We first screened for uracil auxotr

We first screened for uracil auxotrophs as gain-of-function
mutants that show resistance to 5-FOA (5, 11, 20). We expected
that mutants with such a dominant phenotype would
be easily isolated even when multicellular hyphae were used
for screening. The 5-FOA, a fluorinated analog of orotic acid,
is converted to 5-fluorouridine monophosphate (5-FUMP) by
two reactions catalyzed by orotate phosphoribosyltransferase
(PyrE) and orotidine-5'-phosphate decarboxylase (PyrF) (Fig.
S1). Since 5-FUMP is toxic, the wild-type strain cannot grow
in the presence of 5-FOA. Mutants of the pyrE or pyrF gene
show resistance to 5-FOA but they cannot convert orotic acid
to uridine monophosphate (UMP), which is essential for
nucleic acid synthesis. Growth of the mutants, however, can
be supported by supplementing the medium with uracil; thus,
we can isolate uracil auxotrophs as 5-FOAR mutants

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เราต้องฉายสำหรับ uracil auxotrophs เป็นกำไรของฟังก์ชัน
สายพันธุ์ที่ต้านทานไป 5-FOA (5, 11, 20) เราคาดว่า
สายพันธุ์กับ phenotype หลักจะ
จะแยกง่ายแม้ใช้ hyphae สิ่ง
สำหรับคัดกรอง 5 FOA แอนะล็อก fluorinated ของกรด orotic,
5 fluorouridine monophosphate (5-FUMP) ถูกแปลงโดย
ปฏิกิริยา 2 กระบวน โดย orotate phosphoribosyltransferase
(PyrE) และ orotidine-5'-ฟอสเฟต decarboxylase (PyrF) (Fig.
S1) 5 FUMP เป็นพิษ ไม่สามารถขยายพันธุ์ป่าชนิด
ในต่อหน้าของ 5 FOA สายพันธุ์ของยีนถวายหรือ pyrF
แสดงความต้านทานการ 5 FOA แต่พวกเขาไม่สามารถแปลงเป็นกรด orotic
การ uridine monophosphate (UMP), ซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับ
การสังเคราะห์กรดนิวคลีอิก อย่างไรก็ตาม สามารถเจริญเติบโตของสายพันธุ์
สนับสนุน โดยใช้สื่อกับ uracil ดังนั้น,
เราสามารถแยก uracil auxotrophs เป็นสายพันธุ์ 5-FOAR

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ครั้งแรกที่เราคัดกรอง auxotrophs uracil เป็นกำไรของฟังก์ชั่น
การกลายพันธุ์ที่แสดงความต้านทานต่อ 5 FOA (5, 11, 20) เราคาดหวัง
ว่าการกลายพันธุ์ด้วยเช่นฟีโนไทป์ที่โดดเด่นจะ
เป็นที่แยกได้อย่างง่ายดายแม้ในขณะที่ hyphae เซลล์ถูกนำมาใช้
สำหรับการคัดกรอง 5 FOA, อนาล็อก fluorinated กรด orotic,
จะถูกแปลงเป็นโมโน 5 fluorouridine (5 FUMP) โดย
ทั้งสองปฏิกิริยาที่เร่งปฏิกิริยาด้วย phosphoribosyltransferase orotate
(เมรุเผา) และ orotidine-5'-ฟอสเฟต decarboxylase (PyrF) (รูปที่
S1) . ตั้งแต่ 5 FUMP เป็นพิษสายพันธุ์ป่าชนิดไม่สามารถเจริญเติบโต
ในที่ที่มี 5 FOA การกลายพันธุ์ของเมรุเผาหรือ pyrF ยีน
ต้านทานต่อ 5 FOA แสดง แต่พวกเขาไม่สามารถแปลงกรด orotic
จะ uridine โมโน (UMP) ซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับ
การสังเคราะห์กรดนิวคลีอิก การเจริญเติบโตของการกลายพันธุ์ แต่สามารถ
ได้รับการสนับสนุนโดยการเสริมสื่อที่มี uracil; ดังนั้น
เราสามารถแยก auxotrophs uracil เป็นกลายพันธุ์ 5 FOAR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เราเริ่มจากยูราซิล auxotrophs ได้กลายเป็นฟังก์ชันที่แสดงความต้านทานต่อ
5-foa ( 5 , 11 , 20 ) เราคาดว่า
ที่กลายพันธุ์ด้วยเช่นการเด่น จะได้แยกได้แม้เมื่อมี

) ใช้สำหรับคัดกรอง การ 5-foa , ฟลูออรีนอนาล็อกของกรดออโรติก
, แปลงเป็น 5-fluorouridine โมโนฟอสเฟต ( 5-fump
) โดย2 ปฏิกิริยาที่เร่งปฏิกิริยาด้วย Orotate phosphoribosyltransferase
( เมรุ ) และ orotidine-5 ' - ใช้ฟอสเฟต ( pyrf ) ( ภาพที่
S1 ) ตั้งแต่ 5-fump เป็นพิษ ของสายพันธุ์ไม่สามารถเติบโต
ต่อหน้า 5-foa . การกลายพันธุ์ของยีนเมรุ หรือ pyrf
แสดงความต้านทานต่อ 5-foa แต่พวกเขาไม่สามารถแปลงกรดออโรติก
ให้ยูริดีนโมโนฟอสเฟต ( UMP ) ซึ่งเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับ
การสังเคราะห์กรดนิวคลีอิก .การเจริญเติบโตของมนุษย์กลายพันธุ์ แต่สามารถ
ได้รับการสนับสนุนโดยเสริมกลางกับยูราซิล จึง
เราสามารถแยกยูราซิล auxotrophs เป็น 5-foar กลายพันธุ์