2.2. Total RNA isolationTotal RNA o

2.2. Total RNA isolation
Total RNA of the samples was extracted using the TRIsure kit
(Bioline, Taunton, MA, USA) following the protocol for RNA isolation.
Briefly, total RNA was extracted from 100 mg of shrimp tissue using
1 ml of TRIsure and homogenization. After incubation for 5 min at
room temperature, 200 μl of chloroform was added and the solution
was vigorously mixed. The tube was incubated for 3 min before centrifugation
at 12,000 ×g for 15 min at 4 °C. The aqueous phase was transferred
to a fresh tube, 500 μl of 100% cold isopropyl alcohol was added
and gentle mixed. After incubation for 10 min at room temperature,
the tube was centrifuged at 12,000 ×g for 10 min at 4 °C and the pellet
was rinsed with 75% (v/v) ethanol, air dried, and dissolved in 50 μl of
RNase-free water. RNA concentration and quality were assessed by
spectrophotometer at wavelengths of 260 and 280 nm (NanoDrop
2000c Spectrophotometer, Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE,
USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. รวมแยกอาร์เอ็นเออาร์เอ็นเอรวมตัวอย่างถูกสกัดโดยใช้ชุด TRIsure(Bioline, Taunton, MA, USA) โพรโทคอลสำหรับ RNA แยกต่อไปสั้น ๆ อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกแยกจาก 100 มิลลิกรัมการใช้เนื้อเยื่อของกุ้ง1 มิลลิลิตรของ TRIsure และ homogenization หลังจากบ่มเวลา 5 นาทีเพิ่มอุณหภูมิห้อง μl 200 ของคลอโรฟอร์ม และการแก้ไขถูกแรง ๆ ผสม หลอดมี incubated 3 นาทีก่อนหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 × g 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส โอนย้ายเฟสอเพิ่ม 500 μl 100% ดื่มเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl เย็นไปหลอดสดและอ่อนโยนผสม หลังจากบ่มที่อุณหภูมิห้อง 10 นาทีหลอดถูกจากที่ 12,000 × g 10 นาทีที่ 4 ° C และเม็ดถูกล้าง ด้วยเอทานอล 75% (v/v) อากาศแห้ง และละลายใน μl 50 ของน้ำฟรี RNase คุณภาพและความเข้มข้นของ RNA ที่ถูกประเมินโดยสเปคที่ความยาวคลื่น 260 และ 280 nm (NanoDrop ของสเปค 2000c วิทยาศาสตร์ เทอร์โม Fisher วิลมิลตัน DEสหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 รวม RNA แยก
RNA รวมของกลุ่มตัวอย่างถูกสกัดโดยใช้ชุด TRIsure
(Bioline ทอน, MA, USA) ดังต่อไปนี้โปรโตคอลสำหรับการแยก RNA.
สั้น ๆ , RNA ทั้งหมดถูกสกัดจาก 100 มิลลิกรัมของเนื้อเยื่อกุ้งใช้
1 มิลลิลิตรของ TRIsure และเป็นเนื้อเดียวกัน หลังจากการบ่มเป็นเวลา 5 นาทีที่
อุณหภูมิห้อง 200 ไมโครลิตรคลอโรฟอร์มถูกเพิ่มเข้ามาและวิธีการ
ผสมอย่างจริงจัง หลอดถูกบ่มเป็นเวลา 3 นาทีก่อนที่จะหมุนเหวี่ยง
ที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส เฟสน้ำถูกย้าย
ไปยังหลอดสด 500 ไมโครลิตรของเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isopropyl เย็น 100% ถูกบันทึก
และอ่อนโยนผสม หลังจากการบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
หลอดถูกหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 ° C และเม็ด
ได้รับการล้างด้วย 75% (v / v) เอทานอลที่มีอากาศแห้งและละลายใน 50 ไมโครลิตรของ
RNase- น้ำฟรี ความเข้มข้นของอาร์เอ็นเอและคุณภาพที่ได้รับการประเมินโดย
spectrophotometer ที่ความยาวคลื่น 260 และ 280 นาโนเมตร (NanoDrop
2000c Spectrophotometer, Thermo Fisher Scientific, Wilmington, DE,
สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การแยกอาร์เอ็นเอทั้งหมดอาร์เอ็นเอทั้งหมดของตัวอย่างที่สกัดโดยใช้ trisure ชุด( bioline Taunton , MA , USA ) ดังต่อไปนี้โปรโตคอลเพื่อแยก RNAสั้น ๆ , อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากเนื้อเยื่อของกุ้งใช้ 100 มก.1 มิลลิลิตร และ การ trisure . หลังจากบ่มเป็นเวลา 5 นาทีที่อุณหภูมิ 200 μชั้นคลอโรฟอร์มได้เพิ่ม และ โซลูชั่นผสมอย่างแข็งขัน หลอดมันบ่มนาน 3 นาที ก่อนปั่นที่ 12000 × G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 องศา ระยะที่น้ำถูกย้ายเป็นหลอดใหม่ 500 μ L 100% แอลกอฮอล์ isopropyl เป็นเย็นและอ่อนโยนผสม หลังจากบ่มเป็นเวลา 10 นาที ในอุณหภูมิห้องหลอดเป็นระดับที่ 12 × G สำหรับ 10 นาทีที่ 4 ° C และเม็ดถูกล้างด้วย 75 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) เอทานอล อากาศแห้ง และละลายในμ 50 ล.น้ำเลสฟรี ความเข้มข้นของ RNA และมีคุณภาพมีการประเมินโดยวัสดุที่ความยาวคลื่น 260 และ 280 nm ( nanodrop2000c วัสดุเทอร์โมฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ , Wilmington , DE ,สหรัฐอเมริกา )