MRS liquid medium and incubated wit

MRS liquid medium and incubated without shaking for 24 h at
37 C. Preinocula of Saccharomyces cerevisiae strain NRRL Y-2034
were grown in 300 mL Erlenmeyer flasks with 75 mL yeast peptone
(YP) media supplemented with 5% (w/v) dextrose at 32 C and
200 rpm for 24 h. Yeast and bacterial cells were harvested by centrifugation
at 4000g, 4 C for 15 min and resuspended in phosphate
buffered saline to an OD600 of 80 and 8 for the yeast and bacteria,
respectively.
Liquefied corn mash was obtained from a commercial dry-grind
ethanol facility and stored in 4 L aliquots at 20 C. Model
fermentations were in duplicate 40 mL cultures in 50 mL flasks,
containing corn mash (33% solids) supplemented with 0.12%
(w/v) ammonium sulfate and 0.05% (v/v) glucoamylase (Optidex
L-400, Genencor International Inc., Rochester, NY). Cultures were
inoculated with 0.5 mL of diluted yeast and bacterial preinocula,
equivalent to final concentrations of 6  107 yeast cells/mL and
1  107 bacterial cells/mL. Sterile saline (0.5 mL) served as a negative
control in place of a bacterial challenge. Isolate BR0315-1
Lactobacillus fermentum was used as a positive control challenge
for a ‘‘stuck’’ fermentation in each batch (Bischoff et al., 2009).
Flasks were capped with a vented rubber stopper and incubated
at 32 C and 100 rpm for 72 h.
For analysis, cultures were clarified by centrifugation and
supernatants were diluted 10-fold with ddH2O. Ethanol, glucose,
lactic acid, and acetic acid were determined by high performance
liquid chromatography using a 300 mm Aminex HPX 87H column
(Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA) on a HP 1100 Series
HPLC system equipped with a refractive index detector (Agilent
Technologies, Santa Clara, CA). Samples (10 ll) were injected onto
the column at 65 C and eluted with a 5 mM H2SO4 mobile phase at
0.6 mL/min.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กลาง MRS ของเหลวและบ่มโดยไม่ต้องเขย่าเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่
37 ของซี Preinocula Saccharomyces cerevisiae สายพันธุ์ NRRL Y-2034
ได้รับการปลูกใน 300 มิลลิลิตรขวด Erlenmeyer กับเปปโตนยีสต์ 75 มิลลิลิตร
(YP) สื่อเสริมด้วย 5% (w / v) เดกซ์โทรสที่ 32 C และ
200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ยีสต์และแบคทีเรียที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 4000g 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาทีและ resuspended ในฟอสเฟตน้ำเกลือบัฟเฟอร์ไปยังOD600 80 และ 8 สำหรับยีสต์และแบคทีเรียตามลำดับ. บดข้าวโพดเหลวที่ได้รับจากการค้าแห้งบดโรงงานเอทานอลและเก็บไว้ใน 4 aliquots L ที่ 20 ซีรุ่นหมักอยู่ในวัฒนธรรมที่ซ้ำกัน 40 มิลลิลิตรในขวด 50 มล, มีบดข้าวโพด (ของแข็ง 33%) เสริมด้วย 0.12% (w / v) แอมโมเนียมซัลเฟตและ 0.05% (v / v) glucoamylase (Optidex L-400, Genencor อินเตอร์เนชั่นแนลอิงค์โรเชสเตอร์, นิวยอร์ก) วัฒนธรรมที่ได้รับเชื้อด้วย 0.5 มิลลิลิตรของยีสต์เจือจางและ preinocula แบคทีเรียเทียบเท่ากับความเข้มข้นสุดท้ายของ6 107 เซลล์ยีสต์ / มิลลิลิตรและ1 107 เซลล์แบคทีเรีย / มิลลิลิตร น้ำเกลือปราศจากเชื้อ (0.5 มิลลิลิตร) ทำหน้าที่เป็นเชิงลบการควบคุมในสถานที่ของความท้าทายของเชื้อแบคทีเรีย แยก BR0315-1 Lactobacillus fermentum ถูกใช้เป็นความท้าทายที่ควบคุมบวกสำหรับ'ติด' 'หมักในแต่ละชุด (บิชอฟ et al., 2009). Flasks ถูกปกคลุมด้วยยางอุดระบายและบ่มที่32 องศาเซลเซียสและ 100 รอบต่อนาที 72 ชม. สำหรับการวิเคราะห์วัฒนธรรมได้รับการชี้แจงจากการหมุนเหวี่ยงและsupernatants ถูกเจือจาง 10 เท่าด้วย ddH2O เอทานอลกลูโคสกรดแลคติกและกรดอะซิติกได้รับการพิจารณาโดยมีประสิทธิภาพสูงของเหลวchromatography ใช้ 300 มิลลิเมตร Aminex HPX คอลัมน์ 87H (ห้องปฏิบัติการ Bio-Rad, Inc ดาว CA) บน HP 1100 ชุดระบบHPLC อุปกรณ์ที่มีดัชนีหักเห เครื่องตรวจจับ (Agilent Technologies, ซานตาคลารา, แคลิฟอร์เนีย) ตัวอย่าง (10 LL) ถูกฉีดลงบนคอลัมน์ที่65 ชะซีและมีขั้นตอนที่ 5 มิลลิ H2SO4 มือถือที่0.6 มิลลิลิตร / นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นางน้ำขนาดกลาง และบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงโดยไม่สั่นที่
37 C preinocula ของ Saccharomyces cerevisiae สายพันธุ์ NRRL y-2034
ถูกปลูกในขวด 75 ml ยีสต์เออร์เลนเมเยอร์ 300 มิลลิลิตรตามลำดับ
( YP ) สื่อเสริมด้วย 5 % ( w / v ) เดกซ์โทรสที่ 32 C
200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 24 ชั่วโมง ยีสต์ แบคทีเรีย เซลล์คือ เก็บเกี่ยวโดยปั่น 4000g
ที่ 4 เป็นเวลา 15 นาที และ resuspended
ในฟอสเฟตในน้ำเกลือ เพื่อ od600 80 และ 8 สำหรับยีสต์และแบคทีเรีย

บดข้าวโพด ตามลำดับ และได้รับจากการค้าบริการบด
เอทานอลสิ่งอำนวยความสะดวกและเก็บไว้ใน 4 L เฉยๆที่ 20 C แบบ
fermentations อยู่ซ้ำ 40 ml ในวัฒนธรรม 50 ml ขวด ,
ที่มีบดข้าวโพด ( 33 % ของแข็งเสริมด้วย 0.12 %
( w / v ) และแอมโมเนียมซัลเฟต 0.05 เปอร์เซ็นต์ ( v / v )
l-400 ม ( optidex ,genencor อินเตอร์เนชั่นแนลอิงค์ , โรเชสเตอร์ , นิวยอร์ก ) วัฒนธรรมคือ
ใส่ 0.5 ml เมื่อยีสต์และแบคทีเรีย preinocula
, เทียบเท่ากับความเข้มข้นสุดท้ายของ 6  107 ยีสต์เซลล์ / มิลลิลิตรและ
1  107 แบคทีเรียเซลล์ / มล. หมันเค็ม ( 0.5 มิลลิลิตร ) ทำหน้าที่เป็นตัวควบคุมเชิงลบ
ในสถานที่ของการท้าทายจากแบคทีเรีย แยก br0315-1
Lactobacillus fermentum ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวกความท้าทาย
สำหรับ ' ' ' 'stuck การหมักในแต่ละชุด ( บิชอป et al . , 2009 ) .
ขวดถูกปกคลุมด้วยจุกยางระบายอากาศโดย
ที่ 32 องศาเซลเซียส และ 100 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 72 ชั่วโมง
สำหรับการวิเคราะห์วัฒนธรรมก็มีปั่นและ
supernatants ลด 10 เท่าด้วย ddh2o น้ำตาลกลูโคส ,
. กรดแลคติกและกรดอะซิติกถูกกำหนดโดย
ประสิทธิภาพสูงวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวใช้ 300 มม. aminex hpx 87h คอลัมน์
( ไบโอ ราด Laboratories , Inc , Hercules , CA ) บน HP 1100 ชุด
2 ระบบติดตั้งเครื่องตรวจจับค่าดัชนีหักเห ( Agilent
Technologies , ซานตาคลารา , แคลิฟอร์เนีย ) ตัวอย่าง ( 10 จะถูกฉีดลงบน
คอลัมน์ที่ 65 องศาเซลเซียสและตัวอย่างกับ 5 มม. กรดซัลฟิวริกเฟสเคลื่อนที่ที่

0.6 มิลลิลิตร / นาที