2.2. Microorganisms and mediaSaccha

2.2. Microorganisms and media

Saccharomyces cerevisiae TSH1 (thereafter TSH1 for brevity) was used as fermentation strain in the demonstration study. TSH1 was stored in yeast-peptone-dextrose (YPD) medium containing 20% glycerol at −20 °C or 70 °C for long-term storage. Regular YPD medium was used to revive the strain from frozen stocks at 30 °C for 4–6 h, and the culture was used as initial inoculum to prepare the seed cultures. YPD was used as medium for seed preparation at the bench scales. The wort from malt saccharification was diluted to the final total sugar concentration of 30 g/L, which was then used as medium to prepare the seeds at the pilot scales. The procedure of malt saccharification was described in Section 2.4. The preparation, inoculation, and process control were described in the section on fermentation control.

2.3. Analytical methods

2.3.1. Dry cell weight of yeast

The correlation between optical density and dry mass weight of cells was determined with a standard protocol [12].

2.3.2. Sugar analysis

Total and reducing sugar contents were analyzed by Fehling titration method. Approximately 50 g of sweet sorghum particles was extracted with 500 g distilled water at 80 °C for 60 min. The liquid part was divided into two parts: the first part was used in directly reducing the sugar assay, and the second part was hydrolyzed with 6 mol/L hydrochloric acid at 70 °C for 15 min. After neutralization with 10 mol/L sodium hydroxide solution, the sample was utilized for the total sugar assay [13].

2.3.3. Ethanol content

A 20 g fermented residue was mixed thoroughly with 100 mL distilled water for ethanol distillation. The ethanol content in the 100 mL distilled liquid was determined with a gas chromatograph (SHIMADZU GC-14C) equipped with a flame ionization detector and column. Propanol was used as internal standard to determine the standard curve.

2.4. Malt saccharification

Malt was obtained from Yongchang Jiuyuan Malt Company, Gansu, China. The grist was mixed with water with a ratio of 1:4 (w/w) in a tank equipped with a stirring and heating system. Process conditions were altered sequentially in the following manner. (1) The tank was heated to 40 °C for 20 min and then to 50 °C for 30 min at a pH range of 5.0–5.2. (2) The temperature of the tank was increased and maintained at 62 °C (pH range of 5.3–5.5) until the liquid part turned into orange-red after addition of drops of iodine solution. The system was then cooled down to 58 °C. (3) α-1,4-glucan-glucohydrolase TH-G-10 (Noao Sci. & Technol. Development Ltd. Tianjin, China) was added into the tank and then reacted at 58 °C and pH 4.4–4.6 for 1 h. Enzyme loading utilized 5 mg of enzyme powder with 1 g malt. (4) The saccharified samples were filtered to remove the solid residues, and the total sugar concentration in the liquid part was diluted to 3% (w/w), which was then used as the medium for the seed culture.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. จุลินทรีย์และสื่อSaccharomyces cerevisiae TSH1 (หลังจากนั้น TSH1 กระชับ) ถูกใช้เป็นสายพันธุ์หมักในศึกษาสาธิตการ TSH1 ถูกเก็บไว้ในสื่อ (YPD) ขึ้นยีสต์ peptone ประกอบด้วยกลีเซอร 20% ที่ −20 ° C หรือ 70 ° C สำหรับการเก็บระยะยาว ปกติ YPD กลางถูกใช้เพื่อฟื้นฟูพันธุ์จากหุ้นแช่แข็งที่ 30 ° C สำหรับ 4-6 h และวัฒนธรรมใช้เป็น inoculum เริ่มต้นการเตรียมเมล็ดวัฒนธรรม YPD ถูกใช้เป็นสื่อสำหรับการเตรียมเมล็ดที่สมดุลผู้พิพากษา Wort จากมอลต์ saccharification ถูกผสมให้เข้มข้นน้ำตาลสุดท้ายรวม 30 g/L ซึ่งถูกใช้แล้วเป็นสื่อในการเตรียมเมล็ดพันธุ์ในระดับนำร่อง ข้าวมอลต์ saccharification กระบวนการถูกอธิบายไว้ในส่วน 2.4 เตรียม inoculation และการควบคุมกระบวนการถูกอธิบายไว้ในส่วนที่ควบคุมการหมัก2.3 การวิเคราะห์วิธี2.3.1 น้ำหนักเซลล์แห้งของยีสต์กำหนดความสัมพันธ์ระหว่างความหนาแน่นออปติคัลและน้ำหนักแห้งรวมของเซลล์กับโพรโทคอลมาตรฐาน [12]2.3.2. น้ำตาลวิเคราะห์รวมและลดเนื้อหาน้ำตาลมีวิเคราะห์ โดยวิธีการไทเทรต Fehling ประมาณ 50 กรัมของข้าวฟ่างหวานอนุภาคถูกสกัด ด้วยน้ำกลั่น 500 กรัมที่ 80 ° C สำหรับ 60 นาที ส่วนของเหลวถูกแบ่งออกเป็นสองส่วน: ส่วนแรกถูกใช้ในการทดสอบน้ำตาลที่ลดลงโดยตรง และส่วนที่สองถูก hydrolyzed กับกรดไฮโดรคลอริก โมล/L 6 ที่ 70 ° C สำหรับ 15 นาที หลังจากปฏิกิริยาสะเทินด้วย 10 โมล/L โซเดียมไฮดรอกไซด์โซลูชั่น มีใช้ตัวอย่างสำหรับวิเคราะห์น้ำตาลรวม [13]2.3.3 เนื้อหาเอทานอลตัว 20 กรัมหมักสารตกค้างถูกผสมอย่างละเอียดกับน้ำ 100 มลกลั่นกลั่นเอทานอล กำหนดเนื้อหาในของเหลว 100 มลกลั่นเอทานอลกับ chromatograph ก๊าซ (SHIMADZU GC - 14C) พร้อมกับตรวจจับเปลวไฟ ionization และคอลัมน์ อย่างไร propanol ถูกใช้เป็นมาตรฐานภายในเพื่อกำหนดเส้นโค้งมาตรฐาน2.4. มอลต์ saccharificationข้าวมอลต์ได้รับจาก บริษัทหยงฉาง Jiuyuan มอลต์ กานซู จีน Grist ถูกผสมกับน้ำอัตราส่วน 1:4 (w/w) ในถังพร้อมกับระบบการกวน และเครื่องทำความร้อน กระบวนการเงื่อนไขถูกเปลี่ยนแปลงไปในลักษณะต่อไปนี้ตามลำดับ (1 ถัง)มีความร้อน ถึง 40 ° C สำหรับ 20 นาที แล้ว ถึง 50 ° C สำหรับ 30 นาทีในช่วง pH ของ 5.0 – 5.2 (2)อุณหภูมิของถังเพิ่มขึ้น และรักษาที่ 62 ° C (pH ช่วง 5.3-5.5) จนกระทั่งของเหลวส่วนหนึ่งเปลี่ยนเป็นสีส้มแดงหลังแห่งหยดของไอโอดีน แล้วได้ระบายความร้อนด้วยระบบลง 58 องศาเซลเซียส (3) ด้วยกองทัพ-1,4-glucan-glucohydrolase TH-G-10 (Noao Sci. และ Technol. พัฒนาจำกัดเทียนจิน จีน) ถูกเพิ่มเข้าไปในถังแล้ว ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นที่ 58 ° C และ pH 4.4-4.6 สำหรับการโหลดเอนไซม์ 1 h. ใช้ผงเอนไซม์กับมอลต์ 1 g 5 มก. (4) ตัวอย่าง saccharified ถูกกรองเอาตกแข็ง และความเข้มข้นของน้ำตาลรวมในส่วนของเหลวที่ผสม 3% (w/w), ซึ่งถูกใช้แล้วเป็นสื่อในวัฒนธรรมเมล็ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 จุลินทรีย์และสื่อSaccharomyces cerevisiae TSH1 (หลังจากนั้น TSH1 สำหรับความกะทัดรัด) ถูกใช้เป็นสายพันธุ์ที่หมักในการศึกษาการสาธิต TSH1 ถูกเก็บไว้ในยีสต์เปปโตน-เดกซ์โทรส (YPD) ขนาดกลางที่มีกลีเซอรีน 20% ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสหรือ 70 องศาเซลเซียสสำหรับการจัดเก็บระยะยาว กลาง YPD ปกติถูกใช้ในการฟื้นฟูสายพันธุ์จากหุ้นแช่แข็งที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4-6 ชั่วโมงและวัฒนธรรมที่ใช้เป็นหัวเชื้อเริ่มต้นการเตรียมความพร้อมวัฒนธรรมเมล็ด YPD ถูกใช้เป็นสื่อกลางในการเตรียมเมล็ดพันธุ์ที่ชั่งน้ำหนักม้านั่ง สาโทจากมอลต์ saccharification ที่ได้รับการปรับลดความเข้มข้นน้ำตาลทั้งหมดสุดท้ายของ 30 กรัม / ลิตรซึ่งถูกนำมาใช้เป็นสื่อกลางในการเตรียมความพร้อมเมล็ดที่นักบินเครื่องชั่งน้ำหนัก ขั้นตอนของการ saccharification มอลต์ที่ได้รับการอธิบายไว้ในมาตรา 2.4 ในการจัดทำ, การฉีดวัคซีนและการควบคุมกระบวนการที่ถูกอธิบายไว้ในส่วนที่เกี่ยวกับการควบคุมการหมัก. 2.3 วิธีการวิเคราะห์2.3.1 น้ำหนักเซลล์แห้งของยีสต์ความสัมพันธ์ระหว่างความหนาแน่นของแสงและมวลน้ำหนักแห้งของเซลล์ที่ถูกกำหนดด้วยโปรโตคอลมาตรฐาน [12]. 2.3.2 การวิเคราะห์น้ำตาลรวมและลดปริมาณน้ำตาลที่ได้มาวิเคราะห์ด้วยวิธีไตเตรท Fehling ประมาณ 50 กรัมของอนุภาคข้าวฟ่างหวานถูกสกัดด้วย 500 กรัมน้ำกลั่นที่ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที ส่วนของเหลวที่ถูกแบ่งออกเป็นสองส่วนคือส่วนแรกที่ใช้ในการทดสอบโดยตรงลดน้ำตาลและส่วนที่สองที่ถูกไฮโดรไลซ์ 6 mol / L กรดไฮโดรคลอที่ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที หลังจากที่การวางตัวเป็นกลาง 10 โมล / ลิตรแก้ปัญหาโซดาไฟตัวอย่างที่ถูกนำมาใช้สำหรับการทดสอบน้ำตาลทั้งหมด [13]. 2.3.3 เนื้อหาเอทานอล20 กรัมสารตกค้างหมักผสมให้สะอาดด้วยน้ำ 100 มลกลั่นกลั่นเอทานอล เนื้อหาที่เอทานอลใน 100 มิลลิลิตรกลั่นของเหลวที่ถูกกำหนดด้วย chromatograph ก๊าซ (SHIMADZU GC-14C) การติดตั้งเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์เปลวไฟและคอลัมน์ โพรพานที่ใช้เป็นมาตรฐานในการตรวจสอบภายในโค้งมาตรฐาน. 2.4 มอลต์ saccharification มอลต์ที่ได้รับจาก Yongchang Jiuyuan บริษัท มอลต์, กานซูจีน ข้าวผสมกับน้ำในอัตราส่วน 1: 4 (w / w) ในถังพร้อมกับกวนและระบบทำความร้อน เงื่อนไขกระบวนการมีการเปลี่ยนแปลงตามลำดับในลักษณะดังต่อไปนี้ (1) รถถังถูกความร้อนถึง 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีแล้วถึง 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีในช่วงค่า pH 5.0-5.2 (2) อุณหภูมิของถังที่เพิ่มขึ้นและการบำรุงรักษาที่ 62 องศาเซลเซียส (ช่วงค่า pH 5.3-5.5) จนส่วนที่เป็นของเหลวกลายเป็นสีส้มแดงหลังจากที่นอกเหนือจากหยดของสารละลายไอโอดีน ระบบระบายความร้อนที่ได้รับแล้วลงไป 58 องศาเซลเซียส (3) α-1,4 กลูแคน glucohydrolase-TH-G-10 (NOAO วิทย์. & เทคโนโลยี. พัฒนา จำกัด เทียนจิน, จีน) ถูกเพิ่มเข้าไปในถังแล้วมีปฏิกิริยาตอบสนองที่ 58 องศาเซลเซียสและ pH 4.4-4.6 1 ชั่วโมง เอนไซม์ที่ใช้ในการโหลด 5 มิลลิกรัมของผงเอนไซม์ที่มี 1 กรัมข้าวมอลต์ (4) กลุ่มตัวอย่าง saccharified ถูกกรองเพื่อเอาสารตกค้างที่เป็นของแข็งและความเข้มข้นของน้ำตาลทั้งหมดในส่วนของเหลวที่ถูกเจือจาง 3% (w / w) ซึ่งถูกนำมาใช้เป็นสื่อกลางในการเพาะเลี้ยงเมล็ด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . จุลินทรีย์และสื่อ

Saccharomyces cerevisiae tsh1 ( หลังจากนั้น tsh1 สำหรับระยะเวลาสั้นๆ ) ใช้หมักเชื้อสาธิตศึกษา tsh1 ถูกเก็บไว้ในความเข้มข้นยีสต์ ( ypd extract ) อาหารที่มีกลีเซอรอลที่ 20% − 20 ° C หรือ 70 ° C สำหรับการจัดเก็บระยะยาว กลาง ypd ปกติถูกใช้เพื่อฟื้นสายพันธุ์จากหุ้นที่ 30 ° C แช่แข็ง 4 – 6 ชั่วโมงและวัฒนธรรมที่ถูกใช้เป็นครั้งแรกโดยเตรียมเมล็ดพันธุ์ต่างๆ ypd ถูกใช้เป็นสื่อสำหรับเมล็ดพันธุ์ การเตรียมที่ม้านั่งเกล็ด ส่วนสาโทจากข้าวมอลต์ที่ถูกเจือจางไปสุดท้ายน้ำตาลรวมปริมาณ 30 กรัม / ลิตร ซึ่งถูกใช้เป็นสื่อเพื่อเตรียมเมล็ดที่นักบินระดับ ขั้นตอนของมอลถูกอธิบายในส่วน 2.4 . การเตรียมการการฉีดวัคซีน และการควบคุมกระบวนการที่อธิบายไว้ในส่วนของการควบคุมการหมัก

2.3 วิธีการวิเคราะห์

2.3.1 . เซลล์ของน้ำหนักยีสต์

ความสัมพันธ์ระหว่างความหนาแน่นของแสง และน้ำหนักแห้งของเซลล์ที่ถูกกำหนดด้วยมาตรฐาน [ 12 ] บริการ

2.3.2 . การวิเคราะห์น้ำตาล

รวมและการลดน้ำตาล เนื้อหา วิเคราะห์ข้อมูลด้วย fehling การไทเทรตโดยวิธีประมาณ 50 กรัมของอนุภาคข้าวฟ่างหวานถูกสกัดด้วยน้ำกลั่นที่ 500 กรัม 80 ° C เป็นเวลา 60 นาที ส่วนของเหลวที่ถูกแบ่งออกเป็นสองส่วน ส่วนแรกใช้ในการลดน้ำตาลได้โดยตรง ) และส่วนที่สอง คือ ไฮโดรไลซ์ด้วยกรดไฮโดรคลอริค 6 โมล / ลิตรที่อุณหภูมิ 70 องศา C เป็นเวลา 15 นาที หลังจากการทำให้เป็นกลางกับ 10 mol / L โซเดียมไฮดรอกไซด์ , สารละลายกลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในการทดสอบน้ำตาลทั้งหมด [ 13 ] .

2.3.3 . เนื้อหาเอทานอล

20 กรัม หมักกากผสมอย่างทั่วถึงกับ 100 มล. น้ำกลั่นการกลั่นเอทานอล ทั้งเนื้อหาใน 100 ml กลั่นของเหลวถูกกำหนดด้วยแก๊สโครมาโตกราฟ ( Shimadzu gc-14c ) พร้อมกับคอลัมน์เฟลมไอออไนเซชันตรวจจับและโพรพานอลถูกใช้เป็นมาตรฐานภายในกำหนดเส้นโค้งมาตรฐาน

2.4 . ข้าวมอลต์ที่ถูก

ข้าวมอลต์ที่ได้รับจากบริษัท yongchang jiuyuan มอล , กานซู , จีน ส่วนปลายข้าวผสมกับน้ำด้วยอัตราส่วน 1 : 4 ( w / w ) ในถังพร้อมกับตื่นเต้นและระบบความร้อน สภาวะของกระบวนการมีการเปลี่ยนแปลงตามลำดับในลักษณะต่อไปนี้( 1 ) ถังก็ร้อนถึง 40 องศา C เป็นเวลา 20 นาทีและ 50 ° C เป็นเวลา 30 นาที ที่ pH ในช่วง 5.0 – 5.2 . ( 2 ) อุณหภูมิของถังที่เพิ่มขึ้นและรักษาที่ 62 ° C ( ช่วงพีเอช 5.3 – 5.5 ) จนถึงส่วนของเหลวกลายเป็นสีส้มแดง หลังจากเพิ่มหยดของสารละลายไอโอดีน เป็นต้น ระบบก็เย็นลงถึง 58 องศา C ( 3 ) 1,4-glucan-glucohydrolase แอลฟา th-g-10 ( noao Sci . & Technol .การพัฒนาเทียนจิน , จีน ) ถูกเพิ่มลงในถัง แล้วปฏิกิริยาที่ 58 องศา C และ pH 4.4 และ 4.5 เป็นเวลา 1 ชั่วโมงเอนไซม์โหลดใช้ 5 มิลลิกรัมเอนไซม์ผงหมัก 1 กรัม ( 4 ) saccharified จำนวนกรองเอากากของแข็ง และปริมาณน้ำตาลทั้งหมดในส่วนของเหลวเจือจางได้ถึง 3 % ( w / w ) ซึ่งถูกใช้เป็นสื่อกลางในการเพาะเมล็ด .