Pantoea agglomerans endo-β-1, 4-man

Pantoea agglomerans endo-β-1, 4-mannanase (Man26P) hydrolyzes hemicellulose by cleaving the internal bonds in the mannan-based chains. In order to obtain improved enzymes and understand the structure-function relationship better, Man26P was engineered using a modified DNA shuffling method and a 96-well plate high-throughput screening technology. Compared to the wild-type enzyme, two mutants Gly267Ser and His134Arg/Phe141Leu with 1.14- and 3.30-fold increased catalytic efficiency (k(cat)/K(m)) toward locust bean gum (LBG) were obtained from the mutant library containing 19,700 clones. Combined with site-directed mutagenesis, more substitutions were introduced into the 134 site, among which, His134Arg and His134Lys exhibited 2.81- and 2.75-fold increased catalytic efficiency versus the wild-type enzyme. And with an increase in the pK(a) values of the side chains of the mutated residues at the 134 site, a decrease was observed in their K(m) values against LBG. The molecular modeling and the docking analysis of the substrate suggest that the enhancement of polar contacts or positive charges at the 134 site contribute to the interaction of the enzyme with the substrate. Furthermore, the nature of the residue at the 267 site could also significantly affect the enzyme activity by regulating substrate binding affinity and product release. The study provides useful information for the directed evolution of mannanases.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Pantoea agglomerans Endo-β-1, 4-mannanase (man26p) เฮมิเซลลูโลสไฮโดรไลซ์โดยการแบ่งตัวภายในพันธบัตรในโซ่ Mannan ตาม เพื่อให้ได้เอ็นไซม์ที่ดีขึ้นและเข้าใจความสัมพันธ์ของโครงสร้างและหน้าที่ที่ดีกว่า man26p ถูกออกแบบโดยใช้ดีเอ็นเอวิธีที่ดัดแปลงสับและแผ่นกัน 96-เทคโนโลยีการคัดกรองสูงผ่าน เมื่อเทียบกับเอนไซม์ชนิดป่าสองสายพันธุ์ที่ gly267ser และ his134arg/phe141leu ได้อย่างมีประสิทธิภาพ 1.14 และ 3.30 เท่าเพิ่มขึ้นเป็นตัวเร่งปฏิกิริยา (k (แมว) / k (ม. )) ต่อเหงือกถั่วตั๊กแตน (LBG) ที่ได้รับจากห้องสมุดกลายพันธุ์ที่มี 19,700 โคลน รวมกับเว็บไซต์กำกับฉับแทนมากขึ้นได้ถูกนำมาลงในเว็บไซต์ 134, หมู่ที่, his134arg และ his134lys แสดง 2.81 และ 275-พับเพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับประสิทธิภาพของตัวเร่งปฏิกิริยาเอนไซม์ชนิดป่า และมีการเพิ่มขึ้นใน PK (ก) ค่าของโซ่ด้านข้างของตกค้างกลายพันธุ์ที่เว็บไซต์ 134 ลดลงพบว่าใน K ค่าของพวกเขา (เมตร) กับ LBGการสร้างแบบจำลองและการวิเคราะห์โมเลกุลเชื่อมต่อของพื้นผิวแสดงให้เห็นว่าการเพิ่มประสิทธิภาพของรายชื่อผู้ติดต่อหรือขั้วประจุบวกที่เว็บไซต์ 134 ส่วนร่วมในการทำงานร่วมกันของเอนไซม์กับสารตั้งต้น นอกจากนี้ธรรมชาติของสารตกค้างที่ 267 เว็บไซต์อย่างมีนัยสำคัญก็อาจส่งผลกระทบต่อกิจกรรมของเอนไซม์โดยการควบคุมสารตั้งต้นสัมพันธ์ที่ใกล้ชิดผูกพันและการเปิดตัวผลิตภัณฑ์การศึกษาให้ข้อมูลที่เป็นประโยชน์สำหรับการวิวัฒนาการของ mannanases

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Pantoea agglomerans endo-β-1, 4-mannanase (Man26P) hydrolyzes hemicellulose โดย cleaving พันธบัตรภายในห่วงโซ่ตาม mannan การได้รับเอนไซม์ดีขึ้น และเข้าใจความสัมพันธ์ฟังก์ชันโครงสร้างดี Man26P ถูกวิศวกรรมโดยใช้ดีเอ็นเอการแก้ไขสับวิธีและเทคโนโลยีคัดกรองอัตราความเร็วสูงดี 96 แผ่น เมื่อเทียบกับป่าชนิดเอนไซม์ สายสองพันธุ์ Gly267Ser และ His134Arg/Phe141Leu กับ 1.14 - และ 3.30 - fold เพิ่มประสิทธิภาพตัวเร่งปฏิกิริยา (k(cat)/K(m)) ไปทางโลคัสท์ถั่วหมากฝรั่ง (LBG) ได้รับมาจากไลบรารีการกลายพันธุ์ที่ประกอบด้วยโคลน 19,700 รวมกับตรงไซต์ mutagenesis ทดแทนเพิ่มเติมถูกนำเข้าสู่เว็บไซต์ 134 หมู่ที่ His134Arg และ His134Lys จัดแสดง 2.81 และ 275-fold เพิ่มประสิทธิภาพตัวเร่งปฏิกิริยาและเอนไซม์ชนิดป่า และ ด้วยการเพิ่มค่า pK(a) ของโซ่ข้างของตกกลายที่ 134 ลดการถูกตรวจสอบในค่า K(m) กับ LBG สร้างแบบจำลองระดับโมเลกุลและการวิเคราะห์เทียบกับพื้นผิวแนะนำว่า ของติดต่อโพลาร์หรือบวกค่าธรรมเนียมที่ไซต์ 134 ร่วมโต้ตอบของเอนไซม์ที่มีพื้นผิว นอก ธรรมชาติของสารตกค้างที่ไซต์ 267 อาจจะผลกิจกรรมเอนไซม์ ด้วยการควบคุมพื้นผิวการผูกความสัมพันธ์และผลิตภัณฑ์ออก การศึกษาช่วยให้ข้อมูลที่เป็นประโยชน์สำหรับการวิวัฒนาการโดยตรงของ mannanases

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

pantoea agglomerans Endo - เฉพาะ 14 - mannanase (ชาย 26 P ) hydrolyzes hemicellulose แทรกกายออกจากฝูงชนโดยพันธบัตร ภายใน ในโซ่ตรวน mannan - ซึ่งใช้ได้ ในการสั่งซื้อเพื่อขอรับด้วยเอนไซม์ดีขึ้นและทำความเข้าใจเกี่ยวกับความสัมพันธ์กับโครงสร้าง - ทำงานได้ดีขึ้นคน 26 P ได้รับการออกแบบมาโดยใช้วิธีการแก้ไขดีเอ็นเอมาและที่ 96 - รวมทั้งแผ่นสูง - ความเร็วในการถ่ายโอนข้อมูลที่กลั่นกรองเทคโนโลยี เมื่อเทียบกับเอนไซม์ป่า - พิมพ์ได้สองข้าวเจ้า gly , 267 SER และของเขา 134 a arg / 141 ,ลิวเพพร้อมด้วย 1.14 และ 3.30 เท่าเพิ่มขึ้นมีเครื่องฟอกไอเสียอย่างมี ประสิทธิภาพ ( K ( CAT )/ K (ม.))ไปยังถนน Locust เมล็ดกาแฟเหงือก( lbg )ได้จาก mutant ไลบรารีที่มี 19,700 โคลน. เมื่อใช้งานร่วมกับผลผลิตของไซต์การแทนโดยตรงจำนวนมากได้เข้ามา 134 เว็บไซต์ซึ่งได้แก่ 134 A และ 134 a Lys ของเขามา 2.81 - 275 - ท่าก้มแตะพื้นมีเครื่องฟอกไอเสียอย่างมี ประสิทธิภาพ เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับเอนไซม์ป่า - พิมพ์ได้ และพร้อมด้วยการเพิ่มขึ้นใน PK ( A )ค่าของโซ่ด้านข้างของสารตกค้างโดยเฉพาะคอลัมนิสต์ชื่อดังที่ 134 เว็บไซต์นี้จะลดลงที่พบว่าใน K ( M )ค่าของตนต่อ lbg.การสร้างแบบจำลองระดับโมเลกุลและการวิเคราะห์การเชื่อมต่อของผิวหน้าที่แนะนำว่าการเพิ่มของการติดต่อรับสัญญาณเสียงหรือค่าบริการในเชิงบวกที่ 134 ของไซต์ที่มีส่วนช่วยในการปฏิสัมพันธ์ของเอนไซม์ที่มีผิวหน้า ยิ่งไปกว่านั้นลักษณะของสิ่งแปลกปลอมที่ 267 เว็บไซต์ที่ไม่มีนัยสำคัญต่อการทำงานของเอนไซม์ที่โดยกำหนดวางจำหน่าย ผลิตภัณฑ์ และความสัมพันธ์ยังมีผลผูกพันหน้าติดอยู่กับพื้นผิว organicการศึกษาที่จะให้ข้อมูลที่เป็นประโยชน์สำหรับการพัฒนาโดยตรงของ mannanases