Materials and MethodsPlant Growth C

Materials and Methods
Plant Growth Conditions and Mutant Characterization
Arabidopsis Columbia (Col-4) wild-type plants were obtained from the Arabidopsis Biological
Resource Center (ABRC). Two T-DNA insertion mutants for Arabidopsis CGL160 (gene ID
At2g31040) were obtained: SALK_057229 (later on called cgl160-1) and WiscDsLoxHs024_02B
(later on called cgl160-2). Plants were grown on soil under long day conditions (16 h light, 8 h
dark) and under short-day conditions (8 h light, 16 h dark) at 120 μmol photons m-2 s-1 in a
Conviron growth chamber (model MTR26) equipped with light bulbs from Philips (Master
TL-D 58W/840). For fluctuating low/normal light growth conditions, plants were illuminated
for 5 min with 120 μmol photons m-2 s-1, followed by 5 min of illumination with 20 μmol photons
m-2 s-1. This pattern was repeated during the complete 16 hours photoperiod. The day temperature
was set to 22°C, night temperature was 16°C. Relative humidity was 60% during the
day and 75% during the night. Mutant plants were screened by PCR for heterozygosity or homozygosity
of the T-DNA insertion using primers 057229_Forward and 057229_Reverse
for SALK_057229, primers WiscHs024_Forward and WiscHs024_Reverse for WiscDsLoxHs024_
02B and T-DNA left border primers LBb1 and WiscDsLoxHS for SALK and Wisc
lines, respectively. DNA fragments were amplified by 40 cycles of denaturation at 94°C for 1
min, annealing at 54°C for 55 s and polymerization at 72°C for 1 min followed by a final extension
for 10 min at 72°C (S1 Table).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการเงื่อนไขการเติบโตของพืชและสมบัติกลายพันธุ์พืชป่าชนิด Arabidopsis โคลัมเบีย (คอลัมน์ 4) ได้รับมาจากชีวภาพ Arabidopsisศูนย์กลางทรัพยากร (ABRC) สายพันธุ์ดีเอ็นเอ T แทรกสองสำหรับ Arabidopsis CGL160 (ID ยีนAt2g31040) ได้รับมา: SALK_057229 (ภายหลังเรียกว่า cgl160-1) และ WiscDsLoxHs024_02B(ภายหลังเรียกว่า cgl160-2) มีปลูกพืชบนดินภายใต้นานวันเงื่อนไข (แสง 16 h, 8 hมืด) และภาย ใต้เงื่อนไข short-day (ไฟ 8 h, h 16 เข้ม) 120 μmol photons m 2 s-1 ในการConviron เจริญเติบโตของหอการค้า (รุ่น MTR26) พร้อมหลอดไฟฟิลิปส์ (หลักจากTL-D 58W/840) สำหรับความเจริญเติบโตแสงต่ำ/ปกติเงื่อนไข พืชถูกอร่ามสำหรับ 5 นาที 120 μmol photons m 2 s-1 ตาม ด้วย 5 นาทีของแสงสว่างกับ 20 μmol photonsm-2 s-1 รูปแบบนี้มีซ้ำในระหว่างชั่วโมงสมบูรณ์ 16 ชั่วโมง อุณหภูมิวันที่ตั้ง 22° c อุณหภูมิกลางคืน 16 องศาเซลเซียส ความชื้นสัมพัทธ์ 60% ขณะวันและ 75% ในตอนกลางคืน พืชกลายพันธุ์ได้ฉาย โดย PCR สำหรับ heterozygosity homozygosityของแทรก T-ดีเอ็นเอโดยใช้ไพรเมอร์ 057229_Forward และ 057229_Reverseสำหรับ SALK_057229, WiscHs024_Forward และ WiscHs024_Reverse สำหรับ WiscDsLoxHs024_ ไพรเมอร์02B และดีเอ็นเอ T ซ้ายชายแดนไพรเมอร์ LBb1 และ WiscDsLoxHS สำหรับ SALK Wiscบรรทัด ตามลำดับ ชิ้นส่วนดีเอ็นเอถูกขยาย ด้วยวงจร 40 การ denaturation ที่ 94° C 1นาที การอบเหนียวที่ 54° C s และ polymerization ที่ 72° C ใน 1 นาทีตาม ด้วยส่วนขยายสุดท้าย 55ใน 10 นาทีที่ 72° C (S1 ตาราง)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
สภาพการเจริญเติบโตและกลายพันธุ์ลักษณะ
Arabidopsis โคลัมเบีย (เทือกเขา-4) พืชป่าชนิดที่ได้รับจาก Arabidopsis ชีวภาพ
ศูนย์วิทยบริการ (Abrc) แทรกสองเสื้อดีเอ็นเอกลายพันธุ์สำหรับ Arabidopsis CGL160 (ยีน ID
At2g31040) ที่ได้รับ: SALK_057229 (ต่อมาเรียกว่า cgl160-1) และ WiscDsLoxHs024_02B
(ต่อมาเรียกว่า cgl160-2) พืชที่ปลูกในดินภายใต้เงื่อนไขทั้งวัน (16 ชั่วโมงแสง, 8 ชั่วโมง
เข้ม) และภายใต้เงื่อนไขที่สั้นวัน (8 ชั่วโมงแสงมืด 16 ชั่วโมง) ที่ 120 ไมโครโมลโฟตอน M-2 s-1 ใน
การเจริญเติบโตของห้อง Conviron (รูปแบบ MTR26) พร้อมกับหลอดไฟจากฟิลิปส์ (Master
TL-D 58W / 840) สำหรับผันผวนต่ำ / ปกติสภาวะการเจริญเติบโตแสงพืชได้รับความสว่าง
เป็นเวลา 5 นาที 120 ไมโครโมลโฟตอน M-2 s-1 ตามด้วย 5 นาทีของการส่องสว่างที่มี 20 ไมโครโมลโฟตอน
M-2 s-1 การทำแบบนี้ซ้ำในช่วงที่สมบูรณ์ 16 ชั่วโมงต่อช่วงแสง อุณหภูมิวัน
ถูกกำหนดเป็น 22 องศาเซลเซียสอุณหภูมิกลางคืน 16 ° C ความชื้นสัมพัทธ์ 60% ในช่วง
วันและ 75% ในช่วงเวลากลางคืน พืชกลายพันธุ์ที่ได้รับการคัดเลือกจาก PCR สำหรับ heterozygosity หรือ homozygosity
ของการแทรกเสื้อดีเอ็นเอโดยใช้ไพรเมอร์ 057229_Forward และ 057229_Reverse
สำหรับ SALK_057229 ไพร WiscHs024_Forward และ WiscHs024_Reverse สำหรับ WiscDsLoxHs024_
02B และ T-DNA ซ้ายไพรชายแดน LBb1 และ WiscDsLoxHS สำหรับ SALK และ Wisc
เส้นตามลำดับ ดีเอ็นเอถูกขยายได้ถึง 40 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1
นาที, การอบที่ 54 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 55 และพอลิเมอที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีตามด้วยนามสกุลสุดท้าย
เป็นเวลา 10 นาทีที่ 72 ° C (S1 ตาราง) .

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ เงื่อนไขและลักษณะการเจริญเติบโตของพืชที่กลายพันธุ์

Arabidopsis โคลัมเบีย ( col-4 ) ของพืช ได้จากศูนย์ทรัพยากรชีวภาพ arabidopsis
( abrc ) สอง t-dna แทรกกลายพันธุ์สำหรับ Arabidopsis cgl160 ( ยีน ID
at2g31040 ) ที่ได้รับ : salk_057229 ( ภายหลังเรียกว่า cgl160-1 ) และ wiscdsloxhs024_02b
( ภายหลังเรียกว่า cgl160-2 )พืชที่ปลูกในดินภายใต้เงื่อนไขทั้งวัน ( 16 H แสง 8 H
มืด ) และภายใต้สภาพวันสั้น ( 8 H แสง 16 ชั่วโมง มืด ) ที่ 120 μ mol โฟตอนด้วย
conviron ที่สุดในการเจริญเติบโต ( ห้องแบบ mtr26 ) พร้อมหลอดไฟจากฟิลิปส์ ( อาจารย์
tl-d 58w / 840 ) . สำหรับความผันผวนต่ำ / ปกติเงื่อนไขการเจริญเติบโตพืชแสงสว่าง
5 นาที 120 μโมลที่สุดโฟตอนด้วย ,ตามด้วย 5 นาทีของรัศมี 20 μ mol โฟตอน
ด้วยที่สุด . รูปแบบนี้กันระหว่างแสง 16 ชั่วโมง เสร็จสมบูรณ์ วัน อุณหภูมิ 22 องศา C
ตั้งไว้ที่ อุณหภูมิกลางคืน 16 องศา ความชื้นสัมพัทธ์ 60 % ในระหว่างวัน
และ 75% ในช่วงเวลากลางคืน พืชที่กลายพันธุ์จากเชื้อเฉพาะที่หรือ homozygosity
โดยสำหรับจากการใช้ไพรเมอร์และ t-dna 057229_forward 057229_reverse
สำหรับ salk_057229 wischs024_forward , ชนิด wischs024_reverse สำหรับ wiscdsloxhs024_
02b t-dna ไพรเมอร์และขอบด้านซ้ายและ lbb1 wiscdsloxhs สำหรับโรคโปลิโอ wisc
และเส้น ตามลำดับ ชิ้นส่วนดีเอ็นเอถูกขยายโดย 40 รอบ ( ที่ 94 ° C 1
มินการอบอ่อนที่ 54 ° C และ 55 ของพอลิเมอไรเซชันที่ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที ตามด้วย
นามสกุลสุดท้ายสำหรับ 10 นาทีที่ 72 ° C ( ตาราง S1 )