RT-PCR was performed using SYBR Gre

RT-PCR was performed using SYBR Green I technology on iQ5
System (BioRad, USA). The reactions consisted of 1x SYBR Green
PCR Master Mix (SYBR biopars, GUASNR, Iran), 300 nm of each specific forward and reverse primers, 10 ng of cDNA, and nuclease free
water to a final volume of 20l.
The cycling conditions were as follows: cDNA was denatured at
94
◦
C for 3 min, followed by 35 cycles of 94
◦
C for 15 s and 59.8
◦
C
for 15 s (gain set at 10 for SYBR Green). All samples were amplified in triplicate from the same RNA preparation and the mean
value was considered. Two biological replications were used for
each plate. The RT-PCR efficiency was assessed for each gene based
on the slope of a linear regression model[22]. The bulks of each
cDNA sample were used as PCR template in a range of 10-fold
dilution series. The corresponding RT-PCR efficiencies were calculated based on the slope of the standard curve using the following
equation: (E=10−1/slope−1)[23]

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำ RT-PCR ใช้ SYBR เขียวผมเทคโนโลยีบน iQ5ระบบ (BioRad สหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย 1 x SYBR Greenผสมหลัก PCR (SYBR biopars, GUASNR อิหร่าน), การ 300 nm ของเฉพาะแต่ละหน้า และย้อนกลับไพรเมอร์ 10 ng ของ cDNA และ nuclease ฟรีน้ำให้ปริมาตรสุดท้ายของ 20 lสภาพขี่ได้ดังนี้: cDNA ถูก denatured ที่94◦C สำหรับ 3 นาที ตาม ด้วยรอบ 35 ของ 94◦C 15 s และ 59.8◦C15 s (กำไรตั้ง 10 สำหรับ SYBR Green) มีขยายตัวอย่างทั้งหมดใน triplicate เตรียมอาร์เอ็นเอเดียวกันและค่าเฉลี่ยค่าที่ได้ถือ ระยะสองชีวภาพใช้สำหรับการแต่ละแผ่น มีประเมินประสิทธิภาพ RT-PCR แต่ละยีนอยู่ในความชันของการถดถอยเชิงเส้นแบบจำลอง [22] Bulks ของแต่ละตัวอย่างของ cDNA ใช้เป็นแม่แบบ PCR มี 10-foldชุดเจือจาง ประสิทธิภาพ RT-PCR ที่สอดคล้องกันถูกคำนวณตามความชันของเส้นโค้งมาตรฐานที่ใช้ต่อไปนี้สมการ: (E = 10−1/slope−1) [23]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

RT-PCR ได้ดำเนินการโดยใช้เทคโนโลยีสีเขียว SYBR ฉันใน iQ5
ระบบ (BioRad สหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยาประกอบด้วย 1x SYBR สีเขียว
PCR โทผสม (SYBR biopars, GUASNR อิหร่าน) 300 นาโนเมตรของแต่ละที่เฉพาะเจาะจงไปข้างหน้าและไพรเมอร์กลับ 10 นาโนกรัมของยีนและ Nuclease
ฟรีน้ำปริมาณสุดท้ายของ20 ล.
เงื่อนไขการขี่จักรยาน มีดังนี้ cDNA ถูกเอทิลแอลกอฮอล์ที่
94
◦
C เป็นเวลา 3 นาทีตามด้วย 35 รอบ 94
◦
C เป็นเวลา 15 วินาทีและ 59.8
◦
C
เป็นเวลา 15 วินาที (กำไรไว้ที่ 10 สำหรับ SYBR สีเขียว) ตัวอย่างทั้งหมดถูกขยายในเพิ่มขึ้นสามเท่าจากการเตรียม RNA
เดียวกันและค่าเฉลี่ยค่าได้รับการพิจารณา
ซ้ำสองทางชีวภาพที่ใช้ในแต่ละจาน ประสิทธิภาพ RT-PCR
ได้รับการประเมินสำหรับยีนแต่ละตามบนทางลาดของรูปแบบการถดถอยเชิงเส้น[22] bulks
ของแต่ละตัวอย่างcDNA ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบ PCR ในช่วง 10
พับชุดเจือจาง ที่สอดคล้องประสิทธิภาพ RT-PCR
นี้จะถูกคำนวณอยู่บนพื้นฐานของความลาดชันของเส้นโค้งมาตรฐานดังต่อไปนี้โดยใช้สมการ: (E = 10-1 / ลาด 1) [23]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 . การใช้เทคโนโลยีในระบบ iq5 ฉัน SYBR กรีน
( biorad , USA ) ปฏิกิริยาประกอบด้วย 1x SYBR กรีน
PCR Master Mix ( SYBR biopars guasnr , อิหร่าน ) , 300 nm ของแต่ละไปข้างหน้าและย้อนกลับจาก 10 ของ cDNA และนิวเคลียสน้ำฟรี
เป็นเล่มสุดท้ายของ 20  L .
สภาพจักรยานมีดังนี้ วิธีคือใช้อยู่

◦ 94
C เป็นเวลา 3 นาที ตามด้วย 35 รอบ 94 ◦

C เป็นเวลา 15 วินาทีและ 59.8

C
◦ 15 S ( ได้ตั้งที่ 10 สำหรับ SYBR กรีน ) ตัวอย่างของทั้งสามใบ จากเดิมซึ่งการเตรียมและค่าเฉลี่ย
ถูกพิจารณา สองชีวภาพซ้ำนำมา
แต่ละจาน ประสิทธิภาพและ RT-PCR แต่ละยีนตาม
บนความลาดชันของแบบจำลองการถดถอยเชิงเส้น [ 22 ] ใน bulks ของแต่ละ
วิธี PCR จำนวนใช้เป็นแม่แบบในช่วงของ 10 เท่า
แบบเจือจาง ประสิทธิภาพของวิธีที่คำนวณตามความชันของเส้นโค้งมาตรฐานโดยใช้สมการต่อไปนี้
( E = 10 − 1 / ลาด− 1 ) [ 23 ]