Confluent monolayers of MDCK cells

Confluent monolayers of MDCK cells (6-well plate format, 106 cells/well) were infected with WT or fluorescent-expressing IBVs for 1 h at room temperature, overlaid with agar and incubated at 33 : c. Three days post-infection, cells were fixed overnight with 4% paraformaldehyde (PFA), and the overlays were removed. For visualization of mCherry, PBS was added and plates were imaged with a Kodak image station (4000MM Pro molecular imaging system; Carestream Health, Inc., NY) (Nogales et al„ 2014a) and Kodak molecular imaging software (v5.0.1.30). Plates were then perme- abilized (0.5% Triton X-l 00 in PBS for 15 min at room temperature) and prepared for immunostaining as previously described (Nogales et al„ 2014a) using the anti IBVNP MAb B017 and vector kits according to manufacturer’s specifications.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Monolayers confluent เซลล์ MDCK (รูปแบบแผ่นดี 6, 106 เซลล์/ดี) ถูกติด WT หรือ IBVs แสดงฟลูออเรสเซนต์สำหรับ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง วางทับ ด้วยอาหาร และได้รับการกกที่ 33: c สามวันหลังติดเชื้อ เซลล์ที่คงค้างคืนกับ paraformaldehyde 4% (PFA), และการซ้อนทับถูกเอาออก สำหรับการแสดงของ mCherry, PBS เพิ่ม และแผ่นถูกถ่ายภาพกับสถานีภาพ Kodak (4000MM Pro โมเลกุลระบบภาพ สุขภาพ Carestream, Inc., NY) (Nogales et al " 2014a) และโกดักโมเลกุลภาพซอฟต์แวร์ (v5.0.1.30) แผ่นได้แล้ว perme-abilized (0.5% X ของไทรทัน-l 00 ใน PBS 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง) และเตรียมไว้สำหรับ immunostaining ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Nogales et al " 2014a) ใช้ป้องกัน B017 มาบ IBVNP และเวกเตอร์ชุดตามข้อกำหนดของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

monolayers ไหลมารวมกันของเซลล์ MDCK (6 ดีรูปแบบแผ่น 106 เซลล์ / ดี) มีการติดเชื้อหรือ IBVs WT-เรืองแสงการแสดงเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องบุด้วยวุ้นและบ่มที่ 33: C สามวันหลังการติดเชื้อเซลล์ได้รับการแก้ไขค้างคืนกับ 4% paraformaldehyde (PFA) และภาพซ้อนทับถูกถอดออก สำหรับการแสดงของ mCherry พีบีเอสถูกบันทึกและแผ่นถูกถ่ายภาพกับสถานีภาพ Kodak (4000MM Pro ระบบการถ่ายภาพระดับโมเลกุล; Carestream สุขภาพ, Inc NY) (Nogales et al, "2014a) และซอฟต์แวร์การถ่ายภาพ Kodak โมเลกุล (v5.0.1.30 ) แผ่นถูกแล้ว perme- abilized (0.5% Triton Xl 00 ในพีบีเอสเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง) และเตรียมพร้อมสำหรับการ immunostaining ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Nogales et al, "2014a) โดยใช้ต่อต้าน IBVNP แอนติบอดี B017 และเวกเตอร์ชุดตามข้อกำหนดของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กระจู๋กระจี๋ monolayers ของ mdck เซลล์ ( รูปแบบ , แผ่น 6-well 106 เซลล์ / ดี ) ติดเชื้อ WT หรือเรืองแสงแสดง ibvs เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้อง หุ้มด้วยวุ้น และบ่มที่อุณหภูมิ 33 : C . 3 วันหลังการติดเชื้อ เซลล์ได้คงค้างคืนด้วย 4% พาราฟอร์มาลดิไฮด์ ( พีเอฟเอ ) และทับออก สำหรับการแสดงผลของ mcherry พีบีเอส ได้เพิ่ม และ จานมีภาพลักษณ์สถานีภาพโกดัก ( ระบบ carestream สุขภาพ , อิงค์ , NY Imaging Pro โมเลกุล 4000mm ) ( โนกาเลส et al „ 2014a ) และซอฟต์แวร์ภาพ Kodak โมเลกุล ( v5.0.1.30 ) แผ่นแล้ว perme - abilized ( 0.5% Triton x-l 00 ใน PBS 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ) และเตรียม immunostaining ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( โนกาเลส et al „ 2014a ) ใช้ป้องกัน ibvnp มาบ b017 และชุดเวกเตอร์ตามสเปคของผู้ผลิต