Malaria remains a major global heal

Malaria remains a major global health burden with an estimated death toll of almost 900,000 every year (11). Recent reports of newly emerging artemisinin resistance and the emergence of endemic populations of a number of “new,” potentially human-pathogenic Plasmodium species, such as Plasmodium knowlesi, as well as a variety of Plasmodium ovale parasites, in Asia indicate that there is an urgent need for new techniques to provide rapid and highly accurate diagnoses to adequately treat and control malaria (3, 5, 9).

The use of direct PCR allows for PCR amplifications without any prior DNA extraction and purification steps. The Phusion blood DNA polymerase used in the assay is reported to lead to a 25-fold-lower error rate than the common Thermus aquaticus polymerase (2).

The aim of this study was to adapt this novel technique for use in the rapid laboratory-based detection of Plasmodium spp. and to validate the sensitivity of this technique in comparison to that of conventional nested PCR and microscopy (6, 8).

Patient samples were collected between 2007 and 2009 at the MARIB (Malaria Research Initiative Bandarban) center in Bandarban, Chittagong Hill Tracts, Bangladesh, as part of a hospital- and field-based fever survey. Written informed consent was obtained from all study participants or their legal representatives, and the study protocol was approved by the appropriate ethical review committee.

From all participating patients aged 8 years and older, 100 μl venous blood was drawn. From patients younger than 8 years, 2 drops of blood obtained by finger prick was collected and transferred onto 903 filter paper (Schleicher & Schuell BioScience GmBH, Dassel, Germany) in duplicate. Filter papers were air dried at room temperature and stored under airtight conditions at 4°C until further processing. A total number of 140 filter paper samples was included in the evaluation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มาลาเรียเหลือ ภาระสุขภาพหลักสากลกับโทรตายการประเมินของ 900,000 เกือบทุกปี (11) รายงานล่าสุดของใหม่ใหม่ต้านทาน artemisinin และการเกิดขึ้นของประชากรยุงจำนวน "ใหม่ อาจบุคคล pathogenic พลาสโมเดียมชนิด เช่นพลาสโมเดียม knowlesi ตลอดจนความหลากหลายกับ ovale เดียม ในเอเชียระบุว่า มีความเร่งด่วนที่จำเป็นสำหรับเทคนิคใหม่เพื่อให้การวิเคราะห์อย่างรวดเร็ว และแม่นยำสูงเพื่อรักษา และควบคุมโรคมาลาเรีย (3 อย่างเพียงพอ , 5, 9)การใช้ PCR โดยตรงช่วยให้สำหรับ amplifications PCR โดยการสกัดดีเอ็นเอก่อนและฟอกขั้นตอน เลือด Phusion พอลิเมอเรส DNA ที่ใช้ในการวิเคราะห์เป็นรายงานเพื่อนำไปสู่อัตราข้อผิดพลาด 25-fold-ล่างกว่าจะทั่ว Thermus aquaticus พอลิเมอเรส (2)จุดมุ่งหมายของการศึกษานี้มี การปรับเทคนิคนี้นวนิยายสำหรับใช้ในการตรวจโดยห้องปฏิบัติการที่รวดเร็วของพลาสโมเดียมโอ และ การตรวจสอบความไวของเทคนิคนี้โดยที่ PCR ธรรมดาซ้อนและ microscopy (6, 8)ตัวอย่างผู้ป่วยถูกเก็บรวบรวมระหว่าง 2007 และ 2009 ที่ศูนย์ MARIB (Bandarban การริเริ่มวิจัยมาลาเรีย) ใน Bandarban รามิด Chittagong Hill บังคลาเทศ เป็นส่วนหนึ่งของการสำรวจไข้ตามโรงพยาบาล และฟิลด์ แจ้งความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรได้รับจากการร่วมศึกษาหรือตัวแทนของตนตามกฎหมาย และโพรโทคอลการศึกษาได้รับการอนุมัติ โดยคณะกรรมการตรวจสอบจริยธรรมที่เหมาะสมจากทั้งหมดเข้าร่วมผู้ป่วยอายุ 8 ปี และมากกว่า 100 μl เลือดดำออก จากผู้ป่วยอายุน้อยกว่า 8 ปี 2 หยดเลือดที่ได้รับ โดยนิ้วพริกถูกรวบรวม และโอนสำเนาลงบนกระดาษกรอง 903 (Schleicher & GmBH ซื้อ Schuell, Dassel เยอรมนี) กระดาษกรองอากาศแห้งที่อุณหภูมิห้อง และเก็บไว้ภายใต้เงื่อนไขแบบสุญญากาศที่ 4° C จนประมวลผลต่อไป ได้ จำนวน 140 กระดาษกรองตัวอย่างรวมอยู่ในการประเมิน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มาลาเรียยังคงเป็นภาระด้านสุขภาพที่สำคัญระดับโลกที่มีผู้เสียชีวิตประมาณ 900,000 เกือบทุกปี (11) รายงานล่าสุดของที่เกิดขึ้นใหม่ที่เพิ่งต้านทาน artemisinin และการเกิดของประชากรถิ่นของจำนวนของ "ใหม่" ที่อาจเกิดขึ้นของมนุษย์ที่ทำให้เกิดโรคชนิด Plasmodium เช่น Plasmodium knowlesi เช่นเดียวกับความหลากหลายของปรสิต Plasmodium ovale ในเอเชียระบุว่ามีเป็น ความจำเป็นเร่งด่วนสำหรับเทคนิคใหม่เพื่อให้การวินิจฉัยที่รวดเร็วและมีความถูกต้องสูงเพียงพอที่จะรักษาและควบคุมโรคมาลาเรีย (3, 5, 9). การใช้วิธี PCR โดยตรงช่วยให้การขยายเสียง PCR โดยไม่มีการสกัดดีเอ็นเอใด ๆ ก่อนและขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ โพลิเมอร์ดีเอ็นเอเลือด Phusion ที่ใช้ในการทดสอบเป็นรายงานที่นำไปสู่อัตราความผิดพลาด 25 เท่าต่ำกว่าโพลิเมอร์ Thermus aquaticus ร่วมกัน (2). จุดมุ่งหมายของการศึกษาครั้งนี้คือการปรับตัวเข้ากับเทคนิคใหม่นี้สำหรับการใช้งานใน laboratory- อย่างรวดเร็ว ตามการตรวจสอบของ Plasmodium เอสพีพี และการตรวจสอบความไวของเทคนิคนี้ในการเปรียบเทียบกับที่ของ PCR แบบเดิมที่ซ้อนกันและกล้องจุลทรรศน์ (6, 8). ตัวอย่างผู้ป่วยที่ถูกเก็บรวบรวมระหว่างปี 2007 และ 2009 ที่ Marib (มาลาเรียวิจัยความคิดริเริ่ม Bandarban) ศูนย์ Bandarban, Chittagong ขุดเจาะภูเขาบังคลาเทศ ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของโรงพยาบาลและการสำรวจภาคสนามไข้ตาม ความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรที่ได้รับจากผู้เข้าร่วมการศึกษาหรือผู้แทนของตนตามกฎหมายและโปรโตคอลการศึกษาได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการตรวจสอบจริยธรรมที่เหมาะสม. จากผู้ป่วยที่เข้าร่วมโครงการทั้งหมดอายุ 8 ปีและผู้สูงอายุ 100 ไมโครลิตรเลือดดำถูกดึง จากผู้ป่วยที่อายุน้อยกว่า 8 ปี 2 หยดเลือดที่ได้จากการทิ่มนิ้วถูกเก็บรวบรวมและโอนไปยัง 903 กระดาษกรอง (Schleicher และ Schuell ไบ GmbH, Dassel, เยอรมนี) ในที่ซ้ำกัน เอกสารถูกกรองอากาศแห้งที่อุณหภูมิห้องและเก็บไว้ภายใต้สภาพอากาศที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสจนกว่าจะดำเนินการต่อไป จำนวนรวมทั้งสิ้น 140 ตัวอย่างกระดาษกรองถูกรวมอยู่ในการประเมินผล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โรคมาลาเรียยังคงเป็นสาขาด้านสุขภาพเป็นภาระกับคาดว่ามีผู้เสียชีวิตเกือบ 900000 ทุกปี ( 11 ) รายงานล่าสุดของยาต้านใหม่และวิวัฒนาการของประชากร ถิ่นของ " ใหม่ " ที่อาจก่อโรคชนิดพลาสโมเดียมมนุษย์ เช่น พลาสโมเดียม โนวซี่ , เช่นเดียวกับความหลากหลายของปรสิตพลาสโมเดียม โอวาเล ,ในเอเชีย พบว่า มีความต้องการเร่งด่วนสำหรับเทคนิคใหม่เพื่อให้รวดเร็วและถูกต้องสูง สามารถรักษาและควบคุมโรคมาลาเรียการวินิจฉัย ( 3 , 5 , 9 ) .

ใช้ PCR PCR โดยตรงช่วยให้ amplifications โดยไม่ก่อนการสกัดดีเอ็นเอและขั้นตอนการฟอก .การ phusion เลือด DNA polymerase ที่ใช้ในการทดสอบจะรายงานให้นำไปสู่ 25 พับลดอัตราความผิดพลาดมากกว่าปกติ thermus ใช้สื่อ ( 2 )

มีวัตถุประสงค์เพื่อปรับนี้เทคนิคใหม่สำหรับใช้ในห้องปฏิบัติการอย่างรวดเร็วจากการตรวจหาชนิด และตรวจสอบความไวของเทคนิคนี้ในการเปรียบเทียบ ที่ซ้อนกันและการใช้กล้องจุลทรรศน์แบบ PCR ( 6 , 8 ) .

ตัวอย่างผู้ป่วยจำนวนระหว่าง 2007 และ 2009 ที่ คามิ ( โครงการวิจัยโรคมาลาเรียบันดาร์บัน ) ศูนย์ในบันดาร์บัน Chittagong Hill Tracts บังกลาเทศ เป็นส่วนหนึ่งของโรงพยาบาล และการสำรวจภาคสนาม ไข้ขึ้นอยู่ เขียนโดยความยินยอมจากผู้เข้าร่วมการศึกษาทั้งหมดหรือตัวแทนทางกฎหมายของพวกเขาและการศึกษาโปรโตคอลได้รับอนุมัติจากคณะกรรมการพิจารณาจริยธรรมที่เหมาะสม .

จากทั้งหมดที่เข้าร่วมโครงการ ผู้ป่วยอายุ 8 ปี และอายุมากกว่า เลือด 100 μฉันสามารถวาด . จากผู้ป่วยที่อายุน้อยกว่า 8 ปี 2 หยดเลือดได้โดยการใช้นิ้วสะกิดที่ถูกเก็บรวบรวมและโอนไปยังกว่ากรองกระดาษ ( ไชลเคอร์& schuell วิทยาศาสตร์ชีวภาพ dassel GmbH , Germany ) ในที่ซ้ำกันกระดาษกรองแห้งที่อุณหภูมิห้องและเก็บไว้ภายใต้สภาวะสุญญากาศที่อุณหภูมิ 4 องศา C ถึงการประมวลผลต่อไป จำนวน 140 ตัวกรองกระดาษ จำนวนรวมในการประเมิน