To investigate lipid droplet struct

To investigate lipid droplet structure and function, we isolated lipid
droplets fromC. elegans and usedmass spectrometry to determine their
lipid and protein composition. For this analysis, we compared the lipid
droplets isolated from large cultures of young adult stage wild type
C. elegans with those isolated from daf-2 mutants. When grown at the
restrictive temperature of 25°, daf-2 mutants arrest in the dauer larval
stage. When grown at the semi-permissive temperature of 20°, daf-2
worms develop into adults that are extremely long lived and contain excess
triacylglycerol stores and large lipid droplets [16,34]. Ultracentrifugation
was used to isolate lipid droplets from three independent
biological replicates of each genotype. Purified lipids dropletswere subsequently
used for proteomic analysis and lipid composition analysis.
We found that lipid droplets isolated from wild type worms
contained similar lipids that made up the whole worm lipid composition,
but were highly enriched in triacylglycerols (TAG). The major
phospholipid (PL) components consist of phosphatidylcholine (PC)
and phosphatidylethanolamine (PE) (Fig. 1A and B). While wild type
whole worm lipid extracts contain a TAG/PL ratio of 1.2 (±0.2), lipid
droplets contain a TAG/PL ratio of 21.3 (±2.8). The daf-2 mutants
showed an even higher enrichment of TAG stores, with the whole
worm TAG/PL ratio of 1.8 (±0.2) and a TAG/PL ratio in isolated daf-2
lipid droplets of 38.0 (±2.7) (Fig. 1B). Both wild type and daf-2 lipid
droplets have higher PC to PE ratio than whole worm extracts, with a
PC/PE ratio of 3.8 (±0.6) in wild type lipid droplets compared to a 1.3
(±0.1) ratio inwholewormextracts (Fig. 1C). These ratioswere similar
in daf-2 mutant worm and lipid droplet extracts (Fig. 1C). Overall, the
lipid composition in C. elegans lipid droplets is similar to that described
in other systems, in which lipid droplets are enriched in TAGs and the
surrounding phospholipid monolayer is enriched in PC [5,35].
In addition to TAGs, the hydrophobic core of lipid droplets isolated
from mammalian and yeast cells contain relatively high amounts of
sterol esters [36,37]. As indicated by cholesterol staining, C. elegans
membranes contain relatively low levels of sterols [38]. Thin layer

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตรวจสอบไขมันหยดโครงสร้างและหน้าที่ เราแยกต่างหากไขมันfromC หยด spectrometry elegans และ usedmass เพื่อกำหนดของพวกเขาองค์ประกอบของไขมันและโปรตีน สำหรับการวิเคราะห์นี้ เราเปรียบเทียบกระบวนการแยกต่างหากจากวัฒนธรรมใหญ่ขั้นผู้ใหญ่หนุ่มป่าชนิดหยดC. elegans กับแยกต่างหากจากสายพันธุ์เยอรมัน 2 เมื่อปลูกในอุณหภูมิ 25° จับสายพันธุ์เยอรมัน 2 ใน dauer larval จำกัดขั้นตอนการ เมื่อเติบโตขึ้นที่อุณหภูมิ 20 ° กึ่ง permissive เยอรมัน 2หนอนพัฒนาเป็นผู้ใหญ่ ที่มีอาศัยอยู่มากจึงประกอบด้วยเกินร้านค้า triacylglycerol และหยดไขมันขนาดใหญ่ [16,34] Ultracentrifugationใช้ในการแยกไขมันหยดจากอิสระ 3ทางชีวภาพเหมือนกับของแต่ละลักษณะทางพันธุกรรม โครงการบริสุทธิ์ dropletswere ในเวลาต่อมาใช้สำหรับ proteomic การวิเคราะห์และการวิเคราะห์องค์ประกอบของไขมันเราพบว่า หยดไขมันแยกต่างหากจากหนอนชนิดป่าประกอบด้วยโครงการคล้ายคลึงกันที่ประกอบด้วยองค์ประกอบไขมันทั้งหนอนแต่สูงถูกอุดมไปใน triacylglycerols (แท็ก) หลักการฟอสโฟลิพิด (PL) ส่วนประกอบสำคัญ (พีซี)และ phosphatidylethanolamine (PE) (Fig. 1A และ B) ในขณะที่ชนิดของป่าสารสกัดจากไขมันทั้งหนอนประกอบด้วยอัตราส่วนในการใช้ แท็ก/PL 1.2 (±0.2), ไขมันหยดประกอบด้วยอัตราส่วนในการใช้ แท็ก/PL 21.3 (±2.8) สายพันธุ์เยอรมัน 2แสดงที่โดดเด่นสูงขึ้นป้ายร้าน มีทั้งหมดหนอนอัตราส่วน แท็ก/PL ของ 1.8 (±0.2) และอัตราการ แท็ก/PL ในเยอรมัน 2 แยกหยดไขมันของ 38.0 องศาเซลเซียส (±2.7) (Fig. 1B) ชนิดป่าและไขมัน 2 เยอรมันหยดมีคอมพิวเตอร์สูงกว่า PE อัตราส่วนกว่าสารสกัดจากหนอนทั้งหมด การอัตรา 3.8 (±0.6) ในป่าชนิดไขมันหยดเมื่อเทียบกับ 1.3 เป็น PC/PE(±0.1) อัตราส่วน inwholewormextracts (Fig. 1C) Ratioswere เหล่านี้คล้ายคลึงกันหนอนไวรัสกลายพันธุ์เยอรมัน-2 และระดับไขมันในเลือด หยดสารสกัด (Fig. 1C) โดยรวม การองค์ประกอบไขมันในหยดไขมัน C. elegans มีเหมือนกับที่อธิบายไว้ในระบบอื่น ๆ อุดมไปในไขมันที่หยดในแท็กและรอบ monolayer ฟอสโฟลิพิดเป็นอุดมไปในเครื่องคอมพิวเตอร์ [5,35]นอกจากแท็ก หลัก hydrophobic ของหยดไขมันที่แยกต่างหากจาก mammalian และเซลล์ยีสต์ประกอบด้วยค่อนข้างสูงสเตอรอล esters [36,37] ตามที่ระบุ โดยย้อมสี C. elegans ไขมันเยื่อหุ้มประกอบด้วยระดับค่อนข้างต่ำของสเตอรอลส์ [38] บางชั้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการตรวจสอบโครงสร้างหยดไขมันและการทำงานของเราแยกไขมันหยด fromC
elegans และ spectrometry usedmass
เพื่อตรวจสอบของพวกเขาไขมันและองค์ประกอบของโปรตีน สำหรับการวิเคราะห์นี้เราเมื่อเทียบกับไขมันหยดแยกจากวัฒนธรรมใหญ่ของเวทีผู้ใหญ่ป่าชนิดซี elegans กับผู้ที่แยกได้จาก DAF-2 กลายพันธุ์ เมื่อโตที่อุณหภูมิที่เข้มงวดของ 25 °, DAF-2 กลายพันธุ์จับกุมใน Dauer ตัวอ่อนเวที เมื่อเติบโตในอุณหภูมิกึ่งอนุญาต 20 องศา, DAF-2 หนอนพัฒนาเป็นผู้ใหญ่ที่มีชีวิตอยู่นานมากและมีส่วนเกินที่ร้านค้า triacylglycerol และหยดไขมันขนาดใหญ่ [16,34] ultracentrifugation ถูกใช้ในการแยกไขมันในเลือดหยดจากสามอิสระซ้ำทางชีวภาพของแต่ละพันธุ์ ไขมันบริสุทธิ์ dropletswere ต่อมาใช้ในการวิเคราะห์โปรตีนและการวิเคราะห์องค์ประกอบของไขมัน. เราพบว่าหยดไขมันที่แยกได้จากหนอนชนิดป่าที่มีไขมันที่คล้ายกันที่ทำขึ้นหนอนองค์ประกอบของไขมันทั้งแต่อุดมสูงใน triacylglycerols (TAG) หลักเรียม (PL) ส่วนประกอบประกอบด้วยฟอส (PC) และ phosphatidylethanolamine (PE) (รูป. 1A และ B) ในขณะที่ป่าชนิดสารสกัดจากไขมันหนอนทั้งมี TAG / PL อัตราส่วน 1.2 (± 0.2) ไขมันหยดมีTAG / อัตราส่วน PL 21.3 (± 2.8) DAF-2 กลายพันธุ์พบว่าการเพิ่มคุณค่าที่สูงขึ้นของร้านค้าTAG มีทั้งหนอนTAG / PL อัตราส่วน 1.8 (± 0.2) และ TAG / PL ในอัตราส่วนที่แยก DAF-2 หยดไขมัน 38.0 (± 2.7) (รูป 1B) ทั้งสองชนิดป่าและ DAF-2 ไขมันหยดมีเครื่องคอมพิวเตอร์ที่สูงขึ้นเพื่อPE อัตราส่วนกว่าสารสกัดจากหนอนทั้งกับPC / อัตราส่วน PE 3.8 (± 0.6) ในป่าประเภทหยดไขมันเมื่อเทียบกับ 1.3 (± 0.1) inwholewormextracts อัตราส่วน (รูปที่ 1C) เหล่านี้ ratioswere ที่คล้ายกันในDAF-2 หนอนกลายพันธุ์และสารสกัดจากไขมันหยด (รูป. 1C) โดยรวมองค์ประกอบของไขมันใน C. elegans หยดไขมันจะคล้ายกับที่อธิบายไว้ในระบบอื่นๆ ซึ่งในหยดไขมันจะอุดมไปในแท็กและmonolayer เรียมโดยรอบอุดมในเครื่องคอมพิวเตอร์ [5,35]. นอกจากแท็กที่ไม่ชอบน้ำ หลักของหยดไขมันที่แยกได้จากเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนมและยีสต์มีปริมาณที่ค่อนข้างสูงของเอสเทอsterol [36,37] ตามที่ระบุโดยการย้อมสีคอเลสเตอรอล C. elegans เยื่อมีระดับที่ค่อนข้างต่ำของ sterols [38] ชั้นบาง ๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อศึกษาโครงสร้างและการทำงานของหยดไขมัน เราแยกไขมัน
หยด fromc . และวิธีหาถิ่น usedmass
ไขมันและองค์ประกอบของโปรตีน สำหรับการวิเคราะห์นี้เราเปรียบเทียบไขมัน
หยดที่แยกจากวัฒนธรรมขนาดใหญ่ของเยาวชน เวทีผู้ใหญ่พันธุ์ป่า
C กับผู้ถิ่นที่แยกได้จาก daf-2 มนุษย์กลายพันธุ์ เมื่อปลูกที่อุณหภูมิ 25 องศา
กัด ,จับ daf-2 กลายพันธุ์ในดักแด้
ระยะเวลา . เมื่อปลูกที่อุณหภูมิ 20 องศากึ่งควบคุม หนอน daf-2
พัฒนาเป็นผู้ใหญ่ที่แสนนานอยู่และมีร้านค้า triacylglycerol ส่วนเกินและไขมันพบ 16,34
[ ขนาดใหญ่ ] ultracentrifugation
ถูกใช้เพื่อแยกไขมันหยดจากสามอิสระ
ชีวภาพซ้ำแต่ละจีโนไทป์ .ทำให้ไขมัน dropletswere ในภายหลัง
ใช้สำหรับการวิเคราะห์และการวิเคราะห์องค์ประกอบของโปรตีนไขมัน .
เราพบว่าไขมันพบป่าชนิดที่แยกได้จากหนอน
มีอยู่ไขมันที่คล้ายกันที่สร้างขึ้นทั้งหนอนและส่วนประกอบ ,
แต่มีอุดมในไตรกลีเซอรอล ( แท็ก ) และฟอสโฟลิปิดสาขา
( PL ) ส่วนประกอบที่ประกอบด้วยฟอสฟาติดิลโคลีน ( PC )
และ phosphatidylethanolamine ( PE ) ( รูปที่ 1A และ B ) ในขณะที่ป่าประเภทไขมันสารสกัดจากหนอน
ทั้งหมดประกอบด้วยแท็ก / PL ในอัตราส่วน 1.2 ( ± 0.2 ) 2
หยดประกอบด้วยแท็ก / PL อัตราส่วน 21.3 ( ± 2.8 ) การ daf-2 กลายพันธุ์
แสดงการสูงขึ้นของป้ายร้านค้า , มีทั้ง
หนอนแท็ก / PL เท่ากับ 1.8 ( ± 0.2 ) และแท็ก / PL ) แยก daf-2
ไขมันหยด 38.0 ( ± 2.7 ) ( รูปที่ 1A )ทั้งชนิดป่าและ daf-2 ลิปิด
หยดมี PC สูงกว่าอัตราส่วน PE มากกว่าสารสกัดจากหนอนทั้งกับ PC / PE Ratio
3.8 ( ± 0.6 ) ใน lipid droplets ประเภทป่าเมื่อเทียบกับ 1.3
( ± 0.1 ) อัตราส่วน inwholewormextracts ( ภาพที่ 1c ) เหล่านี้โดยคล้ายกัน
ใน daf-2 กลายพันธุ์หนอนและสารสกัดจากไขมันแตกตัว ( ภาพที่ 1c ) โดย
C . ไขมันพบไขมันส่วนประกอบถิ่นจะคล้ายกับที่อธิบาย
ในระบบอื่น ๆซึ่งในไขมันพบอุดมสมบูรณ์ในแท็กและฟอสโฟลิปิดโดยรอบอย่าง
ผสานในคอมพิวเตอร์ [ 5,35 ] .
นอกจากแท็กหลัก ) ของไขมันพบแยก
จากสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและยีสต์เซลล์มีปริมาณค่อนข้างสูงของ
สเตอรอลเอสเทอร์ [ 36,37 ] ตามที่ระบุโดยคอเลสเตอรอล staining , C .
+ ถิ่นประกอบด้วยค่อนข้างต่ำระดับของสเตอรอล [ 38 ]ชั้นบาง