MATERIALS AND METHODSPreparation of

MATERIALS AND METHODS
Preparation of Cell Extracts and Virus. KB cells were grown
and infected with Ad2 as described (7). "Late" infected cell extracts
were labeled with [35S]methionine (40 p.Ci/ml; 954 CiY
mmol; 1 Ci = 3.7 x 1010 becquerels; New England Nuclear)
from 15 to 21 hr after infection. "Early" infected cell extracts
were prepared by using cycloheximide (CHX) and arabinosylcytosine
(AraC) as described (8). 32P-Labeled extracts were prepared
by labeling cells with inorganic 32P04 (1 mCi/ml; carrierfree;
New England Nuclear). Cell pellets (4 x 107 cells) were
prepared according to the method of O'Farrell (1). Ad2 virions
labeled with [35S]methionine were purified as reported (7).
Protein concentration was estimated by the method of Lowry
et al. (9).
ID and 2D Gel Electrophoresis. For ID gels, extracts containing
5 X 105 cpm or 150 pAg of protein were applied per
lane. For 2D gels, 5 x 106 cpm or 600 Ag ofprotein was used.
[35S]Methionine-labeled (2 x 10" cpm) virion was applied to
both ID and 2D gels. '4C-Labeled proteins were used as molecular
weight markers (New England Nuclear). ID gels and the

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ
เตรียมสารสกัดจากเซลล์และไวรัส เซลล์ KB ได้ปลูก
และติด Ad2 อธิบาย (7) สารสกัดจากเซลล์ที่ติดเชื้อ "สาย"
ถูกติดป้าย methionine [35S] (40 p.Ci/ml แหล่ง 954
mmol; 1 Ci = 3.7 x 1010 becquerels นิวเคลียร์นิวอิงแลนด์)
จาก 15 ไป 21 ชั่วโมงหลังจากการติดเชื้อ ติดเชื้อเซลล์สารสกัดจาก "ต้น"
ถูกเตรียมโดย cycloheximide (CHX) และ arabinosylcytosine
(AraC) ตาม (8) มีเตรียมสารสกัดจากป้าย 32P
โดยติดฉลากเซลล์กับอนินทรีย์ 32P 04 (mCi 1 ml; carrierfree;
นิวเคลียร์นิวอิงแลนด์) เซลล์เกล็ด (4 x 107 เซลล์) ถูก
เตรียมตามวิธีของ O'Farrell (1) Ad2 virions
ป้าย ด้วย [35S] methionine มีบริสุทธิ์รายงาน (7) .
โปรตีนเข้มข้นที่ถูกประเมิน โดยวิธี Lowry
et al. (9) .
รหัสและ Electrophoresis เจ 2D สำหรับ ID เจ สารสกัดประกอบด้วย
5 X 105 cpm หรือปลาย 150 แห่งโปรตีนถูกนำไปใช้ต่อ
เลน สำหรับเจ 2D, 5 x 106 หน้า/นาทีหรือ 600 Ag ofprotein ใช้
[35S] ป้าย Methionine virion (cpm 2 x 10") ถูกใช้กับ
ID และเจ 2D ' ป้าย 4C โปรตีนใช้เป็นโมเลกุล
น้ำหนักเครื่องหมาย (นิวอิงแลนด์นิวเคลียร์) เจ ID และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธี
การเตรียมสารสกัดจากเซลล์และไวรัส กิโลไบต์เซลล์ถูกปลูก
และการติดเชื้อ Ad2 ตามที่อธิบายไว้ (7) "สาย" สารสกัดจากเซลล์ที่ติดเชื้อ
ถูกกำกับด้วย [35S] methionine (40 p.Ci / ml; ciy 954
มิลลิโมล; 1 Ci = 3.7 x 1010 becquerels; นิวอิงแลนด์นิวเคลียร์)
15-21 ชั่วโมงหลังจากการติดเชื้อ "ต้น" สารสกัดจากเซลล์ที่ติดเชื้อ
ได้รับการจัดทำขึ้นโดยใช้ cycloheximide (CHX) และ arabinosylcytosine
(ARAC) ตามที่อธิบายไว้ (8) สารสกัดจาก 32P-ป้ายถูกจัดเตรียม
โดยการติดฉลากเซลล์ที่มี 32P04 นินทรีย์ (1 mCi / ml; carrierfree;
นิวอิงแลนด์นิวเคลียร์) เม็ดมือถือ (4 x 107 เซลล์) มี
การจัดทำตามวิธีการของแฟร์เรลล์ (1) virions Ad2
กำกับด้วย [35S] methionine และทำให้บริสุทธิ์ตามที่รายงาน (7)
ความเข้มข้นของโปรตีนเป็นที่คาดกันโดยวิธีการของโลว์รีย์
และอัล (9)
ID และ 2D ข่าวคราว เจลสำหรับ ID, สารสกัดที่มี
5 X 105 แผ่นหรือ 150 Pag ของโปรตีนที่ถูกนำไปใช้ต่อ
ช่อง สำหรับเจล 2D, 5 x 106 แผ่นหรือ 600 Ag ofprotein ถูกนำมาใช้
[35S] Methionine ติดฉลาก (2 x 10 "CPM) virion ถูกนำไปใช้
ทั้ง ID และเจล 2D. '4 โปรตีน C-ป้ายถูกนำมาใช้เป็นโมเลกุล
เครื่องหมายน้ำหนัก ( นิวอิงแลนด์นิวเคลียร์). เจลและ ID

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการเตรียมสารสกัด
เซลล์และไวรัส บางครั้งเซลล์ปลูก
และติดเชื้อด้วย ad2 ตามที่อธิบายไว้ ( 7 ) สาย " ติดเชื้อเซลล์สารสกัด
ถูกป้ายด้วย [ 35s ] เมทไธโอนีน ( 40 p.ci/ml ; 954 Ciy
mmol 1 CI = 3.7 x 1010 เบคเคอเรล ; อังกฤษนิวเคลียร์ )
จาก 15 ถึง 21 ชั่วโมงหลังจากการติดเชื้อ . ต้น " ติดเชื้อเซลล์สารสกัด
เตรียมโดยใช้ร้อยเรียง ( chx ) และ arabinosylcytosine
( arac ) ตามที่อธิบายไว้ ( 8 ) สารสกัดจาก 32p ติดป้ายเตรียม
โดยการติดฉลากเซลล์ที่มีสารอนินทรีย์ 32p04 ( 1 มิลลิคูรีต่อมิลลิลิตร ; carrierfree ;
อังกฤษนิวเคลียร์ ) เซลล์เม็ด ( 4 x 107 เซลล์ )
เตรียมตามวิธีส่วน ( 1 ) ad2 ไวรัส
ป้ายด้วย [ 35s ] เมทไธโอนีนเป็นบริสุทธิ์ รายงานว่า ( 7 ) .
ความเข้มข้นโปรตีนประมาณโดยวิธีของโลว์รีย์
et al .
( 9 )รหัส 2D และเจล บัตรประจําตัวเจล สารสกัดที่มี
5 x 105 CPM หรือ 150 Pag ของโปรตีนที่ใช้ต่อ
เลน สำหรับ 2D เจล , 5 x 106 CPM หรือ 600 เอจีของใช้ 35s
[ ] ยังมีป้าย ( 2 x 10 " CPM ) ไวริออนใช้
ทั้ง ID และ 2D เจล’ 4C ป้ายโปรตีนถูกใช้เป็นเครื่องหมายโมเลกุล
( อังกฤษญี่ปุ่น ) เจล ID และ