Measurement of cell and astaxanthin

Measurement of cell and astaxanthin concentrations

The dry cell weight was determined from the equation below, as previously reported (4).

Dry cell weight   (mg ml−1)=[3.04×{(OD750-OD680)/OD680}+1.40]×OD680
Dry cell weight   (mg ml−1)=[3.04×{(OD750−OD680)/OD680}+1.40]×OD680
Turn MathJax on

The size, number and color of cells were observed microscopically (Eclipse 80i; Nikon, Tokyo) using a Thoma haemocytometer.

To determine the astaxanthin concentration, 0.5 ml aliquots of cell suspensions were removed from the culture vessel and centrifuged at 9800×g for 10 min. Cell precipitates were resuspended in 0.5 ml of methanol and mixed with 0.40 g of silica particles (particle size = 0.2–1 mm; Kanto Chemical, Tokyo). To extract astaxanthin from cells, the mixture was vigorously mixed with a vibrator for 10 min and then centrifuged for 10 min. The supernatant (0.5 ml) was mixed with 0.1 ml of a methanol solution of NaOH (5 mM) and kept overnight under nitrogen in the dark at 20°C to saponify astaxanthin eaters (15 and 16). The astaxanthin concentration in the prepared samples was determined by HPLC (LC-10; Shimadzu, Kyoto) on a reverse phase column (Cosmosil 5C18-MS-II, 4.6×150 mm; Nacalai Tesque, Kyoto). Methanol was used as the mobile phase at a flow rate of 1 ml min−1, and the absorbance of the effluent solution was monitored at 470 nm with a UV-VIS detector (SPD-10AV; Shimadzu). The concentration of astaxanthin was determined from a calibration curve prepared using an authentic sample of free astaxanthin.

Results and discussion
Increase in number of H. pluvialis under illumination with continuous or flashing light emitted from blue LEDs

Figure 2 shows the time course for the cell number of H. pluvialis when cells were grown mixotrophically under illumination with continuous or flashing light from blue LEDs. The frequency of the flashing light was 100 Hz.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การวัดความเข้มข้นของเซลล์และ astaxanthinน้ำหนักเซลล์แห้งที่ถูกกำหนดจากสมการด้านล่าง เป็นรายงาน (4)น้ำหนักเซลล์แห้ง (mg ml−1) = [3.04 × {(OD750-OD680)/OD680 } + 1.40] × OD680น้ำหนักเซลล์แห้ง (mg ml−1) = [3.04 × { (OD750−OD680) / OD680 } + 1.40] × OD680 เปิด MathJaxขนาด จำนวน และสีของเซลล์ถูกตั้งข้อสังเกตความ (คราส 80i Nikon โตเกียว) ใช้แบบ haemocytometer Thomaการตรวจสอบความเข้มข้นของ astaxanthin, aliquots 0.5 ml ของสารแขวนลอยเซลล์ถูกลบออกจากเรือวัฒนธรรม และผลิตภัณฑ์ที่ 9800 × g สำหรับ 10 นาทีเซลล์ precipitates resuspended ใน 0.5 ml ของเมทานอล และผสมกับ 0.40 กรัมของอนุภาคซิลิกา (ขนาดอนุภาค = 0.2 – 1 มม. คันโตเคมี โตเกียว) การแยก astaxanthin จากเซลล์ ส่วนผสมแรง ๆ ผสมชุด 10 นาทีแล้ว จาก 10 นาที Supernatant (0.5 ml) ผสมกับ 0.1 มิลลิลิตรของ NaOH (5 มม.) สารละลายเมทานอล และเก็บไว้ค้างคืนภายใต้ไนโตรเจนในมืดที่อุณหภูมิ 20° C เพื่อ saponify เสพ astaxanthin (15 และ 16) กำหนดความเข้มข้นของ astaxanthin ในตัวอย่างที่เตรียมไว้ โดย HPLC (LC-10 Shimadzu เกียวโต) คอลัมน์ย้อนกลับเฟส (Cosmosil 5 C 18-MS-II, 4.6 × 150 mm Nacalai Tesque เกียวโต) ใช้เมทานอลเป็นเฟสเคลื่อนที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตร min−1 และเป็นการตรวจสอบค่าของการแก้ปัญหาน้ำทิ้งที่ 470 nm กับเครื่องตรวจจับ UV-VIS (SPD-10AV Shimadzu) พิจารณาความเข้มข้นของ astaxanthin จากโค้งสอบเทียบที่ใช้ตัวอย่างที่แท้จริงของ astaxanthin ฟรีผลและการอภิปรายเพิ่มขึ้นจำนวน H. pluvialis ภายใต้แสงสว่าง ด้วยแสงต่อเนื่อง หรือกระพริบออกจาก Led สีฟ้ารูปที่ 2 แสดงหลักสูตรเวลา H. pluvialis จำนวนเซลล์เมื่อเซลล์ที่ปลูกภายใต้แสงสว่างต่อเนื่อง หรือกะพริบแสงจากไฟ Led สีฟ้า mixotrophically ความถี่ของไฟกระพริบเป็น 100 Hz

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวัดของเซลล์และความเข้มข้น astaxanthin

น้ำหนักเซลล์แห้งถูกกำหนดจากสมการดังต่อไปนี้ขณะที่รายงานก่อนหน้านี้ (4).

น้ำหนักเซลล์แห้ง (MG ML-1) = [3.04 × {(OD750-OD680) / OD680} 1.40] × OD680
น้ำหนักแห้งเซลล์ (mG mL-1) = [3.04 × {(OD750-OD680) / OD680} 1.40] × OD680
เปิด MathJax ใน

ขนาดจำนวนและสีของเซลล์ถูกตั้งข้อสังเกตกล้องจุลทรรศน์ (คราส 80i; Nikon, โตเกียว) โดยใช้สไลด์นับเม็ดเลือด Thoma.

ในการตรวจสอบความเข้มข้น astaxanthin ที่ 0.5 มล. aliquots ของเซลล์แขวนลอยออกจากเรือวัฒนธรรมและหมุนเหวี่ยงที่ 9800 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาที ตกตะกอนมือถือถูก resuspended ใน 0.5 มล. ของเมทานอลและผสมกับ 0.40 กรัมของอนุภาคซิลิกา (ขนาดอนุภาค = 0.2-1 มิลลิเมตรคันโตเคมีโตเกียว) เพื่อดึง astaxanthin จากเซลล์ส่วนผสมที่ถูกผสมกับแรงสั่นเป็นเวลา 10 นาทีแล้วปั่นเป็นเวลา 10 นาที ใส (0.5 มิลลิลิตร) ผสมกับ 0.1 มล. ของการแก้ปัญหาของเมทานอล NaOH (5 มิลลิเมตร) และเก็บไว้ค้างคืนภายใต้ไนโตรเจนในที่มืดที่ 20 ° C ถึงสบู่เสพ astaxanthin (15 และ 16) ความเข้มข้น astaxanthin ในตัวอย่างที่เตรียมไว้ถูกกำหนดโดยวิธี HPLC (LC-10; Shimadzu เกียวโต) ในคอลัมน์เฟสย้อนกลับ (Cosmosil 5C18-MS-II, 4.6 × 150 มม Nacalai Tesque เกียวโต) เมทานอลถูกใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่ในอัตราการไหล 1 มิลลิลิตรนาทีที่ 1 และการดูดกลืนแสงของการแก้ปัญหาน้ำเสียที่ได้รับการตรวจสอบที่ 470 นาโนเมตรที่มีเครื่องตรวจจับรังสี UV-VIS (SPD-10AV; Shimadzu) ความเข้มข้นของ astaxanthin ถูกกำหนดจากกราฟมาตรฐานเตรียมใช้ตัวอย่างที่แท้จริงของ astaxanthin ฟรี.

ผลลัพธ์และการอภิปราย
การเพิ่มจำนวนของเอช pluvialis ภายใต้การส่องด้วยแสงกระพริบต่อเนื่องหรือปล่อยออกมาจากไฟ LED สีฟ้า

รูปที่ 2 แสดงเวลาที่แน่นอนสำหรับจำนวนเซลล์ เอช pluvialis เมื่อเซลล์ปลูก mixotrophically ภายใต้การส่องด้วยแสงต่อเนื่องหรือกระพริบจากไฟ LED สีฟ้า ความถี่ของแสงกระพริบเป็น 100 เฮิร์ตซ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวัดความเข้มข้นของเซลล์และแอสทาแซนทินน้ำหนักเซลล์แห้ง พิจารณาจากสมการข้างล่างนี้ ตามที่รายงานก่อนหน้านี้ ( 4 )   เซลล์น้ำหนักแห้ง ( มิลลิกรัม ml − 1 ) = 3.04 × [ { ( od750-od680 ) / od680 } + 1.40 ] × od680   เซลล์น้ำหนักแห้ง ( มิลลิกรัม ml − 1 ) = 3.04 × [ { ( od750 − od680 ) / od680 } + 1.40 ] × od680เปิด mathjax บนขนาด , จำนวนและสีเซลล์จากกล้องจุลทรรศน์ ( คราส 80i ; Nikon , โตเกียว ) โดยใช้โทมัส haemocytometer .หาแอสทาแซนทินเข้มข้น 0.5 ml เฉยๆเซลล์แขวนลอยถูกเอาออกจากวัฒนธรรมเรือไฟฟ้าที่ 9800 × G 10 นาทีเซลล์ตะกอนเป็น resuspended ใน 0.5 ml ของเมทานอลและผสมกับ 0.40 กรัม ( ขนาดอนุภาคของอนุภาคซิลิกา = 0.2 – 1 มม. ; คันโตเคมี , โตเกียว ) เพื่อสกัดแอสตาแซนทินจากเซลล์ผสมกับส่วนผสมอย่างสั่นเป็นเวลา 10 นาทีจากนั้นนำระดับ 10 นาที ( 0.5 มิลลิลิตร ) ผสมกับ 0.1 มิลลิลิตรของสารละลายเมทานอลโซเดียมไฮดรอกไซด์ ( 5 มม. ) และเก็บภายใต้ไนโตรเจนในคืนมืดที่ 20 ° C เพื่อทำให้เป็นสบู่ นักกิน แอสตาแซนทิน ( 15 และ 16 ) การเสริมแอสตาแซนทินเข้มข้นที่เตรียมโดยวิธี HPLC ตัวอย่างตั้งใจ ( lc-10 ; Shimadzu , เกียวโต ) บนคอลัมน์กลับเฟส ( cosmosil 5c18-ms-ii 4.6 × 150 มม. ; nacalai tesque เกียวโต ) เมทิลแอลกอฮอล์ใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่ที่อัตราการไหล 1 มิลลิลิตรต่อนาที− 1 และค่าการดูดกลืนแสงของสารละลายน้ำถูกตรวจสอบใน 470 nm ด้วยเครื่องตรวจจับไอออน ( spd-10av ; Shimadzu ) ความเข้มข้นของแอสตาแซนทิน พิจารณาจากรูปโค้งที่เตรียมโดยใช้ตัวอย่างจริงของแอสตาแซนทินฟรีผลและการอภิปรายเพิ่มจำนวนชั่วโมงสีเขียวภายใต้แสงอย่างต่อเนื่อง หรือกระพริบแสงที่ออกมาจากหลอด LED สีฟ้ารูปที่ 2 แสดงเวลาที่แน่นอนสำหรับเบอร์โทร . สีเขียวเมื่อเซลล์เติบโต mixotrophically ภายใต้แสงจากหลอด LED กับต่อเนื่อง หรือไฟกระพริบสีฟ้า ความถี่ของการกระพริบแสงเป็น 100 Hz .