During the experimental period wate

During the experimental period water temperature, pH, and salinity
were 26±1 °C, at 7.7±0.8, and at 31.2±1.3‰. Fishes were provided
with normal feed (without herbal extract) at the rate of 5% of their body
weight twice a day at 09:00 and 15:00 h (Table 1).
2.2. Lactuca indica extract
L. indica was collected from locally in Jeju Island, South Korea and
the identification was done by Department of Biotechnology, Jeju
National University. The plants were washed thoroughly with sterile
distilled water, shade dried, and grounded in a mechanical grinder
and sieved. The powders were sieved through an 80 μ mesh. The
collected powder was kept sealed in a plastic bag and stored at
−20 °C until use. The herbal powder (100 g) was mixed with 1000 ml
of 95% ethanol in a 2000 ml conical flask kept for 7 d at room
temperature, and agitated daily to ensure complete digestion. The
extracts were filtered through Whatman No. 2 filter paper and the
filtrate was dried under reduced pressure. The residues obtained after
evaporation of ethanol was kept in sterilized screw cap glass container
and stored at −20 °C until use.
2.3. Preparation of herbal diets
The experimental diet was prepared with the locally available
ingredients as shown in Table 1. All the ingredients were mixed
thoroughly by adding water, and then pelletized by using a hand
pelletizer (Xie et al., 2008) and then dried at 40 °C for 12 h. Four
experimental pellet diets were prepared with 0.1%, 1.0%, and 2.0% of
L. indica extract sprayed to the basal diet slowly and mixing evenly in a
drum mixer; the feeds were then air dried under sterile conditions for
12 h. The control basal diet (0% extract) was added with the same
volume of solvent without the extracts. The pellets were dried in an
oven at 30 °C for 18 h, packed, and stored in a freezer at −20 °C until
used. The proximate composition of the diets quantified following
AOAC method comprised 53.5% crude protein, 8.2% crude lipid, 7.8%
crude ash, and 14.7% crude carbohydrate.
2.4. Streptococcus iniae
S. iniae isolated from diseased olive flounder were kindly provided
by Prof. Moon-Soo Heo, Jeju National University for the study. Stocks
were grown in tryptic soy broth (TSB; Difco Laboratories, Sparks, MD)
for 24 h at 27 °C and then kept frozen in 200 μl aliquots at−70 °C. The
subculture was taken in TSB; after centrifugation the supernatant was
discarded and the pellets were re-suspended in sterile phosphate
buffer saline (PBS, pH 7.4). The cultures were adjusted to an optical
density of 1.2 at 540 nm using a spectrophotometer to give an S. iniae
suspension at 3.3×107 colony forming units (cfu) ml−1 after 24 h at
27 °C incubation. The bacterium was confirmed relevant biochemical
and molecular studies.
2.5. Experimental design
The experiment was performed in 200 L plastic tanks in the
department wet laboratory. The fishes were divided into four groups
(0%, 0.1%, 1.0%, or 2.0%) of 25 fish each in triplicate. Fishes were
provided with adequate aeration and fed at the rate of 5% of body
weight twice a day with the respective diets till the end of the
experiment. On 30th day of feeding, all groups were injected
intraperitoneally (i.p.) with 100 μl PBS containing S. iniae at
3.3×107 cfu ml−1. On weeks 1, 2, and 4 post-challenge, six fish
randomly collected from each tank were anaesthetized with MS-222
(NaHCO3 and tricaine methanesulphonate; Sigma Chemicals) 1:4000
in dechlorinated water for 2 min to collect blood samples for
analyzing of immunological parameters. The cumulative mortality
was calculated by following Amend (1981). Relative percentage
survival (RPS) was calculated as: The Number of surviving fishes after
challenge/Number of fishes injected with bacteria) x 100 (Misra et al.,
2006a,b).
2.6. Bleeding and separation of serum
Blood from the fish were drawn directly from the heart with the
help of a sterilized 1 ml hypodermal syringe containing EDTA as an
anticoagulant using 24 gauge needles. For serum separation blood
was collected without anticoagulant in serological tubes and stored in
a refrigerator overnight. The clot was then spun down at 3000 g for
10 min. The collected serum was stored in sterile serum tubes at
−20 °C until used for assays. All the procedures were carried out in
the sterilized condition. After drawing blood fishes were given 1%
KMnO4 dip treatment and released in to the tank.
2.7. Non-specific immune response assay
The respiratory burst activity was measured by NBT assay, the
phagocytic activity, total immunoglobulin level, the plasma lysozyme
activity in plasma were quantified following the modified method of
Anderson and Siwicki (1995).
2.8. Statistical analysis
All the data are expressed as mean±SE. Statistical analysis of data
involved one way analysis of variance (ANOVA) followed by the
comparison of means following Least Square Design (LSD) with SPSS
windows 15.0 version. The level of significance was expressed as
p-value at 0.05 levels.
3. Results
3.1. NBT assay
The NBT level did n

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ระหว่างอุณหภูมิของน้ำระยะเวลาทดลอง ค่า pH และความเค็ม26±1 ° C, 7.7±0.8 และ 31.2±1.3‰ ได้ ปลาไว้เรียบร้อยแล้วด้วยอาหารปกติ (ไม่มีสารสกัด) ในอัตรา 5% ของร่างกายน้ำหนักสองครั้งวันที่ 09:00 น.และ 15:00 ชั่วโมง (ตาราง 1)2.2. Lactuca indica สารสกัดL. indica รวบรวมจากภายในเกาะเชจู เกาหลีใต้ และรหัสทำ โดยฝ่ายเทคโนโลยีชีวภาพ เชมหาวิทยาลัยแห่งชาติ พืชถูกล้างอย่างละเอียดด้วยเป็นหมันกลั่นน้ำ ร่มแห้ง และเหตุผลในการบดเครื่องกลและแหลกลาญ ผงได้แหลกลาญเป็นตาข่าย 80 μ การรวบรวมผงถูกเก็บไว้ในถุงพลาสติกที่ปิดสนิท และเก็บไว้ที่−20 ° C จนถึงใช้ ผงสมุนไพร (100 กรัม) ถูกผสมกับ 1000 มล.95% เอทานอลในหนาวกรวย 2000 มิลลิลิตรเก็บไว้ 7 d ห้องอุณหภูมิ และนั้นกระตุ้นทำทุกวันเพื่อย่อยอาหารที่สมบูรณ์ การสารสกัดได้กรองผ่านกระดาษกรอง Whatman เลข 2 และระบบการกรองถูกอบแห้งภายใต้ความดันที่ลดลง ตกค้างที่ได้รับหลังจากระเหยของเอทานอลถูกเก็บไว้ในภาชนะแก้วฝาเกลียวผ่านการฆ่าเชื้อและเก็บไว้ที่ −20 ° C จนถึงใช้2.3. เตรียมอาหารสมุนไพรจัดเตรียมอาหารทดลองที่ มีพร้อมใช้งานภายในส่วนผสมดังแสดงในตารางที่ 1 การรวบรวมส่วนผสมทั้งหมดอย่างละเอียด โดยการเพิ่มน้ำ และ pelletized โดยใช้มือแล้วpelletizer (อิง et al. 2008) และอบแห้งที่อุณหภูมิ 40 ° C สำหรับ 12 สี่มีเตรียมอาหารเม็ดทดลอง ด้วย 0.1%, 1.0%, 2.0% ของสารสกัด indica L. พ่นอาหารแรกเริ่มช้า และผสมอย่างสม่ำเสมอในการกลองผสม ตัวดึงข้อมูลได้แล้วอากาศแห้งภายใต้เงื่อนไขกอซ12 ชม เพิ่มอาหารแรกเริ่มควบคุม (0% แยก) ด้วยเหมือนกันปริมาตรของตัวทำละลายไม่มีสารสกัด เม็ดถูกอบแห้งในตัวเตาอบที่อุณหภูมิ 30 ° C สำหรับ 18 h บรรจุ และเก็บไว้ในตู้แช่ที่ −20 ° C จนถึงใช้ องค์ประกอบของอาหารที่วัดต่อไปย่อมประกอบด้วยวิธี aoac หรือ 53.5% โปรตีน ไขมันดิบ 8.2%, 7.8%เถ้าน้ำมันดิบ และ 14.7% คาร์โบไฮเดรตน้ำมันดิบ2.4. อุณหภูมิ iniaeS. iniae แยกจากบากบั่นมะกอกตัวโปรดไว้โดยศาสตราจารย์จันทร์เพื่อเฮา มหาวิทยาลัยแห่งชาติเชจูสำหรับการศึกษา หุ้นที่ปลูกในน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic (TSB ห้องปฏิบัติ Difco ประกายไฟ MD)สำหรับ 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 27 ° C และเก็บไว้แช่ 200 μl aliquots at−70 องศาเซลเซียส การวัฒนธรรมถ่ายใน TSB หลังจากหมุนเหวี่ยง supernatantละทิ้ง และเกล็ดถูกเลื่อนออกไปอีกในฟอสเฟตเป็นหมันเกลือบัฟเฟอร์ (PBS ค่า pH 7.4) วัฒนธรรมถูกปรับให้มีแสงความหนาแน่น 1.2 ที่ 540 nm โดยใช้เครื่อง spectrophotometer ให้มี S. iniaeระบบกันสะเทือนที่ 3.3 × 107 อาณานิคมสร้าง ml−1 หน่วย (อาหรับ) หลังจากที่ 24 ชั่วโมงกกไข่ 27 ° C แบคทีเรียได้รับการยืนยันที่เกี่ยวข้องทางชีวเคมีและการศึกษาโมเลกุล2.5. ทดลองออกแบบทำการทดลองในถังพลาสติก 200 ลิตรในการแผนกห้องปฏิบัติการที่เปียก ปลาถูกแบ่งออกเป็นสี่กลุ่ม(0%, 0.1%, 1.0% หรือ 2.0%) 25 ปลาละลข้อ ปลามีอากาศเพียงพอ และเลี้ยงในอัตรา 5% ของร่างกายน้ำหนักสองวัน ด้วยอาหารตามลำดับจนถึงจุดสิ้นสุดของการทดลอง ใน 30 วันให้อาหาร กลุ่มทั้งหมดถูกฉีดintraperitoneally (ไป) มี 100 μl PBS ประกอบด้วย S. iniae ที่3.3 × 107 โยง ml−1 สัปดาห์ที่ 1, 2 และ 4 หลังท้าทาย ปลาหกรวบรวมโดยการสุ่มจากแต่ละถังถูก anaesthetized กับ MS-222(NaHCO3 และ tricaine methanesulphonate 1:4000 เคมีซิกม่า)ในน้ำ 2 นาทีเก็บตัวอย่างเลือดสำหรับ dechlorinatedวิเคราะห์พารามิเตอร์ปรับภูมิคุ้มกัน ตายสะสมได้คำนวณ โดย Amend ต่อ (1981) ร้อยละญาติรอด (RPS) เป็นคำนวณ: จำนวนการรอดปลาหลังความท้าทาย/จำนวนของปลาที่ฉีดกับแบคทีเรีย) x 100 (Misra et al.,2006a, b)2.6. เสียเลือด และการแยกซีรั่มเลือดปลาวาดจากด้านในความช่วยเหลือของเข็ม hypodermal 1 มล.ผ่านการฆ่าเชื้อที่ประกอบด้วย EDTA เป็นตัวสารที่ใช้เข็มวัด 24 เลือดแยกซีรั่มถูกรวบรวม โดยไม่มีสารกันเลือดแข็งในหลอดปิเปตทางวิทยา และเก็บไว้ในตู้เย็นค้างคืน ก้อนถูกแล้วปั่นลงที่ 3000 กรัมสำหรับ10 นาที ซีรั่มรวบรวมเก็บในหลอดซีรั่มผ่านการฆ่าเชื้อที่−20 ° C จนกระทั่งใช้ assays ในขั้นตอนที่ดำเนินการในสภาพผ่านการฆ่าเชื้อ หลังจากวาดเลือด ปลารับ 1%KMnO4 จุ่มรักษา และนำออกใช้ในถัง2.7 ทดสอบไม่ใช่เฉพาะการตอบสนองภูมิคุ้มกันกิจกรรมต่อเนื่องหายใจโดยวัดจากการทดสอบ NBT การกิจกรรม phagocytic เฉพาะส่วนรวมระดับ lysozyme การถูกพลากิจกรรมในพลาสมาถูกวัดตามวิธีการแก้ไขแอนเดอร์สันและ Siwicki (1995)2.8. สถิติวิเคราะห์ข้อมูลทั้งหมดจะแสดงเป็น mean±SE การวิเคราะห์ข้อมูลทางสถิติเกี่ยวข้องทางเดียวการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) ตามด้วยการการเปรียบเทียบวิธีการต่อไปนี้อย่างน้อยตารางออกแบบ (LSD) กับ SPSSรุ่นของ windows 15.0 ระดับนัยสำคัญถูกแสดงเป็นค่า p ที่ระดับ 0.053. ผลลัพธ์3.1. ทดสอบ NBTระดับ NBT ได้ n

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในช่วงอุณหภูมิการทดลองระยะเวลาน้ำ pH และความเค็ม
26 ± 1 ° C ที่ 7.7 ± 0.8 และ 31.2 ± 1.3 ‰ ปลามีให้
กับฟีดปกติ (โดยไม่ต้องสารสกัดสมุนไพร) ในอัตรา 5% ของร่างกายของพวกเขา
น้ำหนักวันละสองครั้งเวลา 09:00 และ 15:00 h (ตารางที่ 1).
2.2 Lactuca indica สกัด
ลิตร indica ถูกเก็บรวบรวมจากประเทศในเกาะเชจูเกาหลีใต้และ
ประชาชนทำโดยภาควิชาเทคโนโลยีชีวภาพ, Jeju
มหาวิทยาลัยแห่งชาติ พืชที่ถูกล้างให้สะอาดด้วยการฆ่าเชื้อ
น้ำกลั่น, สีแห้งและเหตุผลในเครื่องบดเครื่องจักรกล
และร่อน ผงถูกร่อนผ่าน 80 μตาข่าย
ผงรวบรวมถูกเก็บไว้ปิดผนึกอยู่ในถุงพลาสติกและเก็บไว้ที่
-20 ° C จนการใช้งาน ผงสมุนไพร (100 กรัม) ผสมกับ 1,000 มล.
95% เอทานอล 2000 มล. ขวดรูปกรวยเก็บไว้ 7 วันที่ห้อง
อุณหภูมิและตื่นเต้นในชีวิตประจำวันเพื่อให้แน่ใจว่าการย่อยอาหารที่สมบูรณ์
สารสกัดถูกกรองผ่าน Whatman ฉบับที่ 2 กระดาษกรองและ
กรองแห้งภายใต้ความกดดันลดลง ตกค้างที่ได้รับหลังจาก
การระเหยของเอทานอลได้รับการเก็บรักษาไว้ในการฆ่าเชื้อสกรูฝาภาชนะแก้ว
และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสจนการใช้งาน.
2.3 การเตรียมอาหารสมุนไพร
อาหารทดลองได้รับการจัดทำขึ้นด้วยที่มีในท้องถิ่น
ส่วนผสมดังแสดงในตารางที่ 1 ส่วนผสมทั้งหมดผสม
อย่างทั่วถึงโดยการเพิ่มน้ำแล้วอัดเม็ดโดยใช้มือ
pelletizer (Xie et al., 2008) และจากนั้นทำให้แห้งที่ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 12 ชั่วโมง สี่
อาหารเม็ดทดลองปรุงด้วย 0.1%, 1.0% และ 2.0% ของ
ลิตร สารสกัดจาก indica พ่นอาหารพื้นฐานอย่างช้า ๆ และอย่างสม่ำเสมอผสมใน
เครื่องผสมกลอง; ฟีดถูกแล้วอากาศแห้งภายใต้สภาวะปลอดเชื้อสำหรับ
12 ชั่วโมง อาหารควบคุมฐาน (0% Extract) ถูกเพิ่มเข้ามาแบบเดียวกับ
ปริมาณของตัวทำละลายโดยไม่ต้องสารสกัด เม็ดแห้งใน
เตาอบที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง, บรรจุและเก็บไว้ในช่องแช่แข็งที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสจน
ใช้ องค์ประกอบใกล้เคียงของอาหารปริมาณต่อไปนี้
วิธี AOAC ประกอบด้วยโปรตีน 53.5% น้ำมันดิบ 8.2% ไขมันดิบ 7.8%
เถ้าน้ำมันดิบและ 14.7% คาร์โบไฮเดรตน้ำมันดิบ.
2.4 Streptococcus iniae
เอส iniae ที่แยกได้จากดิ้นรนมะกอกโรคถูกให้ความกรุณา
โดยศมูนซูฮมหาวิทยาลัยแห่งชาติเชจูสำหรับการศึกษา หุ้น
ถูกปลูกในน้ำซุปถั่วเหลือง tryptic (TSB; Difco ห้องปฏิบัติการ, ประกายไฟ, MD)
เป็นเวลา 24 ชั่วโมงวันที่ 27 องศาเซลเซียสและเก็บไว้แล้วแช่แข็งใน aliquots 200 ไมโครลิตรที่ 70 ° C
วัฒนธรรมได้รับการดำเนินการใน TSB; หลังจากการหมุนเหวี่ยงใสที่ถูก
ทิ้งและเม็ดที่ถูกระงับการใช้งานอีกครั้งในการฆ่าเชื้อฟอสเฟต
น้ำเกลือบัฟเฟอร์ (พีบีเอสพีเอช 7.4) วัฒนธรรมที่ได้รับการปรับให้แสง
ความหนาแน่น 1.2 ที่ 540 นาโนเมตรโดยใช้สเปกเพื่อให้เอส iniae
ระงับ 3.3 × 107 หน่วยอดีตอาณานิคม (CFU) ML-1 หลังจาก 24 ชั่วโมงที่
27 ° C บ่ม แบคทีเรียที่ได้รับการยืนยันทางชีวเคมีที่เกี่ยวข้อง
และการศึกษาในระดับโมเลกุล.
2.5 การออกแบบการทดลอง
การทดลองดำเนินการในถังพลาสติก 200 ลิตรใน
แผนกห้องปฏิบัติการเปียก ปลาถูกแบ่งออกเป็นสี่กลุ่ม
(0%, 0.1%, 1.0% หรือ 2.0%) ของ 25 ปลาในแต่ละเพิ่มขึ้นสามเท่า ปลาถูก
ให้กับการเติมอากาศที่เพียงพอและเลี้ยงในอัตรา 5% ของร่างกาย
น้ำหนักวันละสองครั้งกับอาหารตามลำดับจนถึงจุดสิ้นสุดของ
การทดลอง ในวันที่ 30 ของการให้อาหารทุกกลุ่มถูกฉีด
intraperitoneally (IP) 100 ไมโครลิตรพีบีเอสเอสที่มี iniae ที่
3.3 × 107 CFU ML-1 ในสัปดาห์ที่ 1, 2, 4 และการโพสต์ความท้าทายหกปลา
สุ่มเก็บจากแต่ละถังอสัญญีกับ MS-222
(NaHCO3 และ tricaine methanesulphonate; ซิกสารเคมี) 1: 4000
ในน้ำฆ่าเชื้อด้วยคลอรีนเป็นเวลา 2 นาทีในการเก็บรวบรวมตัวอย่างเลือดสำหรับ
การวิเคราะห์ พารามิเตอร์ของระบบภูมิคุ้มกัน อัตราการตายสะสม
ที่คำนวณได้จากต่อไปนี้แก้ไข (1981) ร้อยละญาติ
อยู่รอด (RPS) ที่คำนวณเป็น: จำนวนที่รอดตายปลาหลังจากที่
ท้าทาย / จำนวนปลาที่ฉีดด้วยแบคทีเรีย) x 100 (Misra, et al.,
2006a b).
2.6 มีเลือดออกและการแยกของซีรั่ม
เลือดจากปลาถูกดึงโดยตรงจากหัวใจกับ
ความช่วยเหลือของเข็มฉีดยาฆ่าเชื้อ 1 มิลลิลิตรใต้ผิวหนังที่มี EDTA เป็น
สารกันเลือดแข็งใช้ 24 เข็มวัด เลือดแยกซีรั่ม
ที่ถูกเก็บรวบรวมได้โดยไม่ต้องสารกันเลือดแข็งในท่อทางภูมิคุ้มกันและเก็บไว้ใน
ตู้เย็นในชั่วข้ามคืน ก้อนได้ปั่นแล้วลงที่ 3000 กรัมสำหรับ
10 นาที ซีรั่มที่เก็บได้ถูกเก็บไว้ในหลอดเซรั่มที่ผ่านการฆ่าเชื้อ
-20 ° C จนใช้สำหรับการวิเคราะห์ ขั้นตอนทั้งหมดได้ดำเนินการใน
สภาพฆ่าเชื้อ หลังจากวาดปลาเลือดที่ได้รับ 1%
รักษา KMnO4 กรมทรัพย์สินทางปัญญาและการปล่อยตัวในถัง.
2.7 ไม่ใช่เฉพาะการตอบสนองภูมิคุ้มกันทดสอบ
กิจกรรมหายใจระเบิดโดยวัดจาก NBT ทดสอบที่
กิจกรรม phagocytic ระดับอิมมูโนรวม, พลาสม่าไลโซไซม์
กิจกรรมในพลาสม่าได้รับการวัดตามวิธีการแก้ไขของ
แอนเดอ Siwicki (1995).
2.8 การวิเคราะห์สถิติ
ข้อมูลทั้งหมดจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SE การวิเคราะห์ทางสถิติของข้อมูล
ที่เกี่ยวข้องกับการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว (ANOVA) ตามด้วย
การเปรียบเทียบวิธีการต่อไปนี้อย่างน้อยดีไซน์สแควร์ (LSD) ด้วยโปรแกรม SPSS
หน้าต่าง 15.0 รุ่น ระดับของความสำคัญคือการแสดงเป็น
p-value ที่ 0.05 ระดับ.
3 ผลการค้นหา
3.1 NBT ทดสอบ
ระดับ NBT ได้ n

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในช่วงระยะเวลาการทดลองทางวิทยาศาสตร์ น้ำ อุณหภูมิ พีเอช และความเค็มจำนวน 26 ± 1 ° C ที่ 7.7 ± 0.8 และที่ 31.2 ± 1.3 ‰ . ปลาที่ได้ให้ไว้กับอาหารปกติ ( สมุนไพร ) ในอัตรา 5 % ของร่างกายของพวกเขาน้ำหนักสองวันที่ 09 : 00 00 และ H ( ตารางที่ 1 )2.2 . ประสิทธิภาพจากสารสกัด3 . รวบรวมข้อมูลจากพื้นที่ในเกาะ Jeju , เกาหลีใต้ และการทำโดยภาควิชาเทคโนโลยีชีวภาพ เจจูมหาวิทยาลัยแห่งชาติ พืชที่ถูกล้างให้สะอาดด้วย เป็นหมันน้ำกลั่น , สีแห้ง และกักบริเวณในเครื่องบดเชิงกลและ ขนาด . ผงขนาดผ่าน 80 μตาข่าย ที่รวบรวมผงที่ถูกเก็บปิดผนึกในถุงพลาสติกและเก็บรักษาที่− 20 ° C จนใช้ ผงสมุนไพร ( 100 กรัม ) ผสมกับ 1000 มล.เอทานอล 95% ใน 2000 ml ขวดกรวยเก็บ 7 D ที่ห้องอุณหภูมิ และปั่นป่วนทุกวัน เพื่อให้แน่ใจว่าการย่อยอาหารที่สมบูรณ์ ที่สารสกัดจาก whatman ถูกกรองผ่านกระดาษกรอง เบอร์ 2 และกรองแห้งภายใต้การลดความดัน หลังจากได้รับสารพิษตกค้างการระเหยของเอทานอลที่ถูกเก็บไว้ในฆ่าเชื้อสกรูฝาขวดแก้วเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 20 ° C −จนใช้2.3 การเตรียมอาหารสมุนไพรอาหารทดลองเตรียมที่มีในท้องถิ่นส่วนผสม ดังแสดงในตารางที่ 1 ผสมส่วนผสมทั้งหมดอย่างละเอียด โดยการเพิ่มน้ำแล้วก็อัดโดยใช้มือpelletizer ( เซี่ย et al . , 2008 ) แล้วอบที่อุณหภูมิ 40 องศา C เป็นเวลา 12 ชั่วโมง สี่อาหารเม็ดทดลองเตรียม 0.1% , 1.0% และ 2.0% ของลิตร ฉีดเพื่อสกัดสารสกัดอาหารแรกเริ่มช้า และผสมกันในผสมกลอง ; อาหารและอากาศแห้งภายใต้สภาวะปลอดเชื้อสำหรับ12 . การควบคุมอาหารฐาน ( 0% Extract ) เพิ่มด้วยเหมือนกันปริมาตรของตัวทำละลายที่ปราศจากสารสกัด เม็ดแห้งในเตาอบที่อุณหภูมิ 30 องศา C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง บรรจุ และเก็บในตู้แช่ที่ 20 ° C จนกว่า บริษัท เวสเทิร์นใช้ โดยวิเคราะห์องค์ประกอบของอาหารปริมาณต่อไปนี้วิธีไม่ประกอบด้วย 53.5 % โปรตีน , 8.2 ดิบไขมัน 7.8%ดิบขี้เถ้า และ 3% Crude คาร์โบไฮเดรต2.4 . iniae ปโตเอส iniae แยกจากโรคได้กรุณาให้ดิ้นรน มะกอกโดย ศาสตราจารย์ มูน ซูโฮ มหาวิทยาลัยแห่งชาติเชจูเพื่อการศึกษา หุ้นปลูกในน้ำซุปถั่วเหลืองอาหาร ( TSB ; ห้องปฏิบัติการ , difco ประกายไฟ , MD )24 H ที่ 27 ° C และจากนั้นเก็บไว้ใน 200 μผมเฉยๆ ที่ 70 องศา C −วัฒนธรรมที่ถูกถ่ายใน TSB ; หลังจากการหมุนเหวี่ยงสูงคือทิ้งและอัตรากำลังที่แขวนลอยในฟอสเฟตปลอดเชื้อน้ำเกลือ ( PBS buffer pH 7.4 ) วัฒนธรรมคือ ปรับแสงความหนาแน่น 1.2 540 nm ใช้วัสดุให้ iniae Sช่วงล่างที่ 3.3 × 107 อาณานิคมสร้างหน่วย ( CFU ) มล. − 1 หลังจาก 24 ชั่วโมงที่27 ° C การบ่ม แบคทีเรียที่เกี่ยวข้องยืนยันทางชีวเคมีโมเลกุลและการศึกษา2.5 การออกแบบการทดลองทดสอบในถังพลาสติก 200 ลิตรในปฏิบัติการเปียกแผนก ปลาแบ่งออกเป็น 4 กลุ่ม( 0% , 0.1% , 1.0 เปอร์เซ็นต์ หรือ 2.0% ) 25 ปลาแต่ละทั้งสามใบ ปลาคือให้อากาศอย่างเพียงพอ และให้อาหารในอัตรา 5% ของร่างกายน้ำหนักสองวันกับแต่ละอาหารไปจนถึงปลายทดลอง ใน 30 วันของการให้อาหาร ทุกกลุ่มถูกฉีดพบ ( IP ) กับ 100 μ L PBS ที่มี iniae ที่ S3.3 × 107 CFU ml − 1 ในสัปดาห์ที่ 1 , 2 และ 4 โพสต์ความท้าทาย , ปลาหกสุ่มเก็บจากแต่ละถังให้ยาสลบโดยกับ ms-222( โซเดี่ยม และ tricaine methanesulphonate ; Sigma 1:4000 สารเคมีใน dechlorinated น้ำ 2 นาทีในการเก็บตัวอย่างเลือดสำหรับวิเคราะห์ค่าพารามิเตอร์ทางภูมิคุ้มกันวิทยา อัตราการตายสะสมคำนวณตามแก้ไข ( 1981 ) ค่าสัมพัทธ์การอยู่รอด ( RPS ) คำนวณได้ เช่น จำนวนปลาหลังรอดตายความท้าทาย / จำนวนของปลาที่ฉีดแบคทีเรีย ) x 100 ( มิสรา et al . ,2006a , B )2.6 เลือดและแยกซีรั่มเลือดจากปลาที่ถูกวาดโดยตรงมาจากหัวใจกับช่วยฆ่าเชื้อ 1 ml hypodermal เข็มฉีดยาที่มี EDTA เป็นเลือดใช้ 24 เข็มวัด เลือดแยกซีรั่มถูกรวบรวมโดยปราศจากเลือดในหลอดที่ผลิตและจัดเก็บในตู้เย็นค้างคืน ลิ่มเลือดก็ปั่นลงมาที่ 3000 G สำหรับ10 นาที เก็บซีรั่มถูกเก็บไว้ในหลอดปราศจากเชื้อเซรุ่ม− 20 ° C จนใช้วิธี . ขั้นตอนทั้งหมดได้ดำเนินการในโดยเงื่อนไข หลังจากวาดเลือดปลาได้รับ 1%การรักษาและเผยแพร่ KMnO4 จุ่มในถัง .2.7 . ไม่พบการตอบสนองภูมิคุ้มกันที่เฉพาะเจาะจงกิจกรรมทางวัดโดยวิธีระเบิด NBT ,กิจกรรมทั้งหมดที่สิ่งแปลกปลอม ระดับอิมมูโนโกลบุลิน พลาสม่าไลโซไซม์กิจกรรมในพลาสมาปริมาณต่อไปนี้ดัดแปลงวิธีแอนเดอร์สัน และ siwicki ( 1995 )2.8 . สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลข้อมูลทั้งหมดจะแสดงเป็นค่าเฉลี่ย±เซ สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว ( ANOVA ) ตามมาด้วยการเปรียบเทียบวิธีการดังต่อไปนี้แบบกำลังสองน้อยที่สุด ( LSD ) ด้วยสถิติเป็น Windows รุ่น ระดับความสำคัญที่แสดงเป็นผลอย่างมีนัยสำคัญที่ระดับ3 . ผลลัพธ์3.1 . ลา สทท.