Chemical analyses of the experiment

Chemical analyses of the experimental diets were
carried out following the AOAC (1990) methods. The
DM content of feed and fecal samples was measured
by using a hot air oven (FC-610; Advantec, Toyo Seisakusho
Co. Ltd, Tokyo, Japan). The GE was determined
in a bomb calorimeter (Model 1241; Parr Instrument
Co., Moline, IL). The chromium concentration of diets
and fecal samples was determined by an automated
spectrophotometer (Model V-550; Jasco Co., Tokyo, Japan)
according to the procedure of Fenton and Fenton
(1979). In short, samples of feed (5 g) or feces (1 to 2
g) were ashed in a muffle furnace at 450°C overnight.
After cooling, 15 mL of a digestion mixture (10 g of
sodium molybdate dihydrate dissolved in 500 mL of
a 150:150:200 mixture of distilled water:concentrated
sulfuric acid:70% perchloric acid) was added to each
sample and heated on a hot plate (surface temperature up to 300°C) until a yellowish or reddish color developed.
The samples were heated for an additional 10 to
15 min, removed from the hot plate and allowed to cool.
The digests were then quantitatively transferred to
200-mL volumetric flasks with distilled water and made
to volume. Approximately 10 mL of the diluted digest
was poured into a centrifuge tube, capped, and centrifuged
(VS-550; Vision Scientific Co. Ltd., Seoul) for 5
min at 700 × g. The OD was measured in a cuvette vs.
distilled water at 440 nm with an automated spectrophotometer
(Model V-550; Jasco Co., Tokyo). Standard
curves were prepared by using a stock solution of pure
Cr2O3 (100mg/100 mL), diluted to several working standards
of 5, 10, 20, 40, 60, or 80 mg/100 mL, and carrying
them through each method. The optical density was
plotted against milligrams of Cr2O3. The digestibility
was then calculated using the following formula:
Digestibility (%) = [1 − {(Nf × Cd) /(Nd × Cf)}] × 100,
in which Nf = Nutrient concentration in feces (% DM),
Nd = Nutrient concentration in diet (% DM),
Cf = Chromium concentration in feces (% DM), and
Cd = Chromium concentration in diet (% DM).
The Ca and P contents in the feed and feces were
measured according to AOAC (1984; method 7.099b).
Lymphocyte Subpopulation Assay. Three milliliters
of blood were mixed with 3 mL of acid citrate dextrose
(ACD) solution (25 mM citric acid, 51.7 mM sodium
acetate, 81.6 mM D-glucose). The blood solution
was then centrifuged at 1,500 × g for 10 min, and white
blood cells (WBC) were collected with a sterile Pasteur
pipette and placed on the surface of Hypaque Ficoll
(Histopaque 1.803; Sigma Chemical Co.) and centrifuged
at 500 × g for 30 min. The lymphocytes were
obtained from the interface between Ficoll and plasma,
and cell suspensions were washed 3 times and resuspended
in a Ca- and Mg-free phosphate buffered saline
(11.3 mM sodium phosphate, 3.8 mM potassium phosphate,
125 mM sodium chloride, 100 units of penicillin/
mL, and 100
g of streptomycin/mL).Cells were then incubated with a panel of monoclonal
antibodies (mAb), obtained from Seoul National University,
Korea, specific for various swine leukocyte differentiation
antigen markers. The panel of mAb included
PT85A (MHC class II), H42A (IgG2a), and mAb
specific for porcine CD2, CD4, CD8, and B and N cells.
Lymphocytes were subtyped by the flow cytometry Cell-
Quest program (Davis et al., 1990).
Fifteen microliters of each mAb and 1 × 107 lymphocytes
were mixed in a well of a V-bottomed 96-well
microplate (Stockwell Scientifics, Scottsdale, AZ), and
the mixture of lymphocytes and mAb were incubated
at 4°C for 30 min. The cells were washed 3 times with
the cold washing buffer [450 mL of PBS, 50 mL of ACD,
5 mL of 20% sodium azide, 10 mL of γ-globulin-free horse serum (Gibco-BRL, Grand Island, NY), 20 mL of
250 mM EDTA, and 1 mL 0.5% of phenol red], and the
supernatant was discarded.
The cell suspension was incubated with 100
L of
0.02 mg/mL of fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated
goat anti-mouse IgG + IgM antibody (Caltag Lab,
Burlingame, CA) at 4°C for 30 min. The cells were then
washed 3 times with the second washing buffer [450
mL of PBS, 50 mL of ACD, 5 mL of 20% sodium azide,
20 mL of 250 mM EDTA, 1 mL of 0.5% phenol red] and
fixed with 200
L of 20% PBS-formalin (20 mL of 38%
formalin, 980 mL of PBS). To analyze the lymphocyte
subpopulation, cells were counted and analyzed with
the fluorescence-activated cell sorter Calibur and Cell-
Quest programs.
Antibodies were measured in the previously collected
blood using an ELISA kit. Formalin-inactivated Pasteurella
multocida whole cells were coated in 96-well
V-bottomed microplate. Sera were diluted 2-fold serially
and incubated for 2 h. After washing 3 times with
washing buffer, anti-pig IgG peroxidase conjugate
(Sigma Chemical Co.) was added to each well. The Ophenylenediamine
was used as the substrate, and absorbance
was measured at 490 nm with an ELISA
reader (Microplate autoreader; BioTek Instruments,
Winooski, VT).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ทางเคมีของอาหารทดลองได้ดำเนินการตามวิธี AOAC (1990) ที่มีวัดเนื้อหา DM ของตัวอย่างอาหาร และ fecalโดยเตาอบอากาศร้อน (FC-610 Advantec โตโยนิสสันจำกัด โตเกียว ญี่ปุ่น) GE ได้กำหนดในแคลอรีมิเตอร์ระเบิด (รุ่น 1241 ตราดาเชลพารร์จำกัด โมลีน IL) ความเข้มข้นของโครเมียมของอาหารและตัวอย่าง fecal ถูกกำหนด โดยอัตโนมัติที่เครื่องทดสอบกรดด่าง (รุ่น V-550 Jasco Co. โตเกียว ญี่ปุ่น)ตามขั้นตอนของ Fenton และ Fenton(1979) ในระยะสั้น ตัวอย่างอาหาร (5 กรัม) หรืออุจจาระ (1 ถึง 2g) ถูก ashed ในเตาเป็นเตาที่ 450 ° C ค้างคืนหลังจากทำความเย็น 15 mL ผสมระหว่างย่อยอาหาร (10 กรัมของละลายโซเดียม molybdate dihydrate ในขนาด 500 มล.ของ150:150:200 ส่วนผสมของน้ำกลั่น: เข้มข้นกรดกำมะถันกรด: 70% perchloric) ถูกเพิ่มไปยังแต่ละชิ้นงานตัวอย่าง และอุ่นบนจานร้อน (พื้นผิวอุณหภูมิถึง 300° C) จนกระทั่งพัฒนาเป็นสีเหลือง หรือน้ำตาลตัวอย่างถูกความร้อนที่ 10 เพิ่มเติมเพื่อ15 นาที จานร้อน และอนุญาตให้เย็นไว้Digests ถูกแล้ว quantitatively โอนย้ายไปนำ volumetric 200 mL ด้วยน้ำกลั่น และทำการไดรฟ์ข้อมูล แยกย่อยแตกออกประมาณ 10 mLมี poured ในเครื่องหมุนเหวี่ยงหลอด ร็อคกี้ และ centrifuged(VS-550 วิสัยทัศน์ทางวิทยาศาสตร์ Co. Ltd. โซล) สำหรับ 5นาทีที่ 700 × g OD ถูกวัดใน cuvette vsกลั่นน้ำที่ 440 nm กับเป็นเครื่องทดสอบกรดด่างแบบอัตโนมัติ(รุ่น V-550 Jasco Co. โตเกียว) มาตรฐานเส้นโค้งถูกเตรียม โดยใช้โซลูชันหุ้นของแท้Cr2O3 (100mg/100 mL), ยกเว้นมาตรฐานการทำงานต่าง ๆ5, 10, 20, 40, 60 หรือ 80 mg/100 mL และดำเนินการโดยแต่ละวิธีเหล่านั้น มีความหนาแน่นออปติคอลพล็อตกับ milligrams Cr2O3 การ digestibilityแล้วคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้:Digestibility (%) = [1 − {(Nf × Cd) /(Nd × Cf) }] × 100ในที่ Nf =ความเข้มข้นของธาตุอาหารในอุจจาระ (% DM),Nd =ความเข้มข้นของธาตุอาหารในอาหาร (% DM),Cf =ความเข้มข้นของโครเมียมในอุจจาระ (% DM), และซีดี =ความเข้มข้นของโครเมียมในอาหาร (% DM)เนื้อหา Ca และ P ในอาหารสัตว์และอุจจาระได้วัดตาม AOAC (1984 วิธี 7.099b)Lymphocyte Subpopulation วิเคราะห์ Milliliters สามเลือดที่ผสมกับ 3 mL ของกรดซิเตรตขึ้นโซลูชั่น (ACD) (กรดซิตริก 25 มม. โซเดียม 51.7 มิลลิเมตรacetate, 81.6 mM D-กลูโคส) การแก้ปัญหาเลือดมี centrifuged แล้วที่ 1500 g × 10 นาที และสีขาวเซลล์เม็ดเลือด (WBC) ได้รวบรวมกับระดับกอซประหยัดพื้นที่ และวางอยู่บนพื้นผิวของ Hypaque Ficoll(Histopaque 1.803 ซิกมาจำกัดเคมี) และ centrifugedที่ 500 กรัมซื้อสำหรับ 30 นาที Lymphocytes ถูกได้รับจากอินเทอร์เฟซระหว่าง Ficoll และพลาสม่าและบริการเซลล์ถูกล้าง 3 ครั้ง และ resuspendedในน้ำเกลือฟอสเฟต buffered ฟรี Ca และ Mg(11.3 mM โซเดียมฟอสเฟต 3.8 มม.โพแทสเซียมฟอสเฟต125 mM โซเดียมคลอไรด์ ยาเพนนิซิลลิน 100 หน่วย /มล. และ 100 กรัมของ streptomycin/mL) เซลล์ได้แล้ว incubated กับแผงของโมโนแอนตี้ (มาบ), ได้รับจากมหาวิทยาลัยแห่งชาติโซลเกาหลี เฉพาะสำหรับต่าง ๆ สุกร leukocyte สร้างความแตกต่างตรวจหาเครื่องหมาย แผงของมาบรวมPT85A (เอ็มเอชซีคลาส II), H42A (IgG2a), และมาบเฉพาะสำหรับช่วงเซลล์ CD2, CD4, CD8 และ B และ NLymphocytes ถูก subtyped โดยเซลล์กระแสเซลล์-แสวงหาโปรแกรม (Davis et al., 1990)Microliters ห้าละมาบและ 1 × 107 lymphocytesดีดี 96-วียนที่ได้ผสมmicroplate (Stockwell Scientifics สก็อตส์เดล AZ), และส่วนผสมของ lymphocytes และมาบได้ incubatedที่ 4° C สำหรับ 30 นาที เซลล์ถูกล้าง 3 ครั้งด้วยเย็นล้างบัฟเฟอร์ [450 mL ของ PBS, 50 mL ของ ACD5 mL ของ 20% โซเดียม azide, 10 mL ของซีรั่มม้าγ-กลอบูลินฟรี (Gibco-BRL เกาะแกรนด์ NY), 20 mL ของEDTA 250 มม. และ 0.5 1 mL %วางสีแดง], และsupernatant ถูกละทิ้งการระงับเซลล์ถูก incubated กับ 100 L0.02 mg/mL ของ fluorescein isothiocyanate (FITC) -กลวงครีมป้องกันเมาส์ IgG + แอนติบอดีการระบาดของโรค (Caltag Labเบอร์ลินเกม CA) ที่ 4 ° C ใน 30 นาที เซลล์ถูกแล้วล้าง 3 ครั้ง ด้วยสองล้างบัฟเฟอร์ [450mL ของ PBS, 50 mL ของ ACD, 5 mL ของ 20% โซเดียม azideปริมาณ 20 mL 250 มม. EDTA, 1 mL สีแดงวาง 0.5%] และคง มี L 200 20% PBS-formalin (20 mL ของ 38%formalin, 980 mL ของ PBS) การวิเคราะห์การ lymphocytesubpopulation เซลล์ตรวจนับ และวิเคราะห์ด้วยการคัดแยกเซลล์เรียกใช้ fluorescence Calibur และเซลล์-แสวงหาโปรแกรมแอนตี้ถูกวัดในรวบรวมก่อนหน้านี้เลือดที่ใช้ชุดการ ELISA ยกเลิก formalin Pasteurellamultocida เซลล์ทั้งหมดถูกเคลือบผิวด้วย 96ยนที่ V microplate จะมีข้อยกเว้น 2-fold seriallyและ incubated สำหรับ 2 h หลังจากการล้าง 3 ครั้งด้วยล้างบัฟเฟอร์ peroxidase IgG หมูป้องกันสังยุค(ซิกเคมี จำกัด) เพิ่มให้ดีละกัน Ophenylenediamineใช้เป็นพื้นผิว และ absorbanceมีวัดที่ 490 nm กับ ELISA การอ่าน (Microplate autoreader เครื่องมือ BioTekWinooski, VT)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์ทางเคมีของอาหารทดลองดำเนินการดังต่อไปนี้ AOAC นี้ (1990) วิธีการ เนื้อหา DM ของตัวอย่างอาหารสัตว์และอุจจาระวัดโดยใช้เตาอบลมร้อน(FC-610; Advantec, Toyo Seisakusho จำกัด กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) จีอีมุ่งมั่นที่ระเบิดความร้อน (ที่รุ่น 1241; พาร์ตราสาร จำกัด Moline, IL) ความเข้มข้นของโครเมียมของอาหารและอุจจาระถูกกำหนดโดยอัตโนมัติspectrophotometer (รุ่น V-550; Jasco Co. , กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) เป็นไปตามขั้นตอนของเฟนตั้นและเฟนตัน(1979) ในระยะสั้นตัวอย่างของอาหาร (5 กรัม) หรืออุจจาระ (1-2 กรัม) ได้รับการ ashed ในเตาเผาที่ 450 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน. หลังจากเย็น 15 มิลลิลิตรผสมการย่อยอาหาร (ที่ 10 กรัมdihydrate โซเดียมโมลิบละลายใน 500 มิลลิลิตร ของ150: 150: 200 ส่วนผสมของน้ำกลั่น: มีความเข้มข้นของกรดซัลฟูริก: 70% กรดเปอร์คลอริก) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละตัวอย่างและให้ความร้อนบนจานร้อน(อุณหภูมิพื้นผิวสูงถึง 300 ° C) จนเป็นสีเหลืองหรือสีแดงพัฒนา. ตัวอย่างที่ถูกทำให้ร้อนเพื่อเพิ่มไป 10 15 นาทีออกจากจานร้อนและได้รับอนุญาตให้เย็น. ถูกย่อยสลายแล้วโอนปริมาณการ200 มิลลิลิตรขวดปริมาตรด้วยน้ำกลั่นและทำให้ปริมาณ ประมาณ 10 มิลลิลิตรย่อยปรับลดถูกเทลงในหลอดหมุนเหวี่ยงต่อยอดและหมุนเหวี่ยง(VS-550; วิสัยทัศน์ทางวิทยาศาสตร์ จำกัด โซล) เป็นเวลา 5 นาทีที่ 700 ×กรัม OD วัดใน cuvette เทียบกับน้ำกลั่นที่440 นาโนเมตรที่มี spectrophotometer อัตโนมัติ(รุ่น V-550; Jasco จำกัด โตเกียว) มาตรฐานเส้นโค้งที่ได้จัดทำขึ้นโดยใช้วิธีการแก้ปัญหาสต็อกของบริสุทธิ์Cr2O3 (100mg / 100 มิลลิลิตร) เจือจางกับมาตรฐานการทำงานหลาย5, 10, 20, 40, 60 หรือ 80 มก. / 100 มลและการดำเนินการให้พวกเขาผ่านแต่ละวิธี ความหนาแน่นของออปติคอลได้วางแผนกับมิลลิกรัมของ Cr2O3 การย่อยที่คำนวณแล้วใช้สูตรต่อไปนี้: การย่อย (%) = [1 - {(Nf × Cd) / (Nd × Cf)}] × 100, ที่ Nf = ความเข้มข้นของธาตุอาหารในอุจจาระ (% DM) Nd = ความเข้มข้นของสารอาหารในอาหาร (% DM) Cf = ความเข้มข้นของโครเมี่ยมในอุจจาระ (% DM) และ. Cd = ความเข้มข้นของโครเมี่ยมในอาหาร (% DM) เนื้อหาแคลเซียมและฟอสฟอรัสในอาหารและอุจจาระถูกวัดตาม AOAC (1984; 7.099b วิธีการ). เม็ดเลือดขาว subpopulation Assay สามมิลลิลิตรของเลือดผสมกับ 3 มิลลิลิตรเดกซ์โทรสกรดซิเตรต (ACD) วิธีการแก้ปัญหา (25 มิลลิกรดซิตริก 51.7 มิลลิโซเดียมอะซิเตท, 81.6 มิลลิ D-กลูโคส) วิธีการแก้ปัญหาในเลือดได้แล้วหมุนเหวี่ยงที่ 1500 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาทีและสีขาวเซลล์เม็ดเลือด(WBC) ที่ถูกเก็บรวบรวมกับปาสเตอร์ผ่านการฆ่าเชื้อปิเปตและวางไว้บนพื้นผิวของHypaque Ficoll (Histopaque 1.803; Sigma เคมี จำกัด ) และหมุนเหวี่ยงที่500 × กรัมเป็นเวลา 30 นาที เซลล์เม็ดเลือดขาวที่ถูกได้รับจากการเชื่อมต่อระหว่าง Ficoll และพลาสม่าและสารแขวนลอยเซลล์ถูกล้าง3 ครั้งและ resuspended ใน CA- และฟอสเฟต Mg ฟรีน้ำเกลือบัฟเฟอร์(11.3 มมฟอสเฟตโซเดียมโพแทสเซียมฟอสเฟต 3.8 มิลลิ, 125 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ 100 หน่วย ของยาปฏิชีวนะ / มิลลิลิตรและ 100 กรัม streptomycin / มิลลิลิตร) .Cells ถูกบ่มแล้วกับแผงของโมโนโคลนอลแอนติบอดี(mAb) ที่ได้รับจากมหาวิทยาลัยแห่งชาติโซลประเทศเกาหลีที่เฉพาะเจาะจงสำหรับความแตกต่างของเม็ดเลือดขาวหมูต่างๆเครื่องหมายแอนติเจน แผงของ mAb รวมPT85A (MHC ประเภท II) H42A (IgG2a) และ mAb ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับสุกร CD2, CD4, CD8 และ B และไม่มีเซลล์. เซลล์เม็ดเลือดขาวที่ถูก subtyped โดย cytometry ไหลเซลล์โปรแกรมเควส(เดวิสและอัล , 1990). สิบห้า microliters ของแต่ละ mAb 1 × 107 เซลล์เม็ดเลือดขาวที่ถูกผสมในดีV-ต่ำสุด 96 หลุมmicroplate (สต็อคเวล Scientifics, สกอต, AZ) และส่วนผสมของเซลล์เม็ดเลือดขาวและmAb ถูกบ่มที่อุณหภูมิ4 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที เซลล์ที่ถูกล้าง 3 ครั้งด้วยบัฟเฟอร์ซักผ้าเย็น[450 มิลลิลิตรพีบีเอส 50 มลของ ACD, 5 มิลลิลิตรโซเดียมเอไซด์ 20% 10 มิลลิลิตรγ-globulin ฟรีซีรั่มม้า (Gibco-BRL แกรนด์ไอส์แลนด์นิวยอร์ก) 20 มิลลิลิตรEDTA มิลลิ 250 และ 1 มิลลิลิตร 0.5% ของสีแดงฟีนอล] และใสทิ้ง. เซลล์แขวนลอยที่ถูกบ่มกับ 100 ลิตร0.02 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร fluorescein isothiocyanate (FITC) -conjugated แพะป้องกันเมาส์ IgG + แอนติบอดี IgM (Caltag แล็บ, เบอร์ลิน, CA) ที่ 4 ° C เป็นเวลา 30 นาที เซลล์จากนั้นก็ล้าง 3 ครั้งด้วยบัฟเฟอร์ซักผ้าสอง [450 มิลลิลิตรพีบีเอส 50 มลของ ACD 5 มิลลิลิตรโซเดียมเอไซด์ 20% 20 มิลลิลิตร EDTA มิลลิ 250, 1 มิลลิลิตร 0.5% สีแดงฟีนอล] และคงที่200 ? L 20% พีบีเอส-ฟอร์มาลิน (20 มล 38% ฟอร์มาลิน 980 มิลลิลิตรพีบีเอส) เพื่อวิเคราะห์เม็ดเลือดขาวsubpopulation เซลล์นับและวิเคราะห์ด้วยเซลล์เรืองแสงที่ทำงานโดยใช้ตัวเรียงลำดับคาลิเบอร์และเซลล์โปรแกรมเควส. แอนติบอดีอยู่ในวัดที่เก็บรวบรวมก่อนหน้านี้ในเลือดโดยใช้ชุด ELISA ฟอร์มาลิน-ยกเลิก Pasteurella multocida ทั้งเซลล์ที่ถูกเคลือบใน 96 หลุมV-จุดต่ำสุด microplate ซีรั่มที่ถูกปรับลด 2 เท่าลำดับและบ่มเป็นเวลา2 ชั่วโมง หลังจากล้าง 3 ครั้งด้วยบัฟเฟอร์ซักผ้าIgG ต่อต้านหมูผัน peroxidase (Sigma เคมี จำกัด ) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดี Ophenylenediamine ถูกใช้เป็นสารตั้งต้นและการดูดกลืนแสงวัดที่ 490 นาโนเมตรด้วยวิธี ELISA อ่าน (ไมโคร autoreader; Biotek เครื่องมือ, นุ, VT)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์ทางเคมีของอาหารทดลอง
ดำเนินการต่อไปนี้องศา เซลเซียส ( 1990 ) วิธีการ
DM เนื้อหาอาหารและตัวอย่างอุจจาระวัด
โดยใช้ลมร้อน ( fc-610 ; ADVANTEC , โตโย seisakusho
จำกัด , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) GE ตั้งใจ
ในระเบิดแคลอริมิเตอร์ ( รุ่น 1241 ; พาร์เครื่องดนตรี
Co . , โมลีน , อิลลินอยส์ ) ความเข้มข้นของโครเมียมในอาหาร
และตัวอย่างอุจจาระถูกกำหนดโดยอัตโนมัติ
Spectrophotometer ( แบบ v-550 ; jasco Co . , โตเกียว , ญี่ปุ่น )
ตามกระบวนการเฟนตัน และเฟนตัน
( 1979 ) ในระยะสั้น , ตัวอย่างอาหาร ( 5 กรัม ) หรืออุจจาระ ( 2
g ) Ashed ในเตาเผาที่อุณหภูมิ 450 องศา C ค้างคืน
หลังจากเย็น 15 ml ของการย่อยอาหารผสม ( 10 กรัมของโซเดียมโมลิบเดต 2 ละลาย

เป็น 150:150 : 500 มิลลิลิตร200 ผสมน้ำกลั่นเข้มข้น
กรดเปอร์คลอริกแอซิด : 70% ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละ
ตัวอย่างและอุ่นบนจานร้อน ( อุณหภูมิพื้นผิวสูงถึง 300 องศา C ) จนเหลือง หรือแดง สีพัฒนา
จำนวนให้ความร้อนเพิ่มเติม 10
15 นาที ลบออกจาก จานร้อน และได้รับอนุญาตให้เย็น จะถูกย่อยแล้ว


หรือโอน200 ml ขวดปริมาตรกับน้ำกลั่นและทำให้
กับปริมาณ ประมาณ 10 มล. เจือจางย่อย
ถูกเทลงในเครื่องหมุนท่อ ปรบมือ และไฟฟ้า
( vs-550 ; วิสัยทัศน์ทางวิทยาศาสตร์ จำกัด โซล ) 5
มินที่ 700 × G จากวัดในคิวเวตต์ vs
น้ำกลั่นที่ 440 nm กับ Spectrophotometer แบบอัตโนมัติ ( v-550
; jasco Co . , โตเกียว ) มาตรฐาน
เส้นโค้งที่เตรียมโดยใช้โซลูชั่นหุ้นของเพียว
Cr2O3 ( 100 มก. / 100 มล. ) จำนวนหลายมาตรฐานการทำงาน
5 , 10 , 20 , 40 , 60 และ 80 มิลลิกรัม / 100 มิลลิลิตร และพก
พวกเขาผ่านแต่ละวิธี ความหนาแน่นของแสงคือ
งัดข้อกับมิลลิกรัม Cr2O3 . การย่อยได้
ถูกคำนวณโดยใช้สูตรต่อไปนี้ :
การย่อยได้ ( % ) = [ − 1 { ( NF ×ซีดี ) / ( ND × CF ) } ] × 100
ซึ่งใน NF = ความเข้มข้นของธาตุอาหารในอุจจาระ ( % DM ) ,
ครั้ง = ความเข้มข้นของธาตุอาหารในอาหาร ( ร้อยละ DM ) ,
CF = โครเมียมที่ความเข้มข้นในอุจจาระ ( % ของวัตถุแห้ง ) และซีดี = ความเข้มข้นของโครเมียมในอาหาร

( % DM ) Ca และ P ในระบบอาหารและอุจจาระถูก
วัด ตามองศา เซลเซียส ( 1984 ; วิธี 7.099b )
subpopulation โดยการทดสอบ สามมิลลิลิตร
เลือดผสม 3 มิลลิลิตรของกรดซิเตรตเดกซ์โทรส
( ACD ) โซลูชั่น ( 25 มม. กรดซิตริก , ตนเองมิลลิเมตรโซเดียม
acetate , 81.6 มม. ดี กูลโคส ) เลือดสารละลาย
แล้วระดับ 1500 × G สำหรับ 10 นาที , และสีขาว
เซลล์เม็ดเลือด ( WBC ) ถูกเก็บกับปิเปตปาสเตอร์
ปลอดเชื้อและวางไว้บนพื้นผิวของ hypaque ficoll
( histopaque 1.803 ; Sigma Chemical Co . ) และระดับ
500 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาที และลิมโฟไซต์ถูก
ที่ได้จากอินเตอร์เฟซระหว่าง ficoll และพลาสม่าและเซลล์แขวนลอยอยู่
, ล้าง 3 ครั้ง และ resuspended
ใน CA - มิลลิกรัมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ฟรีเกลือ
( 11.3 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟต , 3.8 มม. โพแทสเซียมฟอสเฟต ,
125 มม. โซเดียมคลอไรด์ 100 หน่วยของเพนนิซิลลิน /
มิลลิลิตร และ
streptomycin 100 กรัม / มิลลิลิตร ) แล้วบ่มเซลล์กับแผงของโมโนโคลนอลแอนติบอดี (
) )ที่ได้จากมหาวิทยาลัยแห่งชาติโซล , เกาหลี
เฉพาะต่าง ๆทำให้สุกรความแตกต่าง
) เครื่องหมาย แผงของแอนติบอดีรวม
pt85a ( MHC Class II ) , h42a ( igg2a ) และมาบ
เฉพาะจาก CD2 , CD4 , CD8 และ B และเซลล์ เม็ดเลือดขาว โดยการเป็น subtyped
-
( เซลล์ค้นหาโปรแกรม ( Davis et al . , 1990 ) .
15 ตัวเลขของแต่ละคน ) 1 × 107 เม็ดเลือดขาว
ผสมที่ดีของ v-bottomed 96 ดี
พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( กลุ่ม Stockwell , Scottsdale , AZ ) และส่วนผสมของลิมโฟไซต์ และมาบ

ที่ 4 ° C และบ่มเป็นเวลา 30 นาทีเซลล์ก็ล้าง 3 ครั้งด้วย
[ buffer ล้างเย็น 450 มิลลิลิตรปริมาตร 50 มิลลิลิตรและพีบีเอส
5 , มล. 20 % โซเดียมไซด์ 10 มิลลิลิตร γ - โกลบูลินฟรีม้า เซรั่ม ( NY gibco BRL , เกาะแกรนด์ ) 20 ml
250 mM EDTA และ 1 ต่อ 05 % ของ ฟีนอลเรด ] และ

น่านถูกทิ้ง ถูกระงับบ่มเซลล์กับ 100
l
0.02 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรี่ไอโซไทโอไซยาเนต ( fitc ) - ผลิตภัณฑ์เมาส์ IgG IgM แอนติบอดีต่อต้าน
แพะ ( caltag ห้องปฏิบัติการ
Burlingame , CA ) ที่ 4 ° C เป็นเวลา 30 นาที เซลล์คือ งั้น
ล้าง 3 ครั้งกับสองล้างบัฟเฟอร์ [ 450
มิลลิลิตรของพีบีเอส 50 มล. ของ ACD , 5 ml ไซด์
20% โซเดียม , 20 ml 250 mM EDTA 1 มล. 05% ฟีนอลเรด ]
ถาวร 200
L 20 % PBS ฟอร์มาลิน ( 20 มิลลิลิตร 38 %
ฟอร์มาลิน , 980 กรัม PBS ) วิเคราะห์โดย
subpopulation เซลล์ถูกนับและวิเคราะห์ด้วยการเปิดตัวมือถือ

เควสคาลิเบอร์และเซลล์ - โปรแกรม .
( วัดในก่อนหน้านี้เก็บ
เลือดโดยใช้ชุด ELISA ซึ่ง pasteurella
ฟอร์มาลินได้รับทั้งเซลล์ถูกเคลือบใน 96 ดี
v-bottomed พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย . เซราเป็นถึงเจือจางเป็น
บ่มเป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจากล้าง 3 ครั้งกับ
ล้างบัฟเฟอร์ตี้ หมู IgG peroxidase )
( Sigma Chemical Co . ) ที่ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละครั้งได้อีกด้วย การ ophenylenediamine
ถูกใช้เป็นฐานรอง และทำการวัดค่า

( อ่าน 290 nm ด้วย ( พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย autoreader biotek เครื่องมือ ,
;Winooski , VT )