTGCCCTGGACT-3? GH1-R 5? -GGAGAAGCAGAAGGCAACC-3 ทั้งสองปฏิกิริยา PCR ได้ดำเนินการใน 20 ลิตรผสม containing10 pmol ไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์แต่ละ 10 ลิตรผสมต้นแบบซึ่งนักโทษ tained-200 M dNTP (deoxyribonucleotide ฟอสเฟต) 1.5 มิลลิ MgCl2, 1unit ของโพลิเมอร์ Taq ดีเอ็นเอ (ซิกม่า) และ 50 นาโนกรัม ดีเอ็นเอเป็น TEM จาน PCR ไล่โทนสีถูกนำมาใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความแม่นยำในการเกิดปฏิกิริยา: 95◦Cสำหรับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

, ความหลากหลายของ a781g โลกัสของยีนฮอร์โมนการเจริญเติบโต ( GH ) วิเคราะห์ in112 vembur แกะ haeiii – RFLP ของ GH ยีน ( 422 bp ) เปิดเผยการดำรงอยู่ของ twogenotypes viz . AA ( 366 และ 56 BP ) และ AB ( 422 แล้ว 56 BP ) และสองอัลลีล คือ เป็นทาง . ความถี่ทางพันธุกรรมสำหรับ AA AB เป็น 0.43 ง่ายและมีความถี่แอลลีลิก 0.71and 0.29 สำหรับ A และ B ตามลำดับบีบี พันธุกรรม จึงไม่มา ชิ squarevalue อย่างมีนัยสำคัญยิ่งทางสถิติ ( P < 0.001 ) พบว่าประชากรไม่สมดุลใน Hardy Weinberg ) ภายใต้ a781g ความเชื่อ . นี้บ่งชี้ว่า เครื่องหมายโมเลกุลที่เกี่ยวข้องกับ survivalare ตัวอ่อนที่จะสํารวจสําหรับใช้ใน Mas ในประชากร vembur . สงวนลิขสิทธิ์ 2015 สามารถนำเสนอทั้งหมดสงวนสิทธิ์



วัสดุและวิธีการทดลองสัตว์

๑ตัวอย่าง animalsblood ( n = 112 ) โดยใช้ข้อมูลจากชายและหญิง ofyoung และแกะ vembur ผู้ใหญ่ยังคงที่เกษตรกรครัวเรือนในระบบการผสมพันธุ์ระหว่าง 9 ◦ 00  และ 9 ◦ 30  N และ 77 ◦ 90  และ 78 ◦ 25  E ) จีโนมดีเอ็นเอโดยใช้มาตรฐานฟีนอลและคลอโรฟอร์มสกัดผ่านกระบวนการ ( sambrook et al . , 1989 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย โดย usingdnazol รีเอเจนต์แทนของ SDS และโปรตีน K .
2.2 . การสังเคราะห์และปฏิกิริยา PCR ไพรเมอร์สำหรับรองพื้น :
หัวข้อลำดับที่ใช้เป็นแบบ GH ( หัว et al . , 2009 ) ยีน .
gh1-f 5  - ctctgcctgccctggact-3 
gh1-r 5  - ggagaagcagaaggcaacc-3 
ทั้งเทคนิคปฏิกิริยาได้ใน 20  ผมผสม containing10 pmol ไปข้างหน้าและย้อนกลับจากแต่ละ10  L master ผสม ซึ่งคอน tained 200 M dntp ( deoxyribonucleotide ฟอสเฟต 1.5 มม. ชุด 1unit , ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( Sigma ) และ 50 ของ genomic DNA เป็นเทมเพลท การใช้ปฏิกิริยา PCR เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพความแม่นยำ : 95 ◦ C