Operation[edit]The sample mixture t

Operation[edit]
The sample mixture to be separated and analyzed is introduced, in a discrete small volume (typically microliters), into the stream of mobile phase percolating through the column. The components of the sample move through the column at different velocities, which are function of specific physical interactions with the sorbent (also called stationary phase). The velocity of each component depends on its chemical nature, on the nature of the stationary phase (column) and on the composition of the mobile phase. The time at which a specific analyte elutes (emerges from the column) is called its retention time. The retention time measured under particular conditions is considered an identifying characteristic of a given analyte.

Many different types of columns are available, filled with sorbents varying in particle size, and in the nature of their surface ("surface chemistry"). The use of smaller particle size packing materials requires the use of higher operational pressure ("backpressure") and typically improves chromatographic resolution (i.e. the degree of separation between consecutive analytes emerging from the column). In terms of surface chemistry, sorbent particles may be hydrophobic or polar in nature.

Common mobile phases used include any miscible combination of water with various organic solvents (the most common are acetonitrile and methanol). Some HPLC techniques use water-free mobile phases (see Normal-phase chromatography below). The aqueous component of the mobile phase may contain acids (such as formic, phosphoric or trifluoroacetic acid) or salts to assist in the separation of the sample components. The composition of the mobile phase may be kept constant ("isocratic elution mode") or varied ("gradient elution mode") during the chromatographic analysis. Isocratic elution is typically effective in the separation of sample components that are not very different in their affinity for the stationary phase. In gradient elution the composition of the mobile phase is varied typically from low to high eluting strength. The eluting strength of the mobile phase is reflected by analyte retention times with high eluting strength producing fast elution (=short retention times). A typical gradient profile in reversed phase chromatography might start at 5% acetonitrile (in water or aqueous buffer) and progress linearly to 95% acetonitrile over 5–25 minutes. Periods of constant mobile phase composition may be part of any gradient profile. For example, the mobile phase composition may be kept constant at 5% acetonitrile for 1–3 min, followed by a linear change up to 95% acetonitrile.

The chosen composition of the mobile phase (also called eluent) depends on the intensity of interactions between various sample components ("analytes") and stationary phase (e.g. hydrophobic interactions in reversed-phase HPLC). Depending on their affinity for the stationary and mobile phases analytes partition between the two during the separation process taking place in the column. This partitioning process is similar to that which occurs during a liquid–liquid extraction but is continuous, not step-wise. In this example, using a water/acetonitrile gradient, more hydrophobic components will elute (come off the column) late, once the mobile phase gets more concentrated in acetonitrile (i.e. in a mobile phase of higher eluting strength).

The choice of mobile phase components, additives (such as salts or acids) and gradient conditions depends on the nature of the column and sample components. Often a series of trial runs is performed with the sample in order to find the HPLC method which gives adequate separation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

[แก้ไข] การดำเนินงานส่วนผสมตัวอย่างการแยก และวิเคราะห์การแนะนำ การแยกกันขนาดเล็กปริมาณ (ปกติ microliters), เป็นกระแสของเฟสเคลื่อนที่ percolating ผ่านคอลัมน์ ย้ายคอมโพเนนต์ของตัวอย่างผ่านคอลัมน์ที่ตะกอนแตกต่างกัน ซึ่งเป็นฟังก์ชั่นของการโต้ตอบทางกายภาพเฉพาะกับการดูดซับ (ยังเรียกว่าระยะเครื่องเขียน) ความเร็วของแต่ละส่วนขึ้นอยู่กับธรรมชาติของสารเคมี ลักษณะของระยะเครื่องเขียน (คอลัมน์) และองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ เวลาที่ analyte เฉพาะ elutes (ขึ้นจากคอลัมน์) คือเวลาเก็บข้อมูล เวลารักษาวัดภายใต้เงื่อนไขเฉพาะจะถือเป็นลักษณะบ่งชี้ของ analyte ที่กำหนดหลายประเภทของคอลัมน์จะพร้อมใช้งาน เติม sorbents แตกต่างกัน ในขนาดอนุภาค และลักษณะของพื้นผิวของพวกเขา ("ผิวเคมี") การใช้บรรจุภัณฑ์ขนาดอนุภาคเล็กลงต้องใช้แรงดันทำงานสูง ("backpressure") และโดยทั่วไปปรับปรุงแก้ไข chromatographic (เช่นระดับของการแยกระหว่าง analytes เนื่องจากคอลัมน์) ในเคมีพื้นผิว ดูดซับอนุภาคอาจเป็น hydrophobic หรือขั้วโลกในธรรมชาติระยะเคลื่อนที่ทั่วไปที่ใช้ประกอบด้วยการรวม miscible น้ำ ด้วยอินทรีย์ต่าง ๆ (บ่อยที่สุดคือ acetonitrile และเมทานอล) บางเทคนิค HPLC ใช้ระยะฟรีน้ำเคลื่อนที่ (ดู chromatography ปกติขั้นตอนด้านล่าง) คอมโพเนนต์อควีของเฟสเคลื่อนที่อาจประกอบด้วยกรด (เช่น formic, phosphoric หรือกรด trifluoroacetic) หรือเกลือเพื่อช่วยในการแยกส่วนประกอบของตัวอย่างได้ องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่อาจเก็บไว้คง ("isocratic คิด elution โหมด") หรือ ("ไล่ระดับ elution โหมด") ที่แตกต่างกันระหว่างการวิเคราะห์ chromatographic Elution isocratic คิดเป็นปกติมีประสิทธิภาพในการแยกของส่วนประกอบตัวอย่างที่ไม่ได้มีความแตกต่างในความสัมพันธ์ของพวกเขาสำหรับระยะเครื่องเขียน ใน elution ไล่ระดับ องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่แตกต่างกันโดยทั่วไปจาก eluting แรงน้อยไปมาก แรง eluting ของเฟสเคลื่อนที่เป็นประจำ โดยเวลาของการทำซ้ำการ analyte กับแรง eluting สูงผลิต elution รวดเร็ว (=เวลาเก็บรักษาสั้น) โพรไฟล์ไล่ระดับปกติในระยะกลับ chromatography อาจเริ่มต้นที่ 5% acetonitrile (ในน้ำหรือบัฟเฟอร์อควี) และดำเนินการเชิงเส้นให้ acetonitrile 95% กว่า 5 – 25 นาที ขององค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่คงอาจเป็นส่วนหนึ่งของส่วนกำหนดค่าการไล่โทนสี ตัวอย่าง องค์ประกอบของระยะเคลื่อนอาจเก็บไว้คงที่ที่ acetonitrile 5% ใน 1-3 นาที ตาม ด้วยการเปลี่ยนแปลงเชิงเส้นค่าให้ acetonitrile 95%The chosen composition of the mobile phase (also called eluent) depends on the intensity of interactions between various sample components ("analytes") and stationary phase (e.g. hydrophobic interactions in reversed-phase HPLC). Depending on their affinity for the stationary and mobile phases analytes partition between the two during the separation process taking place in the column. This partitioning process is similar to that which occurs during a liquid–liquid extraction but is continuous, not step-wise. In this example, using a water/acetonitrile gradient, more hydrophobic components will elute (come off the column) late, once the mobile phase gets more concentrated in acetonitrile (i.e. in a mobile phase of higher eluting strength).The choice of mobile phase components, additives (such as salts or acids) and gradient conditions depends on the nature of the column and sample components. Often a series of trial runs is performed with the sample in order to find the HPLC method which gives adequate separation.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การดำเนินงาน [แก้ไข]
ส่วนผสมตัวอย่างที่จะแยกและวิเคราะห์เป็นที่รู้จักในปริมาณที่ไม่ต่อเนื่อง (โดยทั่วไป microliters) เข้าสู่กระแสของเฟสเคลื่อนที่แทรกซึมผ่านคอลัมน์ องค์ประกอบของการย้ายตัวอย่างผ่านคอลัมน์ที่ความเร็วที่แตกต่างกันซึ่งเป็นฟังก์ชั่นของการมีปฏิสัมพันธ์ทางกายภาพที่เฉพาะเจาะจงกับตัวดูดซับ (เรียกว่าเฟส) ความเร็วของแต่ละองค์ประกอบขึ้นอยู่กับลักษณะทางเคมีในลักษณะของเฟส (คอลัมน์) และองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ เวลาที่เฉพาะเจาะจงวิเคราะห์ elutes (โผล่ออกมาจากคอลัมน์) เรียกว่าเวลาการเก็บรักษา เวลาเก็บกักที่วัดโดยเฉพาะอย่างยิ่งภายใต้เงื่อนไขที่ถือว่าเป็นลักษณะของการระบุวิเคราะห์ที่กำหนด. ประเภทที่แตกต่างกันหลายคอลัมน์ที่มีอยู่เต็มไปด้วยตัวดูดซับที่แตกต่างกันในขนาดอนุภาคและในลักษณะของพื้นผิวของพวกเขา ("พื้นผิวเคมี") การใช้วัสดุบรรจุภัณฑ์ขนาดอนุภาคขนาดเล็กต้องใช้ความดันในการดำเนินงานที่สูงขึ้น ("แรงดันกลับ") และมักจะช่วยเพิ่มความละเอียดของโครมา (เช่นระดับของการแยกระหว่างวิเคราะห์ต่อเนื่องที่เกิดขึ้นใหม่จากคอลัมน์) ในแง่ของเคมีพื้นผิวอนุภาคดูดซับอาจจะไม่ชอบน้ำหรือขั้วโลกในธรรมชาติ. ขั้นตอนการใช้มือถือทั่วไปรวมถึงการรวมกันละลายของน้ำที่มีตัวทำละลายอินทรีย์ต่างๆ (ส่วนใหญ่จะเป็น acetonitrile และเมธานอล) บางเทคนิค HPLC ใช้ขั้นตอนการถือน้ำฟรี (ดูโคเฟสปกติด้านล่าง) องค์ประกอบน้ำของเฟสเคลื่อนที่อาจมีกรด (เช่นฟอร์มิฟอสฟอรัสหรือกรด Trifluoroacetic) หรือเกลือเพื่อช่วยในการแยกส่วนประกอบตัวอย่าง องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่อาจจะคงที่ (โหมด "ชะ Isocratic") หรือแตกต่างกัน (โหมด "ชะลาด") ในระหว่างการวิเคราะห์โครมา ชะ Isocratic โดยทั่วไปจะมีประสิทธิภาพในการแยกชิ้นส่วนกลุ่มตัวอย่างที่ไม่ได้แตกต่างกันมากในความเป็นพี่น้องของพวกเขาสำหรับเฟส ในชะลาดองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ที่มีความแตกต่างกันโดยทั่วไปจากต่ำไปสูงความแข็งแรง eluting ความแข็งแรงเคลือบของเฟสเคลื่อนที่เห็นได้จากเวลาการเก็บรักษาสารที่มีความแข็งแรงสูง eluting ผลิตชะรวดเร็ว (= การเก็บรักษาสั้นครั้ง) รายละเอียดการไล่ระดับสีทั่วไปในรเฟสที่ตรงกันข้ามอาจจะเริ่มต้นที่ 5% acetonitrile (น้ำหรือบัฟเฟอร์น้ำ) และความคืบหน้าเป็นเส้นตรงถึง 95% acetonitrile กว่า 5-25 นาที ระยะเวลาขององค์ประกอบเฟสเคลื่อนที่อย่างต่อเนื่องอาจจะเป็นส่วนหนึ่งของการไล่ระดับสีรายละเอียดใด ๆ ตัวอย่างเช่นองค์ประกอบเฟสเคลื่อนที่อาจจะคงที่ที่ acetonitrile 5% 1-3 นาทีตามด้วยการเปลี่ยนแปลงเชิงเส้นถึง 95% acetonitrile. องค์ประกอบที่เลือกของเฟสเคลื่อนที่ (เรียกว่าชะ) ขึ้นอยู่กับความรุนแรงของการปฏิสัมพันธ์ ระหว่างส่วนประกอบต่างๆตัวอย่าง ("วิเคราะห์") และเฟส (เช่นการมีปฏิสัมพันธ์ที่ไม่ชอบน้ำใน HPLC ย้อนกลับเฟส) ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับความสัมพันธ์ของพวกเขาสำหรับขั้นตอนการเคลื่อนที่และโทรศัพท์มือถือวิเคราะห์พาร์ทิชันระหว่างทั้งสองในระหว่างขั้นตอนการแยกที่เกิดขึ้นในคอลัมน์ ขั้นตอนการแบ่งพาร์ทิชันนี้จะคล้ายกับสิ่งที่เกิดขึ้นในระหว่างการสกัดของเหลวของเหลว แต่อย่างต่อเนื่องไม่ได้ขั้นตอนที่ชาญฉลาด ในตัวอย่างนี้ใช้การไล่ระดับสีน้ำ / acetonitrile, ชิ้นส่วนที่ไม่ชอบน้ำมากขึ้นจะชะ (หลุดออกมาคอลัมน์) ปลายเมื่อเฟสเคลื่อนที่ที่ได้รับความเข้มข้นมากขึ้นใน acetonitrile (เช่นในเฟสเคลื่อนที่ของความแข็งแรง eluting สูงกว่า). ทางเลือกของเฟสเคลื่อนที่ ส่วนประกอบสารเติมแต่ง (เช่นเกลือหรือกรด) และเงื่อนไขการไล่ระดับสีขึ้นอยู่กับลักษณะของคอลัมน์และส่วนประกอบตัวอย่าง มักจะเป็นชุดของการทดลองวิ่งจะดำเนินการกับกลุ่มตัวอย่างเพื่อหาวิธี HPLC ซึ่งจะช่วยให้การแยกเพียงพอ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การดำเนินการ [ แก้ไข ]
ตัวอย่างส่วนผสมที่จะแยกและวิเคราะห์เป็น แนะนำ ในหมวด ( ปกติไม่เล็กตัวเลข ) ในกระแสของเฟสเคลื่อนที่ percolating ผ่านคอลัมน์ ส่วนประกอบของตัวอย่างเคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์ที่ความเร็วที่แตกต่างกัน ซึ่งเป็นฟังก์ชันของการติดต่อทางกายภาพที่เฉพาะเจาะจงกับการดูดซับ ( เรียกว่า stationary phase )ความเร็วของแต่ละองค์ประกอบขึ้นอยู่กับธรรมชาติทางเคมีของมัน ในธรรมชาติของเฟสอยู่กับที่ ( คอลัมน์ ) และองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ เวลาที่ครู elutes เฉพาะ ( ที่โผล่ออกมาจากคอลัมน์ ) เรียกว่าเวลาการเก็บรักษาของ การเก็บข้อมูลเวลาวัดภายใต้เงื่อนไขที่เฉพาะเจาะจงจะถือว่าเป็นการระบุคุณลักษณะของครู

ให้ .หลายประเภทที่แตกต่างกันของคอลัมน์ที่มีอยู่เต็มไป ด้วยในที่แตกต่างกันในขนาดและลักษณะของผิวของพวกเขา ( " เคมี " พื้นผิว ) การใช้อนุภาคเล็กขนาดบรรจุวัสดุใช้งานแรงดันสูง ( " backpressure " ) และโดยทั่วไปช่วยเพิ่มความละเอียดและ ( เช่นองศาของการแยกระหว่างสารติดต่อกันที่เกิดขึ้นใหม่จากคอลัมน์ ) ในแง่ของพื้นผิวทางเคมี อนุภาคดูดซับอาจ ) หรือขั้วในธรรมชาติ

ปกติมือถือระยะที่ใช้ รวมถึงการรวมกันของน้ำได้ด้วยตัวทำละลายอินทรีย์ต่าง ๆ ( ส่วนใหญ่เป็นไนไตรล์และเมทานอล )บางเทคนิค HPLC ใช้น้ำระยะมือถือฟรี ( ดูปกติเฟสโครมาโทกราฟีด้านล่าง ) ส่วนสารละลายของเฟสเคลื่อนที่อาจประกอบด้วยกรด ( เช่นมิคฟอส , หรือกรดไตรฟลูออโรอะซิติก ) หรือ เกลือ เพื่อช่วยในการแยกระหว่างส่วนประกอบองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่อาจจะคงที่ ( " โหมด " ( Isocratic หลากหลาย ( ) หรือ " โหมด " ( ลาด ) ในการวิเคราะห์ทางโครมาโทกราฟี ( คือ Isocratic โดยทั่วไปจะมีประสิทธิภาพในการแยกองค์ประกอบของตัวอย่างที่ไม่แตกต่างกันมากในความสัมพันธ์ของพวกเขา สำหรับเฟสอยู่กับที่ในการใช้องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ที่แตกต่างกันโดยทั่วไปจากสูงไปต่ำ hexane ความแข็งแรง ใช้ hexane ความแข็งแรงของเฟสเคลื่อนที่สะท้อนโดยครูความคงทนสูงกำลังการผลิต ( hexane ครั้งอย่างรวดเร็ว ( = เวลาการเก็บรักษาสั้น )รายละเอียด : โดยทั่วไปในกลับเฟสโครมาโทกราฟีอาจเริ่มต้นที่ 5% ( ในน้ำหรือสารละลายบัฟเฟอร์ไน ) และความก้าวหน้าเฉลี่ย 95% ไน 5 – 25 นาที ช่วงขององค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่อย่างต่อเนื่องอาจเป็นส่วนหนึ่งของการไล่ระดับสีโปรไฟล์ ตัวอย่างเช่น องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่อาจจะถูกเก็บไว้คงที่ 5% ไน 1 – 3 นาทีตามด้วยการเปลี่ยนแปลงถึง 95% ไนเส้น

เลือกองค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่ ( เรียกว่าตัว ) ขึ้นอยู่กับความเข้มของการปฏิสัมพันธ์ระหว่างองค์ประกอบต่างๆ ( ตัวอย่าง " สาร " ) และระยะ stationary ( ก. ) ปฏิสัมพันธ์ใน reversed-phase HPLC )ทั้งนี้ขึ้นอยู่กับความสัมพันธ์ของพวกเขาให้อยู่กับที่และเคลื่อนที่ระยะสารกั้นระหว่างสองในระหว่างกระบวนการแยกที่เกิดขึ้นในคอลัมน์ การกระบวนการนี้คล้ายกับที่เกิดขึ้นในระหว่าง–ของเหลวการสกัด แต่อย่างต่อเนื่อง ไม่เดินปัญญา ในตัวอย่างนี้ใช้น้ำ / ไนลาด ,ส่วนประกอบ ) มากกว่าจะ elute ( มาปิดคอลัมน์ ) สาย เมื่อระยะเคลื่อนที่ได้เข้มข้นกว่าใน Acetonitrile ( เช่นในเฟสเคลื่อนที่ของความแข็งแรงที่สูง hexane )

เลือกส่วนประกอบของเฟสเคลื่อนที่เจือปน ( เช่น เกลือ หรือกรด ) และเงื่อนไขการไล่ระดับสีขึ้นอยู่กับธรรมชาติของคอลัมน์และองค์ประกอบของตัวอย่าง .มักจะเป็นชุดของการทดลองวิ่งจะดำเนินการกับตัวอย่าง เพื่อหาเทคนิควิธีที่ให้แยกอย่างเพียงพอ