AbstractTo differentiate prenatal e

Abstract

To differentiate prenatal effects of plasmid growth hormone-releasing hormone (GHRH) treatment from maternal effects mediated by lactation on long-term growth of offspring, a cross-fostering study was designed. Pregnant sows (n = 12) were untreated (n = 6) or received either a Wt-GHRH (n = 2) or HV-GHRH (n = 4) plasmid. At birth, half of each litter was cross-fostered (treated to controls and controls to treated only). Piglets from plasmid-injected sows were heavier at birth (HV-GHRH, 1.65 ± 0.07 kg; Wt-GHRH, 1.46 ± 0.05 kg vs. Controls, 1.27 ± 0.03 kg; P ≥ 0.001) and at weaning (Wt-GHRH, 6.01 ± 0.21 kg and HV-GHRH, 6.34 ± 0.15 kg vs. Controls, 5.37 ± 0.14 kg; P ≥ 0.02, respectively). Control piglets cross-fostered to plasmid-injected sows grew faster to weaning (Wt-GHRH, 5.61 ± 0.15 kg and HV-GHRH, 5.70 ± 0.29 kg vs. Controls, 5.08 ± 0.22 kg; P > 0.05, respectively). Piglets from plasmid-injected sows that suckled on control sows were larger than control piglets on control sows (Wt-GHRH, 5.93 ± 0.20 kg and HV-GHRH, 6.2 ± 0.19 kg vs. Controls, 5.08 ± 0.22 kg; P > 0.05, respectively), but smaller than their littermates left on their treated mothers. The observed improvements were maintained until the end of the study when the offspring were 170-day-old. The results suggest that the improved growth of offspring of GHRH plasmid-treated sows pre-weaning is attributable to improved maternal performance, while after weaning the effects on the pituitary component are relevant.







Keywords
Electroporation;
Gene therapy;
Growth hormone releasing hormone;
Plasmid;
Swine


1. Introduction

A gene therapy approach in combination with electroporation (EP) offers an alternative or complimentary approach to conventional treatment strategies for modulation of growth, development and health. Indeed, we have previously demonstrated that the single administration of a commercially available plasmid that encodes a growth hormone-releasing hormone (GHRH) (LifeTide™SW5), when administered to pregnant sows increased survival and production parameters in their offspring for three sequential parities [1]. Furthermore, we have shown that plasmid GHRH administration with half of the dose previously used alone or in combination with porcine somatotrophin (pST) was effective in improving survivability and production parameters (Person, in review, BMC Vet. Res.).

It is likely that multiple mechanisms are responsible for these effects of increased maternal GHRH production on offspring survival and growth. The GHRH/growth hormone (GH)/insulin-like growth factor-I (IGF-I) axis plays an important role in the regulation of growth and development [2], as well as in the physiology of pregnancy and lactation [3]. In previous studies, we have shown that there is transplacental transfer of GHRH from mother to fetus that can directly impact fetal development [4]. We have also demonstrated that in the offspring of plasmid GHRH-treated pregnant animals there is a change in pituitary lineage as demonstrated by an increased number of somatotrophs and lactotrophs [5], without pituitary hyperplasia. It is also known that GHRH treatment improves lactation [6] and we have shown that the injection of cows with plasmid GHRH results in improved lactation performance [7]. However, the extent to which the improved growth and survivability of the offspring is attributable to improvements in maternal physiology during pregnancy and lactation vs. those resulting from the changes to the offspring themselves is uncertain.

In order to differentiate between the effects of plasmid GHRH administration on the mother vs. the indirect effects on offspring we carried out a cross-fostering study in which offspring born to treated sows were cross-fostered to untreated control sows at birth and vice versa. The offspring were then followed to 170 days of age when they were euthanized and body compositions compared. We demonstrate that administration of plasmid GHRH to gestating gilts improved offspring survival and body composition and that this could be attributed to both a prenatal benefit on offspring intrauterine growth and development, and improved post-natal performance linked to better maternal lactation performance.

2. Materials and methods

2.1. Animals and study design

This study followed 140 pigs born to 12 first parity sows of which six served as untreated controls, two were treated with a plasmid encoding the wild-type GHRH peptide (Wt-GHRH), and four were administered a plasmid encoding a protease-resistant GHRH (HV-GHRH) [8]. The dam line was from a commercially available Landrace X Yorkshire crossbred female mated to a commercial terminal line Duroc crossbred boar. Newborn piglets were subdivided into a total of seven groups according to the cross-fostering plan summarized in Table 1. At birth, approximately half of each litter was cross-fostered, so that treated and control sows nursed both their own offspring and offspring from an alternative treatment (i.e. half the piglets from four control sows were replaced with piglets from the four HV-GHRH-treated sows and vice versa and half the piglets from the remaining two control sows received half the litter of the two Wt-GHRH-treated sows and vice versa). Sows were housed in groups of 6–8 animals per pen during the gestation period and then individually in farrowing crates during lactation. At birth piglets were tagged for identification. Males were castrated at 5–7 days of age. Piglets were suckled until they were 21 days of age, when they were weaned and group housed in pens. The offspring were weighed at birth and at routine intervals until the end of the study when they were 170-days-old. All studies were carried out at a Research and Development farm (Burton, TX) and animals were maintained in accordance with National Institutes of Health Guide, U.S. Department of Agriculture, and Animal Welfare Act guidelines.



Table 1.
Grouping of cross-fostered offspring. There were 6 control sows with 63 offspring, 2 Wt-GHRH-treated sows with 18 offspring and 4 HV-GHRH-treated sows with 42 offspring. Of the control offspring, 15 were cross-fostered to Wt-GHRH and 17 were cross-fostered to HV-GHRH sows; the remaining 31 stayed within their treatment group. Of the Wt-GHRH offspring 10 were cross-fostered to control sows; the remaining 8 stayed within their treatment group. Of the HV-GHRH offspring 22 were cross-fostered to control sows; the remaining 20 stayed within their treatment group.






Groups

Sow treatment

Cross-fostered to:


1 Control Control
2 Control Wt-GHRH
3 Control HV-GHRH
4 Wt-GHRH Wt-GHRH
5 Wt-GHRH Control
6 HV-GHRH HV-GHRH
7 HV-GHRH Control

Table options








2.2. Diet and food intake

All diets were fed ad libitum (base mixes from Suidae, Greensburg, Indiana, mixed at Ludemann Grocery and Mill, Brenham, Texas). The sows were fed a gestation diet containing 14% protein from the time they were treated until parturition. After parturition, the sows were transferred to a lactation diet containing 16% protein. For the offspring, a creep-feed diet of 23% protein with high lysine was introduced 1 week prior to weaning and maintained until 4–5 days after weaning. A prestarter diet of 21% protein was then introduced for a period of 10 days, followed by a starter diet of 18% protein until the offspring reached approximately 20 kg. The animals were then maintained on a grower diet of 16% protein until the end of the study. Food intake was measured per pen and is calculated over a 106-day period from study days 64–170.

2.3. DNA construct

The myogenic plasmid expressing porcine GHRH was previously described [1] and [9]. Briefly, plasmid expression was driven from a muscle-specific SPc5-12 synthetic promoter [10]. Wild-type porcine GHRH cDNA was cloned into the BamHI/HindIII sites of pSPc5-12, to generate pSP-GHRH [8]. The 3′ polyadenylation and untranslated region of human (h)GH was cloned downstream of GHRH cDNA. The plasmid was produced under good manufacturing practices (GMP) (VGX Pharmaceuticals, Inc., The Woodlands, TX) and formulated in sterile water for injection with 1% HPLC purified low molecular weight poly-l-glutamate sodium salt. To obtain pSP-HV-GHRH, the porcine GHRH cDNA modified to render the resulting peptide (HV-GHRH) more protease resistant and extend its half-life, was cloned into the BamHI/HindIII sites of pSP-GHRH, followed by the 3′-untranslated region and poly(A) signal of the hGH gene. HV-GHRH is a GHRH analog with amino acids His1 and Val2 substituted with Tyr1 and Ala2, Gly15 substituted with Ala15, and Met27 and Ser28 with Leu27 and Asn28

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

AbstractTo differentiate prenatal effects of plasmid growth hormone-releasing hormone (GHRH) treatment from maternal effects mediated by lactation on long-term growth of offspring, a cross-fostering study was designed. Pregnant sows (n = 12) were untreated (n = 6) or received either a Wt-GHRH (n = 2) or HV-GHRH (n = 4) plasmid. At birth, half of each litter was cross-fostered (treated to controls and controls to treated only). Piglets from plasmid-injected sows were heavier at birth (HV-GHRH, 1.65 ± 0.07 kg; Wt-GHRH, 1.46 ± 0.05 kg vs. Controls, 1.27 ± 0.03 kg; P ≥ 0.001) and at weaning (Wt-GHRH, 6.01 ± 0.21 kg and HV-GHRH, 6.34 ± 0.15 kg vs. Controls, 5.37 ± 0.14 kg; P ≥ 0.02, respectively). Control piglets cross-fostered to plasmid-injected sows grew faster to weaning (Wt-GHRH, 5.61 ± 0.15 kg and HV-GHRH, 5.70 ± 0.29 kg vs. Controls, 5.08 ± 0.22 kg; P > 0.05, respectively). Piglets from plasmid-injected sows that suckled on control sows were larger than control piglets on control sows (Wt-GHRH, 5.93 ± 0.20 kg and HV-GHRH, 6.2 ± 0.19 kg vs. Controls, 5.08 ± 0.22 kg; P > 0.05, respectively), but smaller than their littermates left on their treated mothers. The observed improvements were maintained until the end of the study when the offspring were 170-day-old. The results suggest that the improved growth of offspring of GHRH plasmid-treated sows pre-weaning is attributable to improved maternal performance, while after weaning the effects on the pituitary component are relevant.คำสำคัญElectroporation ยีนบำบัด ปล่อยฮอร์โมน ฮอร์โมนการเจริญเติบโต Plasmid สุกร1. บทนำวิธีการรักษาด้วยยีนร่วมกับ electroporation (EP) มีวิธีการอื่น หรือฟรีกลยุทธ์แซลมอนเอ็มของการเจริญเติบโต พัฒนา และสุขภาพ แน่นอน เรามีก่อนหน้านี้แสดงว่า บริหารเดียวของ plasmid ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ที่จแมปการปล่อยฮอร์โมนเจริญเติบโตฮอร์โมน (GHRH) (LifeTide ™ SW5), เมื่อจัดการ sows ตั้งครรภ์เพิ่มความอยู่รอดและผลิตพารามิเตอร์ในลูกหลานของพวกเขาสำหรับ parities สามตามลำดับ [1] นอกจากนี้ เราได้แสดงว่า plasmid GHRH จัดการกับครึ่งหนึ่ง ของปริมาณที่เคย ใช้คนเดียว หรือรวมกับช่วง somatotrophin (pST) มีประสิทธิภาพในการปรับปรุงพารามิเตอร์ดันและผลิตคน ใน เรื่องน่ารู้ของบีเอ็มซี Res)It is likely that multiple mechanisms are responsible for these effects of increased maternal GHRH production on offspring survival and growth. The GHRH/growth hormone (GH)/insulin-like growth factor-I (IGF-I) axis plays an important role in the regulation of growth and development [2], as well as in the physiology of pregnancy and lactation [3]. In previous studies, we have shown that there is transplacental transfer of GHRH from mother to fetus that can directly impact fetal development [4]. We have also demonstrated that in the offspring of plasmid GHRH-treated pregnant animals there is a change in pituitary lineage as demonstrated by an increased number of somatotrophs and lactotrophs [5], without pituitary hyperplasia. It is also known that GHRH treatment improves lactation [6] and we have shown that the injection of cows with plasmid GHRH results in improved lactation performance [7]. However, the extent to which the improved growth and survivability of the offspring is attributable to improvements in maternal physiology during pregnancy and lactation vs. those resulting from the changes to the offspring themselves is uncertain.In order to differentiate between the effects of plasmid GHRH administration on the mother vs. the indirect effects on offspring we carried out a cross-fostering study in which offspring born to treated sows were cross-fostered to untreated control sows at birth and vice versa. The offspring were then followed to 170 days of age when they were euthanized and body compositions compared. We demonstrate that administration of plasmid GHRH to gestating gilts improved offspring survival and body composition and that this could be attributed to both a prenatal benefit on offspring intrauterine growth and development, and improved post-natal performance linked to better maternal lactation performance.2. Materials and methods2.1. Animals and study designThis study followed 140 pigs born to 12 first parity sows of which six served as untreated controls, two were treated with a plasmid encoding the wild-type GHRH peptide (Wt-GHRH), and four were administered a plasmid encoding a protease-resistant GHRH (HV-GHRH) [8]. The dam line was from a commercially available Landrace X Yorkshire crossbred female mated to a commercial terminal line Duroc crossbred boar. Newborn piglets were subdivided into a total of seven groups according to the cross-fostering plan summarized in Table 1. At birth, approximately half of each litter was cross-fostered, so that treated and control sows nursed both their own offspring and offspring from an alternative treatment (i.e. half the piglets from four control sows were replaced with piglets from the four HV-GHRH-treated sows and vice versa and half the piglets from the remaining two control sows received half the litter of the two Wt-GHRH-treated sows and vice versa). Sows were housed in groups of 6–8 animals per pen during the gestation period and then individually in farrowing crates during lactation. At birth piglets were tagged for identification. Males were castrated at 5–7 days of age. Piglets were suckled until they were 21 days of age, when they were weaned and group housed in pens. The offspring were weighed at birth and at routine intervals until the end of the study when they were 170-days-old. All studies were carried out at a Research and Development farm (Burton, TX) and animals were maintained in accordance with National Institutes of Health Guide, U.S. Department of Agriculture, and Animal Welfare Act guidelines.Table 1. Grouping of cross-fostered offspring. There were 6 control sows with 63 offspring, 2 Wt-GHRH-treated sows with 18 offspring and 4 HV-GHRH-treated sows with 42 offspring. Of the control offspring, 15 were cross-fostered to Wt-GHRH and 17 were cross-fostered to HV-GHRH sows; the remaining 31 stayed within their treatment group. Of the Wt-GHRH offspring 10 were cross-fostered to control sows; the remaining 8 stayed within their treatment group. Of the HV-GHRH offspring 22 were cross-fostered to control sows; the remaining 20 stayed within their treatment group.GroupsSow treatmentCross-fostered to:1 Control Control 2 Control Wt-GHRH 3 Control HV-GHRH 4 Wt-GHRH Wt-GHRH 5 Wt-GHRH Control 6 HV-GHRH HV-GHRH 7 HV-GHRH Control Table options2.2. Diet and food intakeAll diets were fed ad libitum (base mixes from Suidae, Greensburg, Indiana, mixed at Ludemann Grocery and Mill, Brenham, Texas). The sows were fed a gestation diet containing 14% protein from the time they were treated until parturition. After parturition, the sows were transferred to a lactation diet containing 16% protein. For the offspring, a creep-feed diet of 23% protein with high lysine was introduced 1 week prior to weaning and maintained until 4–5 days after weaning. A prestarter diet of 21% protein was then introduced for a period of 10 days, followed by a starter diet of 18% protein until the offspring reached approximately 20 kg. The animals were then maintained on a grower diet of 16% protein until the end of the study. Food intake was measured per pen and is calculated over a 106-day period from study days 64–170.2.3. DNA constructThe myogenic plasmid expressing porcine GHRH was previously described [1] and [9]. Briefly, plasmid expression was driven from a muscle-specific SPc5-12 synthetic promoter [10]. Wild-type porcine GHRH cDNA was cloned into the BamHI/HindIII sites of pSPc5-12, to generate pSP-GHRH [8]. The 3′ polyadenylation and untranslated region of human (h)GH was cloned downstream of GHRH cDNA. The plasmid was produced under good manufacturing practices (GMP) (VGX Pharmaceuticals, Inc., The Woodlands, TX) and formulated in sterile water for injection with 1% HPLC purified low molecular weight poly-l-glutamate sodium salt. To obtain pSP-HV-GHRH, the porcine GHRH cDNA modified to render the resulting peptide (HV-GHRH) more protease resistant and extend its half-life, was cloned into the BamHI/HindIII sites of pSP-GHRH, followed by the 3′-untranslated region and poly(A) signal of the hGH gene. HV-GHRH is a GHRH analog with amino acids His1 and Val2 substituted with Tyr1 and Ala2, Gly15 substituted with Ala15, and Met27 and Ser28 with Leu27 and Asn28

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อเพื่อแยกความแตกต่างของผลกระทบก่อนคลอดพลาสมิดฮอร์โมนปล่อยฮอร์โมนการเจริญเติบโต (GHRH) การรักษาจากผลกระทบของมารดาผู้ไกล่เกลี่ยโดยการให้นมบุตรต่อการเจริญเติบโตในระยะยาวของลูกหลานมีการศึกษาข้ามอุปถัมภ์ได้รับการออกแบบ แม่สุกรตั้งครรภ์ (n = 12) ได้รับการรักษา (n = 6) หรือได้รับทั้ง WT-GHRH (n = 2) หรือ HV-GHRH (n = 4) พลาสมิด ที่เกิดครึ่งหนึ่งของแต่ละครอกข้ามส่งเสริม (ได้รับการรักษากับการควบคุมและการควบคุมที่จะได้รับการรักษาเท่านั้น) ลูกสุกรจากแม่สุกรฉีดพลาสมิดมีน้ำหนักแรกเกิด (HV-GHRH, 1.65 ± 0.07 กิโลกรัม WT-GHRH, 1.46 ± 0.05 กิโลกรัมเมื่อเทียบกับการควบคุม, 1.27 ± 0.03 กิโลกรัม P ≥ 0.001) และหย่านม (WT-GHRH, 6.01 ± 0.21 กิโลกรัมและ HV-GHRH, 6.34 ± 0.15 กิโลกรัมเมื่อเทียบกับการควบคุม, 5.37 ± 0.14 กิโลกรัม P ≥ 0.02 ตามลำดับ) ลูกสุกรควบคุมข้ามเพื่อส่งเสริมสุกรพลาสมิดฉีดขยายตัวเร็วกว่าที่จะหย่านม (WT-GHRH, 5.61 ± 0.15 กิโลกรัมและ HV-GHRH, 5.70 ± 0.29 กิโลกรัมเมื่อเทียบกับการควบคุม, 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม P> 0.05 ตามลำดับ) ลูกสุกรจากแม่สุกรฉีดพลาสมิดที่ดูดแม่สุกรในการควบคุมมีขนาดใหญ่กว่าลูกสุกรสุกรควบคุมในการควบคุม (WT-GHRH, 5.93 ± 0.20 กิโลกรัมและ HV-GHRH 6.2 ± 0.19 กิโลกรัมเมื่อเทียบกับการควบคุม, 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม P> 0.05, ตามลำดับ) แต่มีขนาดเล็กกว่า littermates ของพวกเขาที่เหลืออยู่บนแม่ของพวกเขาได้รับการรักษา การปรับปรุงที่สังเกตได้รับการดูแลจนจบการศึกษาเมื่อลูกหลานมี 170 วันเก่า ผลการวิจัยแนะนำว่าการเจริญเติบโตที่ดีขึ้นของลูกหลานของ GHRH แม่สุกรพลาสมิดที่ได้รับก่อนหย่านมคือส่วนที่เป็นผลการดำเนินงานของมารดาที่ดีขึ้นในขณะที่หลังจากหย่านมผลกระทบในส่วนต่อมใต้สมองมีความเกี่ยวข้อง. คำElectroporation; ยีนบำบัดฮอร์โมนการเจริญเติบโตของการปล่อยฮอร์โมน; พลาสมิด; สุกร1 การแนะนำวิธียีนบำบัดร่วมกับ electroporation (EP) มีทางเลือกหรือวิธีฟรีกลยุทธ์การรักษาแบบเดิมสำหรับการปรับการเจริญเติบโตของการพัฒนาและสุขภาพ แท้จริงเราได้แสดงให้เห็นก่อนหน้านี้ว่าการบริหารงานเดียวของพลาสมิดใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ที่ encodes ฮอร์โมนฮอร์โมนปล่อยการเจริญเติบโต (GHRH) (LifeTide ™ SW5) เมื่อบริหารให้กับแม่สุกรตั้งครรภ์เพิ่มขึ้นอยู่รอดและพารามิเตอร์การผลิตในลูกหลานของพวกเขาสาม parities ลำดับ [ 1] นอกจากนี้เราได้แสดงให้เห็นการบริหารงานของพลาสมิด GHRH กับครึ่งหนึ่งของปริมาณที่ใช้ก่อนหน้านี้เพียงอย่างเดียวหรือใช้ร่วมกับ somatotrophin สุกร (PST) มีประสิทธิภาพในการปรับปรุงการอยู่รอดและพารามิเตอร์การผลิต (คนในการตรวจสอบ, สัตวแพทย์บีเอ็มซี. Res.). มันอาจเป็นไป กลไกที่หลายมีความรับผิดชอบในผลกระทบเหล่านี้ผลิต GHRH มารดาที่เพิ่มขึ้นในการอยู่รอดและการเจริญเติบโตของลูกหลาน ฮอร์โมน GHRH / การเจริญเติบโต (GH) / อินซูลินเช่นปัจจัยผมเจริญเติบโต (IGF-I) แกนมีบทบาทสำคัญในการควบคุมของการเจริญเติบโตและการพัฒนา [2], เช่นเดียวกับในสรีรวิทยาของการตั้งครรภ์และให้นม [3] . ในการศึกษาก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่ามีการโอน transplacental ของ GHRH จากแม่ไปสู่ทารกในครรภ์ที่โดยตรงสามารถส่งผลกระทบการพัฒนาของทารกในครรภ์ [4] เราได้แสดงให้เห็นว่าในลูกหลานของพลาสมิด GHRH รับการรักษาสัตว์ที่ตั้งครรภ์มีการเปลี่ยนแปลงในสายเลือดต่อมใต้สมองที่แสดงให้เห็นโดยจำนวนที่เพิ่มขึ้นของ somatotrophs และ lactotrophs [5] โดยไม่ต้อง hyperplasia ต่อมใต้สมอง เป็นที่รู้จักกันว่าการรักษา GHRH ช่วยเพิ่มการหลั่งน้ำนม [6] และเราได้แสดงให้เห็นว่าการฉีดของวัวที่มีผลพลาสมิด GHRH ในการปฏิบัติงานให้นมบุตรที่ดีขึ้น [7] แต่ขอบเขตที่การเจริญเติบโตที่ดีขึ้นและความอยู่รอดของลูกหลานเป็นผลพวงจากการปรับปรุงในสรีรวิทยาของมารดาในระหว่างตั้งครรภ์และให้นมบุตรกับผู้ที่รับผลกระทบจากการเปลี่ยนแปลงเพื่อให้ลูกหลานของตัวเองคือความไม่แน่นอน. เพื่อที่จะแยกความแตกต่างระหว่างผลกระทบของพลาสมิดบริหาร GHRH ในแม่กับผลกระทบทางอ้อมต่อลูกหลานของเราดำเนินการศึกษาข้ามอุปถัมภ์ลูกหลานที่เกิดมาเพื่อรับการรักษาที่ถูกแม่สุกรข้ามส่งเสริมการควบคุมแม่สุกรได้รับการรักษาที่เกิดและในทางกลับกัน ลูกหลานตามมาแล้วถึง 170 วันอายุเมื่อพวกเขาถูก euthanized และองค์ประกอบร่างกายเมื่อเทียบ เราแสดงให้เห็นว่าการบริหารงานของพลาสมิด GHRH สุกรเพื่อการอยู่รอดที่ดีขึ้น gestating ลูกหลานและองค์ประกอบของร่างกายและที่นี้อาจจะประกอบไปทั้งก่อนคลอดเป็นประโยชน์ในการเจริญเติบโตของลูกหลานของมดลูกและการพัฒนาและผลการดำเนินงานหลังคลอดที่ดีขึ้นเชื่อมโยงกับผลการดำเนินงานที่ดีกว่าการให้นมมารดา. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 สัตว์และการออกแบบการศึกษาการศึกษาครั้งนี้ใช้ 140 หมูเกิด 12 แม่สุกรเท่าเทียมกันคนแรกที่หกทำหน้าที่เป็นผู้ควบคุมการรับการรักษาทั้งสองได้รับการรักษาด้วยพลาสมิดเข้ารหัสป่าชนิดเปปไทด์ GHRH (WT-GHRH) และสี่เป็นยาเข้ารหัสพลาสมิด โปรติเอสทน GHRH (HV-GHRH) [8] บรรทัดเขื่อนมาจากใช้ได้ในเชิงพาณิชย์แลนด์เรซ X ยอร์คลูกผสมเพศหญิงแต่งงานแล้วกับขั้วสายพาณิชย์ Duroc ลูกผสมหมูป่า ลูกสุกรแรกเกิดถูกแบ่งออกเป็นทั้งหมดเจ็ดกลุ่มตามแผนข้ามอุปถัมภ์สรุปไว้ในตารางที่ 1 ที่เกิดประมาณครึ่งหนึ่งของแต่ละครอกข้ามส่งเสริมเพื่อให้ได้รับการรักษาและการควบคุมดูแลแม่สุกรทั้งลูกหลานของตัวเองและลูกหลานจาก การรักษาทางเลือก (เช่นลูกสุกรครึ่งจากสี่แม่สุกรควบคุมถูกแทนที่ด้วยลูกสุกรจากสี่ HV-GHRH รับการรักษาแม่สุกรและในทางกลับกันและลูกสุกรครึ่งหนึ่งจากที่เหลืออีกสองแม่สุกรควบคุมได้รับครึ่งหนึ่งครอกของทั้งสองแม่สุกร WT-GHRH รับการรักษา และในทางกลับกัน). แม่สุกรที่ได้รับอยู่ในกลุ่ม 6-8 ตัวต่อปากกาในช่วงระยะเวลาการตั้งครรภ์แล้วเป็นรายบุคคลในลังคลอดในช่วงให้นมบุตร ในลูกสุกรแรกเกิดถูกแท็กเพื่อระบุตัวตน เพศผู้ถูกตอนที่ 5-7 วันอายุ ลูกสุกรถูกดูดจนกว่าพวกเขา 21 วันอายุเมื่อพวกเขาถูกหย่านมและกลุ่มที่ตั้งอยู่ในปากกา ลูกหลานได้รับการชั่งน้ำหนักที่เกิดและในช่วงเวลากิจวัตรประจำวันไปจนถึงวันสิ้นสุดของการศึกษาเมื่อพวกเขา 170 วันเก่า การศึกษาทั้งหมดได้รับการดำเนินการที่ฟาร์มวิจัยและพัฒนา (เบอร์ตัน, เท็กซัส) และสัตว์ที่ได้รับการดูแลให้สอดคล้องกับสถาบันแห่งชาติของคู่มือสุขภาพกระทรวงเกษตรของสหรัฐและสวัสดิภาพสัตว์แนวทางพระราชบัญญัติ. ตารางที่ 1 การจัดกลุ่มของลูกหลานข้ามส่งเสริม แม่สุกรมี 6 การควบคุมที่มีลูกหลาน 63 คน 2 WT-GHRH รับการรักษาแม่สุกรกับ 18 ลูกและ 4 HV-GHRH รับการรักษาแม่สุกรที่มี 42 ลูกหลาน ลูกหลานควบคุม 15 ถูกข้ามส่งเสริมการ WT-GHRH และ 17 ถูกข้ามไปส่งเสริมสุกร HV-GHRH; ส่วนที่เหลืออีก 31 อยู่ในกลุ่มรักษาของพวกเขา ของ GHRH WT-10 ถูกลูกหลานข้ามส่งเสริมในการควบคุมสุกร; ส่วนที่เหลืออีก 8 อยู่ภายในกลุ่มรักษาของพวกเขา ของลูกหลาน HV-22 ถูก GHRH ข้ามส่งเสริมในการควบคุมสุกร; ส่วนที่เหลืออีก 20 อยู่ในกลุ่มรักษาของพวกเขา. กลุ่มหว่านรักษาข้ามส่งเสริมการ: 1 การควบคุมการควบคุม2 ควบคุมน้ำหนัก-GHRH 3 การควบคุม HV-GHRH 4 WT-GHRH WT-GHRH 5 WT-GHRH ควบคุม6 HV-GHRH HV-GHRH 7 HV-GHRH ควบคุมตัวเลือกตารางที่2.2 อาหารและการรับประทานอาหารอาหารทั้งหมดได้รับการเลี้ยงดูกินอย่างเต็มที่ (ผสมฐาน Suidae, กรีนอินดีแอนาผสมที่Lüdemannร้านขายของชำและมิลล์, เบรนแฮม, เท็กซัส) แม่สุกรได้รับการเลี้ยงดูการตั้งครรภ์อาหารที่มีโปรตีน 14% จากเวลาที่พวกเขาได้รับการรักษาจนคลอด หลังจากคลอด, แม่สุกรที่ถูกถ่ายโอนไปยังอาหารที่ให้นมที่มีโปรตีน 16% สำหรับลูกหลานอาหารคืบฟีดของโปรตีนที่มีไลซีนสูง 23% ได้รับการแนะนำ 1 สัปดาห์ก่อนที่จะหย่านมและการบำรุงรักษาจนกว่า 4-5 วันหลังจากหย่านม อาหาร prestarter ของโปรตีน 21% ได้รับการแนะนำจากนั้นเป็นระยะเวลา 10 วันตามด้วยการรับประทานอาหารที่เริ่มต้นของโปรตีน 18% จนถึงลูกหลานถึงประมาณ 20 กิโลกรัม สัตว์ที่ได้รับการดูแลจากนั้นในอาหารที่ปลูกของโปรตีน 16% จนกว่าจะสิ้นสุดของการศึกษา การบริโภคอาหารที่ถูกวัดต่อปากกาและมีการคำนวณในช่วงระยะเวลา 106 วันจากวันที่การศึกษา 64-170. 2.3 ดีเอ็นเอสร้างพลาสมิด myogenic แสดง GHRH สุกรถูกอธิบายไว้ก่อนหน้า [1] และ [9] สั้น ๆ , การแสดงออกของพลาสมิดได้รับแรงหนุนจากกล้ามเนื้อเฉพาะ SPc5-12 ก่อการสังเคราะห์ [10] สุกรป่าชนิด GHRH cDNA เป็นโคลนเข้าไปใน BamHI / HindIII เว็บไซต์ของ pSPc5-12 เพื่อสร้าง PSP-GHRH [8] 3 'Polyadenylation และภูมิภาคไม่ได้แปลของมนุษย์ (ซ) GH เป็นโคลนล่อง GHRH ยีน พลาสมิดที่ถูกผลิตภายใต้การปฏิบัติผลิตที่ดี (GMP) (VGX Pharmaceuticals, Inc, วู้ดแลนด์, เท็กซัส) และสูตรที่ผ่านการฆ่าเชื้อในน้ำสำหรับฉีด 1% HPLC บริสุทธิ์น้ำหนักโมเลกุลต่ำเกลือโซเดียมโพลี l-กลูตาเมต ที่จะได้รับ PSP-HV-GHRH ที่ cDNA สุกร GHRH แก้ไขเพื่อทำให้เปปไทด์ที่เกิด (HV-GHRH) โปรติเอสทนและขยายครึ่งชีวิตของตนเป็นโคลนเข้าไปใน BamHI / เว็บไซต์ HindIII ของ PSP-GHRH ตามด้วย 3 'ภูมิภาค -untranslated และโพลี (A) สัญญาณของยีน hGH HV-GHRH เป็นอะนาล็อก GHRH ที่มีกรดอะมิโนและ His1 VAL2 แทนด้วย Tyr1 และ Ala2, Gly15 แทนด้วย Ala15 และ Met27 และ Ser28 กับ Leu27 และ Asn28

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อแยกผลแบบนามธรรมของพลาสมิด ปล่อยฮอร์โมนฮอร์โมนการเจริญเติบโต ( ghrh ) การรักษา จากผลของมารดา ( โดยการให้นมต่อการเจริญเติบโตในระยะยาวของลูกหลาน ข้ามสาขาการศึกษาการออกแบบ แม่ตั้งครรภ์ ( n = 12 ) ดิบ ( n = 6 ) หรือได้รับอย่างใดอย่างหนึ่งโดย ghrh ( n = 2 ) หรือ hv-ghrh ( n = 4 ) พลาสมิด ที่ให้กำเนิดครึ่งหนึ่งของแต่ละครอกก็ข้ามบุญธรรม ( ได้รับการควบคุมและการควบคุมการปฏิบัติเท่านั้น ) ลูกสุกรแม่สุกรสายพันธุ์ฉีดหนักตั้งแต่เกิด ( hv-ghrh 1.65 , ± 0.07 กิโลกรัม น้ำหนัก ghrh , 1.46 ± 0.05 กิโลกรัมและการควบคุม , 1.27 ± 0.03 กิโลกรัม ; P ≥ 0.001 ) และเมื่อหย่านม ( WT ghrh 6.01 , ± 0.21 กิโลกรัม และ hv-ghrh , 6.34 ± 0.15 กิโลกรัมและการควบคุมนั้น± 0.14 กิโลกรัม ; P ≥ 0.02 ตามลำดับ )ตัว ควบคุมการฉีดพลาสมิด ( ข้ามแม่สุกรโตเร็วหย่านม ( WT ghrh 6.73 , ± 0.15 กิโลกรัม และ hv-ghrh , 5.70 ± 0.29 กิโลกรัมและการควบคุม , 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม ; P > 0.05 ตามลำดับ ) ลูกสุกรในสุกรแม่สุกรที่ฉีดพลาส suckled ควบคุมมีขนาดใหญ่กว่าตัวควบคุมในการควบคุมแม่พันธุ์ ( WT ghrh 5.93 , ± 0.20 กก. และ hv-ghrh 6.2 ± 0.19 กก. และการควบคุม , 5.08 ± 0.22 กิโลกรัม ; P > 0.05 ,ตามลำดับ ) แต่มีขนาดเล็กกว่า littermates ของเขาไปรักษาแม่ และการปรับปรุงที่ถูกเก็บรักษาไว้จนกว่าจะจบการศึกษา เมื่อลูกหลานได้ 170 วันเก่า พบว่าอัตราการเจริญเติบโตของลูกสุกรก่อนหย่านมของ ghrh พลาสมิดที่ได้รับจากมารดาคือการปรับปรุงประสิทธิภาพในขณะที่หลังจากหย่านมผลในส่วนประกอบของต่อมใต้สมองเป็นคำหลักที่เกี่ยวข้อง







electroporation

; ยีนบำบัด ;

ปล่อยฮอร์โมนฮอร์โมนการเจริญเติบโต ; สายพันธุ์ ;
2


1 บทนำ

วิธียีนบำบัดร่วมกับ electroporation ( EP ) เสนอทางเลือกหรือฟรีแบบกลยุทธ์การรักษาสำหรับการเจริญเติบโต พัฒนาการ และสุขภาพแน่นอน เราเคยแสดงให้เห็นว่าการบริหารงานเดียวของในเชิงพาณิชย์ที่มีพลาสมิดที่เข้ารหัสเป็นปล่อยฮอร์โมนฮอร์โมนการเจริญเติบโต ( ghrh ) ( lifetide ™ sw5 ) เมื่อทดสอบสุกรท้องเพิ่มขึ้นการอยู่รอดและการผลิตพารามิเตอร์ในลูกหลานของพวกเขาสาม parities ลำดับ [ 1 ] นอกจากนี้เราได้แสดงให้เห็นว่าการบริหาร ghrh พลาสมิดที่มีครึ่งหนึ่งของปริมาณเดิมที่เคยใช้คนเดียวหรือใช้ร่วมกับจากโซมาโตโทรฟิน ( PST ) คือประสิทธิภาพในการปรับปรุงความสามารถการผลิตและพารามิเตอร์ ( บุคคล , รีวิว , BMC สัตวแพทย์ ศาสตร์ ) .

มันมีแนวโน้มว่า กลไกหลายอย่างมีความรับผิดชอบเหล่านี้ผลของการผลิตที่เพิ่มขึ้นของลูกหลาน ghrh การอยู่รอดและการเจริญเติบโต